高琦
- 作品数：11 被引量：21H指数：2
- 供职机构：华南农业大学兽医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金福建省教育厅科技项目龙岩市科技计划项目更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学更多>>
- 不同基因型弓形虫差异表达蛋白质的鉴定及功能预测
- 朱兴全黄思扬周东辉周洋任娣陈佳李中原王培园陈锐钊聂子雄路静徐颖高琦胡玲英刘文阁徐晓佩
- 弓形虫病是由一种专性细胞内寄生的机会性致病原虫弓形虫寄生在人和动物的有核细胞内而引起的一种人兽共患寄生虫病。弓形虫病的防控尚无特效的药物和疫苗，主要原因是对弓形虫病防控的基础研究不足，特别是对不同基因型弓形虫在蛋白质组的...
- 关键词：
- 关键词：弓形虫病人兽共患寄生虫病免疫治疗
- 影响非洲猪瘟病毒对培养细胞感染性的因素分析
- 2023年
- 猪原代肺泡巨噬细胞(PAMs)是非洲猪瘟病毒(ASFV)的主要靶细胞,除宿主单核/巨噬细胞外,ASFV难以在其他体外细胞系中持续生长繁殖。本研究旨在研究影响ASFV在体外感染能力的因素。通过比较ASFV接种易感细胞PAMs和非易感细胞系3D4/21、PK15细胞的全基因组转录谱差异;使用小分子药物改变细胞代谢或周期、物理方法改变细胞黏附;通过荧光定量PCR、Western blot、红细胞吸附检测病毒在3D4/21和PK15细胞系中的增殖情况。结果表明:ASFV接种3D4/21和PK15两种细胞与PAMs细胞的共同差异基因显著富集在细胞黏附、细胞周期和细胞代谢等方面;使用多种调控细胞周期、细胞代谢的小分子药物处理细胞后对ASFV感染PK15和3D4/21细胞的能力无显著影响;通过悬浮培养来调节细胞的黏附后,显著提高ASFV感染PK15和3D4/21细胞的能力,但随着传代次数的增加,病毒的复制能力逐渐下降。综上所述,细胞黏附可能是影响ASFV体外感染能力的重要因素之一,但是改变细胞黏附后并不能维持ASFV的复制能力。本研究为ASFV体外细胞系的建立提供了初步参考。
- 冯永智龚婷吴东东高琦郑晓宇张桂红张桂红
- 关键词：非洲猪瘟病毒
- 弓形虫棒状体颈部蛋白及棒状体蛋白研究的新进展被引量：10
- 2013年
- 刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)是一种专性细胞内寄生原虫。因其复杂的生活史和致病机理,目前尚无有效的专用药物进行治疗。近年来,关于抗弓形虫免疫及疫苗的研究逐步深入,棒状体颈部蛋白(RONs)及棒状体蛋白(ROPs)作为重要的抗弓形虫疫苗的候选抗原分子,广泛应用于新型抗弓形虫疫苗的研究中。本文总结了近几年来弓形虫棒状体颈部蛋白及棒状体蛋白的研究新进展,尤其是这些RONs及ROPs作为新型DNA疫苗分子研究的最新进展。
- 徐颖高琦徐前明朱兴全
- 关键词：刚地弓形虫弓形虫病分子疫苗
- 弓形虫细胞核因子3基因的克隆及序列分析被引量：2
- 2015年
- 为预测弓形虫细胞核因子3(TgNF3)基因作为抗弓形虫疫苗候选抗原的可能性,本试验以弓形虫RH株的总RNA为模板,应用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增TgNF3基因并连接至pMD18-T载体。筛选阳性克隆后,测序鉴定。将测序结果正确的核苷酸序列翻译成氨基酸序列,运用生物信息学软件分析TgNF3蛋白的结构,预测抗原表位。结果显示,TgNF3基因长约950bp。TgNF3蛋白中包含1个跨膜结构域,9个α-螺旋区,4个β-折叠区,8个亲水区域和10个柔性区域,并预测含有9个线性B细胞抗原表位。结果表明,TgNF3蛋白可能具有良好的免疫原性,为研制以TgNF3为抗原的弓形虫亚单位疫苗及表位疫苗奠定了基础。
- 胡玲英张念章高琦朱兴全王寿昆
- 关键词：弓形虫克隆生物信息学分析
- 用于弓形虫感染预防的核苷酸序列及其应用
- 本发明提供用于弓形虫感染预防的核苷酸序列，其含有选自以下任一组核苷酸序列：1）profilin的核苷酸序列；2）profilin、rop16、rop18、MIC6和CDPK3的核苷酸序列；3）profilin和IL15的...
