魏勇
- 作品数：19 被引量：33H指数：4
- 供职机构：第三军医大学西南医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金高等学校国家重点实验室和教育部重点实验室访问学者专项基金重庆市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人工锌指蛋白真核表达载体的构建及表达被引量：2
- 2008年
- 目的构建人工锌指蛋白ZFP基因的真核表达载体,检测其在真核细胞的表达情况,从而探讨人工锌指蛋白作为人工转录因子DNA结合域的可能性。方法全基因合成人工锌指蛋白(putative zinc finger protein,ZFP)的核酸序列并克隆入pEGFP-N1及pIRES2-EGFP真核表达载体中,构建重组质粒pEGFP-N1/ZFP及pIRES2-EGFP/ZFP-Flag,通过酶切、菌落PCR及测序来鉴定重组载体的正确性。脂质体DOTAP体外转染重组质粒于COS-7细胞中,用荧光显微镜、RT-PCR、Western blot方法鉴定ZFP在该细胞中的表达。结果正确构建了pEGFP-N1/ZFP、pIRES2-EGFP/ZFP-flag重组表达质粒,并且在COS-7细胞中成功进行了人工锌指蛋白ZFP的表达。结论采用生物信息学手段获得的假定的锌指蛋白基因序列可以在真核细胞内正常表达。
- 魏勇应大君朱楚洪侯春丽崔晓萍
- 关键词：真核表达载体EGFPCOS-7细胞
- 锌指蛋白A20对电磁辐射致毛细胞损伤的保护作用研究
- 目的： 观察腺病毒介导的锌指蛋白A20基因(pAdEeay-1/A20)对电磁辐射(高功率微波,HPM)致豚鼠耳蜗毛细胞损伤后的保护作用。 方法： 建立HPM损伤毛细胞模型,以pAdEeay-1/A20/HPM为实...
- 袁伟张学渊姜振东朱楚宏魏勇
- 关键词：锌指蛋白A20电磁辐射毛细胞损伤诱发电位耳蜗
- 文献传递
- 瑞芬太尼对培养肝细胞缺氧-复氧损伤的保护作用研究
- 研究背景： 随着器官移植的不断开展和深入研究，人们逐渐认识到细胞凋亡在器官移植中具有特殊的生物学意义。研究证实，细胞凋亡是导致肝脏缺血再灌注损伤的重要机制之一，也是影响肝移植成功的关键因素之一。人们以心肌细胞和神经...
- 魏勇
- 关键词：瑞芬太尼肝细胞缺氧-复氧损伤器官移植
- 文献传递网络资源链接
- 胚胎干细胞体外分化为成骨细胞的研究
- 目的:探索鼠胚胎干细胞(ES)体外分化为成骨细胞的培养条件。方法:1.ES细胞培养:ES细胞株D3129/Sv在经丝裂霉素C处理的鼠胚胎成纤维细胞饲养层上培养,培养液成分为:DMEM+15%FCS+LIF(1000IU/...
- 董世武应大君张伟魏勇
- 文献传递
- 基于A20基因为药物靶的人工锌指蛋白转录因子的设计
- 一、研究的背景和目的
A20/(tumor necrosis factor, alpha-induced protein 3,TNFAIP3/)基因是肿瘤坏死因子/(TNF-α/)诱导下的即早反应基因,其表达产物...
