黄东健
- 作品数：2 被引量：1H指数：1
- 供职机构：南京工业大学生物与制药工程学院更多>>
- 发文基金：江苏省“青蓝工程”基金国家自然科学基金预研项目国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 重组N-乙酰鸟氨酸脱乙酰基酶包涵体蛋白的柱上复性被引量：1
- 2008年
- N-乙酰鸟氨酸脱乙酰基酶(NAO)具有广泛的底物选择性,可用于多种活性氨基酸的酶法拆分,具有广阔的工业应用前景。文中采用多种洗涤剂对重组N-乙酰鸟氨酸脱乙酰基酶包涵体进行洗涤去杂,并用DEAE Sepharose Fast Flow层析柱和三缓冲体系作为复性系统对重组N-乙酰鸟氨酸脱乙酰基酶包涵体进行复性实验。结果表明,4mol/L尿素与0.5%Triton X-100联合洗涤可以大量去除杂质;三缓冲体系能有效地实现重组N-乙酰鸟氨酸脱乙酰基酶包涵体的柱上复性。在流速为0.5 mL/min,尿素梯度为21 mL,尿素终浓度为1.8mol/L,蛋白质上样量为0.99 mg的实验条件下,蛋白回收率和复性酶比活分别达到52%和10.27 U/mg。
- 黄东健姚忠刘步云李环
- 关键词：离子交换包涵体复性
- 重组N-乙酰鸟氨酸脱乙酰基酶包涵体的稀释复性被引量：1
- 2008年
- N-乙酰鸟氨酸脱乙酰基酶(N-Acetylornithine deacetylase,NAO)是一种重要的用于手性拆分的酶,具有广泛的底物选择性,常用于多种活性氨基酸的酶法拆分。采用稀释复性法研究了重组NAO包涵体的复性条件,如蛋白浓度、复性液中尿素浓度、pH、GSH浓度及c(GSH)/c(GSSG)比例,同时对稀释操作方式进行了考察,得到了较为适宜的复性条件。结果表明,尿素能有效抑制复性过程中蛋白质的聚集,随着蛋白质浓度的增加,复性效果变差。当复性缓冲液中尿素浓度为2 mol/L,GSH浓度为5 mmol/L,c(GSH)/c(GSSG)为2.5,pH为8.5,在4℃下进行分批稀释复性操作,复性后重组NAO的活性为1.077 U/mL,比酶活达到14.943 U/mg,与可溶性表达的NAO比较,复性率达到21.48%。
- 黄东健姚忠刘步云吴明刚邓海霞
- 关键词：包涵体复性