- 黄思扬高琦张念章徐民俊翁亚彪朱兴全
- 文献传递
- 弓形虫DOC2基因C-端的克隆及序列分析被引量：5
- 2014年
- 为研究弓形虫DOC2基因作为弓形虫疫苗候选抗原分子的可行性,本试验用RT-PCR技术扩增DOC2基因编码区的C-端并测序。将该基因片段用生物信息学软件翻译为氨基酸序列后,预测弓形虫DOC2蛋白C-端的生物学特性、高级结构和B细胞抗原表位。结果表明,DOC2基因C-端片段长度为1887bp。将其翻译成氨基酸序列后预测含有11个亲水区域和7个跨膜区。二级结构中含有19个α-螺旋、1个β-转角和17个无规则卷曲。结合柔性区域等分析,DOC2蛋白C-端共含有12个线性B细胞抗原表位。结果表明DOC2蛋白C-端可作为弓形虫疫苗候选分子,为研制新型弓形虫DNA疫苗或表位肽疫苗提供理论基础。
- 高琦张念章胡玲英周东辉朱兴全翁亚彪
- 关键词：弓形虫克隆生物信息学分析
- 弓形虫profilin蛋白基因的克隆表达及序列分析被引量：2
- 2015年
- 为研究弓形虫profilin(prf)蛋白基因的遗传变异规律和表达产物的反应原性,以9个来源于不同宿主和地方的弓形虫虫株基因组DNA为模板,利用PCR方法扩增该基因并测序。将测序结果与从ToxoDB网站下载的4株弓形虫序列一起进行比对分析,用最大简约法绘制系统发育树。再以弓形虫RH株虫体总RNA为模板,使用RT-PCR方法扩增prf基因片段,并将其克隆到原核表达载体pET-30a(+)中,转化入表达菌BL21(DE3)后,使用IPTG进行诱导表达,应用Western-blot对重组蛋白的反应原性进行分析。同时,将弓形虫RH株prf基因编码区序列翻译成氨基酸序列,利用生物信息学软件对其亲疏水性、跨膜结构域、二级结构及B细胞抗原表位进行分析。结果显示,9个弓形虫虫株的prf基因长度均为3 552bp,一致性大于99.5%。系统发育树分析表明,弓形虫虫株的聚类没有规律。SDS-PAGE和Western-blot分析结果显示,Profilin蛋白的分子质量约为30ku,且反应原性较好。蛋白结构预测结果显示,该蛋白含有4个亲水区,无跨膜区,7个α螺旋,8个β折叠,4个β转角,2个无规则卷曲和7个线性B细胞抗原表位。本研究结果表明,弓形虫prf基因可作为抗弓形虫疫苗候选分子。
- 高琦张念章胡玲英朱兴全翁亚彪
- 关键词：弓形虫原核表达B细胞抗原表位
- 非洲猪瘟病毒基因Ⅰ型的双重实时荧光定量PCR检测方法建立被引量：1
- 2023年
- 随着基因Ⅰ型非洲猪瘟(GenotypeⅠASFV)在我国开始流行,使我国对ASF的诊断、预防和控制更具挑战性。本研究使用中国动物疾病预防控制中心(CADC)推荐使用的B646L引物与探针,结合针对GenotypeⅠASFV EP402R基因保守特异性区域设计引物与探针,建立了一种在诊断ASF的同时可对ASFV进行GenotypeⅠASFV鉴别的快速检测方法,并对其灵敏性、特异性进行检测。结果显示,该方法具有良好的灵敏性以及特异性,可有效用于ASFV的临床诊断以及GenotypeⅠASFV的监测。
- 常昊邱英武彭杰高琦宋泽布陈洋李薇林丽苗曹雪珍周庆丰张桂红张桂红郑泽中
- 关键词：非洲猪瘟实时荧光定量PCR
- 理化因素对非洲猪瘟病毒灭活效果的研究被引量：1
- 2023年
- [目的]了解我国非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)的生物学特性及理化抗性,提高猪场生物安全水平以防控非洲猪瘟。[方法]通过红细胞吸附试验和qPCR试验验证不同理化因素(包括静置、温度、UVC照射、室内外干燥、阳光暴晒和消毒剂)对ASFV的灭活效果。[结果]UVC照射30 min即可灭活病毒,照射时间越长,ASFV核酸降解越严重;室内干燥2.5 d、室外干燥1.5 d、阳光暴晒30 min均可灭活ASFV,但不能降解ASFV核酸;常见消毒剂对ASFV的杀灭效果良好,各消毒剂按照推荐稀释浓度室温作用15或30 min,除碘酸混合溶液外均能使ASFV完全失活;温度升高(4、25和37℃)会增强消毒剂的消毒作用;有机物FBS的存在会削弱消毒剂的作用,且随FBS体积分数增加(0、10%和30%)消毒剂的消毒效果会降低。[结论]本文系统研究了常见的理化因素对ASFV灭活效果的影响,有助于全面了解ASFV生物学特性,对非洲猪瘟的防控具有重要指导意义。
- 龚浪孙英硕许润达陈熊男高琦黄钊陈孝军郑佳琛郭彦辰吴芮霞曾凡亮王衡张桂红
- 关键词：非洲猪瘟病毒消毒剂病毒灭活
- 弓形虫胚层发育相关蛋白的原核表达及免疫原性研究被引量：2
- 2014年
- 试验旨在研究弓形虫胚层发育相关蛋白(TgERP)的免疫原性,以弓形虫RH株的基因组DNA为模板,扩增TgERP基因,将其连接于表达载体pET-30a(+)后,转化至Escherichia coli BL21(DE3)感受态细胞进行IPTG诱导表达,应用Western blotting对重组蛋白的反应原性进行分析,并用纯化后的TgERP蛋白免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体。结果显示,在37℃条件下用1.0mmol/L IPTG诱导6h表达可溶性TgERP蛋白的量最大。SDS-PAGE结果显示,目的蛋白分子质量为16.7ku,以可溶形式表达,纯化后蛋白条带单一。经Western blotting分析,TgERP蛋白有较好的反应原性;制备的多克隆抗体效价较高,可达1∶51200,表明该蛋白具有较好免疫原性。提示,TgERP蛋白可作为血清学诊断方法的候选抗原和弓形虫病疫苗的候选分子,为建立弓形虫新型诊断方法和研制新型弓形虫疫苗奠定了基础。
- 田维鹏张念章高琦鲁力朱兴全宋铭忻
- 关键词：弓形虫原核表达免疫原性