- 魏勇
- 关键词：人工转录因子原核表达真核表达ECV304
- 文献传递
- 一种可特异识别Hmox1增强子的人工转录因子的构建
- 2009年
- 目的：设计一种可特异识别人血红素加氧酶-1基因（Hmox1）增强子的人T转录因子。方法：以锌指蛋白（ZFP）作为人工转录因子的DNA结合结构域，在人Hmox1增强子上选择一段序列作为锌指蛋白靶序列，提交Zinc finger tools3.0设计得到该锌指蛋白的氨基酸序列，通过Swiss Model同源建模，对设计结果进行分析；将锌指蛋白与效应结构域相连组成完整的人工转录因子，用双荧光素酶报告基因检测系统检测其活性。结果：得到了能特异识别人Hmox1增强子的锌指蛋白氨基酸序列，同源建模结果显示其空间结构稳定，所构建的完整人工转录因子经双荧光素酶报告基因检测系统检测能特异上调报告基因的表达。结论：设计得到的人工转录因子经实验验证能特异识别人Hmox1增强子并有效上调报告基因的表达，为进一步构建可上调细胞核内Hmox1表达的人工转录因子奠定了基础。
- 郭洪峰魏勇应大君
- 关键词：人工转录因子锌指蛋白同源建模
- 幼龄家猪脑SVZ神经干细胞的分离与鉴定
- ＜正＞ 目的:探索从幼龄家猪脑室下区（SVZ）分离、鉴定神经干细胞的方法,为进一步开展小型猪神经干细胞的研究提供资料。方法:1、用含有bFGF和EGF的无血清培养基及细胞克隆培养方法分离幼龄家猪的脑室下区有克隆能力的细胞...
- 魏勇应大君张伟董世武
- 文献传递
- 小鼠视网膜干细胞的分离与诱导分化
- 目的:研究视网膜干细胞的分离、体外培养方法与增殖、分化规律,以期为视网膜疾病的研究提供基础性资料.方法:(1)应用细胞培养技术,在不同有丝分裂原(bFGF、EGF、胰岛素)作用下,比较胎龄17天昆明小鼠眼的睫状体部(CM...
- 魏勇
- 关键词：视网膜干细胞分化
- 文献传递
- 瑞芬太尼对肝细胞缺氧复氧损伤保护作用的机制研究被引量：3
- 2007年
- 目的探讨瑞芬太尼对缺氧复氧的人肝细胞损伤的作用及其可能的作用机制。方法将培养的人肝细胞分为5组,分别为正常对照(C)组、单纯缺氧复氧损伤(AR)组、瑞芬太尼(R)组、白屈菜红碱(CH)组和混合(R+CH)组,n=6。C组正常培养,其余各组缺氧培养15h,复氧5h,然后收集细胞,进行:①肝细胞线粒体的丙二醛(MDA)含量测定;②用Annexin V/PI染色,于流式细胞仪下计数凋亡细胞的百分数;③提取RNA,以PKC mRNA为目的基因,进行RT-PCR,然后电泳,对条带的吸光值进行比较。结果AR组的MDA含量明显高于C组,R组和CH组的MDA含量介于AR与C组之间(P<0.05)。AR组的肝细胞凋亡率明显高于C组,R组和CH组的肝细胞凋亡率介于AR与C组之间(P<0.05)。AR组的PKC mRNA转录量明显高于C组,R组和CH组的PKC mRNA转录量介于AR与C组之间(P<0.05),R+CH组的PKC mRNA转录量低于C组(P<0.05)。结论瑞芬太尼对缺氧复氧的肝细胞具有保护作用,且可能与其抑制PKC mRNA的转录有关。
- 魏勇顾健腾鲁开智陶国才
- 关键词：瑞芬太尼肝细胞缺氧复氧蛋白激酶C
- 鼠A20基因的腺病毒载体构建及耳蜗毛细胞表达被引量：2
- 2008年
- 目的构建鼠锌指蛋白A20基因的重组腺病毒载体,并观察其对豚鼠耳蜗毛细胞的感染情况。方法采用基因工程技术,经亚克隆后将A20基因片段克隆至穿梭质粒pAdTrack-CMV上,利用pAdEasy系统进行细菌内同源重组后,脂质体转染HEK293细胞包装、扩增,将重组腺病毒感染耳蜗毛细胞。PCR方法对重组体腺病毒进行鉴定,利用穿梭质粒中带有绿色荧光蛋白GFP报告基因对病毒滴度和感染情况进行监测。结果酶切鉴定及PCR结果表明A20基因重组腺病毒载体构建成功,病毒滴度达5×109pfu/mL,并对耳蜗毛细胞有很强的感染能力。结论应用细菌内同源重组法成功构建了含鼠A20基因的重组腺病毒载体。
- 袁伟张学渊侯春丽魏勇朱楚洪
- 关键词：腺病毒A20基因同源重组
