丛艳昭
- 作品数：11 被引量：20H指数：3
- 供职机构：延边大学农学院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金“十一五”国家科技攻关计划更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学更多>>
- Asia-I口蹄疫病毒P1-2A基因真核表达质粒的构建及小鼠免疫试验被引量：1
- 2008年
- 目的:构建含有Asia-Ⅰ型口蹄疫病毒(FMDV)衣壳蛋白前体P1-2A基因的真核表达质粒pVAXⅠ-P1-2A,并用pVAXⅠ-P1-2A免疫小鼠,评价其体液免疫和细胞免疫水平。方法:通过RT-PCR方法扩增得到含有FMDVP1-2A编码区的目的基因,并将其克隆到pMD18-T载体上。将pMD18-T-P1-2A和pVAXⅠ分别经EcoRⅤ和XbaⅠ双酶切后连接构建真核表达质粒pVAXⅠ-P1-2A。将酶切鉴定正确后的重组质粒转染HeLa细胞进行IFA检测。再进行小鼠血清特异性抗体试验、小鼠T淋巴细胞增殖试验和IFN-γ ELISPOT试验。结果:酶切结果与预期目的条带大小相符;荧光结果表明经pVAXⅠ-P1-2A转染的细胞有明显的黄绿色荧光,说明P1-2A基因在HeLa细胞中得到了表达;小鼠免疫结果表明,免疫的小鼠都产生了较强的体液免疫和细胞免疫,并且T淋巴细胞增殖数和产生IFN-γ的细胞数和对照组相比显著提高(P<0.05)。间接ELISA试验表明,在免疫第14天抗体水平比对照组明显增高(P<0.05)。结论:成功构建了真核表达质粒pVAXⅠ-P1-2A,并通过小鼠免疫试验发现重组质粒试验组能够诱导产生特异性的体液免疫和细胞免疫应答。
- 牟伟锋金宁一鲁承霍晓伟胡博屈勇刚常巧呈于长勇颜雯丛艳昭曹世诺
- 关键词：FMDV
- 猪附红细胞体病间接ELISA诊断试剂盒的研制及初步应用
- 本研究以纯化的猪附红细胞体特异性抗原作为包被抗原，在建立猪附红细胞体病间接ELISA检测方法的基础上进行了各反应参数的优化，确定了各参数的最适反应条件，并初步组装成试剂盒。组装的试剂盒抗原最佳包被浓度为30μg/mL，被...
- 张守发齐楷贾立军梁晚枫丛艳昭王娜金超
- 关键词：附红细胞体病特异性抗原
- 犬附红细胞体抗原分析被引量：2
- 2009年
- [目的]为了解犬附红细胞体抗原特性。[方法]对犬附红细胞体进行体外培养,培养后对解离的犬附红细胞体经超声波裂解,制备粗提抗原并提纯,对所提抗原进行SDS-PAGE及免疫印迹分析。[结果]犬附红细胞体抗原在电泳图谱上出现了3条主蛋白带,其分子量分别为66、32和25 kD,其中32和25 kD的抗原具有较好的免疫性,且不与犬附红细胞体阴性血清发生交叉反应,具有较好的特异性。[结论]该研究为犬附红细胞体的抗原成分及犬附红细胞体病的免疫学诊断等研究奠定了基础。
- 齐楷贾立军张守发梁晚枫丛艳昭王娜金超
- 关键词：犬附红细胞体抗原分析免疫印迹
- 猪附红细胞体病间接ELISA诊断试剂盒的研制及初步应用
- 本研究以纯化的猪附红细胞体特异性抗原作为包被抗原,在建立猪附红细胞体病间接ELISA检测方法的基础上进行了各反应参数的优化,确定了各参数的最适反应条件,并初步组装成试剂盒。组装的试剂盒抗原最佳包被浓度为30μg/mL,被...
- 张守发齐楷贾立军梁晚枫丛艳昭王娜金超
- 关键词：猪附红细胞体间接ELISA试剂盒
- 文献传递
- 反转录病毒载体介导的EGFP基因在SP2/0小鼠骨髓瘤细胞中的表达被引量：1
- 2011年
- 为了构建携带报告基因增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因的反转录病毒载体,并观察EGFP基因在SP2/0小鼠骨髓瘤细胞中的表达情况。试验将增强型绿色免疫荧光基因片段定向插入反转录病毒载体pFB-neo,获得重组反转录病毒质粒pFB-NE,利用三质粒共转染系统,将含有目的基因的重组反转录病毒质粒pFB-NE以及含有辅助病毒gag-pol和env基因的质粒pVPack-GP、pVPack-10A1共转染HEK-293细胞,用产生的重组反转录病毒感染小鼠骨髓瘤细胞SP2/0,并在荧光显微镜下观察EGFP基因的表达。结果表明:重组反转录病毒载体pFB-NE构建正确,重组病毒包装成功,EGFP基因在细胞中能够稳定表达。
- 王婧李昌李林溪胡博丛艳昭任大勇王卓越杜寿文金宁一
- 关键词：反转录病毒载体
- 口蹄疫病毒多价DNA疫苗的构建及其免疫原性被引量：7
- 2008年
- 目的构建口蹄疫病毒(FMDV)多价DNA疫苗,并检测其免疫原性。方法以复合多表位表达盒OAAT及AsiaⅠ型FMDV的P1-2A-3C基因为基础,构建FMDV多价DNA疫苗pIRES-OAAT-P1-2A-3C,并用间接免疫荧光(IFA)方法检测目的蛋白在HeLa细胞中的表达。进一步进行小鼠免疫试验,并应用ELISA法检测小鼠血清抗体,ELISPOT检测小鼠脾淋巴单细胞IFN-γ的分泌水平,流式细胞术检测脾T淋巴细胞亚群数量,淋巴细胞转化试验检测特异性淋巴细胞增殖水平。结果所构建的FMDV多价DNA疫苗在HeLa细胞中获得了正确表达。免疫小鼠后,血清特异性抗体水平、脾淋巴单细胞IFN-γ的分泌、脾T淋巴细胞亚群CD4+和CD8+的数量及特异性淋巴细胞增殖水平均显著提高。结论已成功构建了FMDV多价DNA疫苗,并诱导小鼠产生了特异性的细胞免疫和体液免疫应答。
- 常巧呈霍晓伟李太元金宁一鲁会军郑敏谷长维牟伟锋胡博于长勇马鸣潇丛艳昭
- 关键词：口蹄疫病毒多价DNA疫苗体液免疫细胞免疫
- 治疗用质粒DNA的纯化工艺被引量：6
- 2008年
- 目的探索适合大规模生产治疗用质粒DNA的纯化工艺。方法采用中空纤维柱收菌、碱裂解,再应用中空纤维柱浓缩质粒,经分子筛、亲和、离子交换等层析分离纯化质粒DNA,并应用凝胶电泳、PCR、核酸蛋白检测仪、BCA蛋白检测试剂盒和内毒素检测试剂盒对所纯化的质粒DNA进行全面检定。结果所获得的超螺旋质粒DNA达到样品总质粒的91.2%;质粒DNA总纯度为1.8;内毒素含量小于10EU/mg;几乎检测不到蛋白质残留,未检出基因组DNA残留。各项指标均符合有关质量标准。结论所采用的纯化工艺省时省力,制备的质粒DNA纯度高,适用于大规模生产治疗用质粒DNA。
- 丛艳昭鲁承金宁一申镇维梁晓枫金洪涛白靓牟伟锋于长勇常巧呈齐楷金明杰
- 关键词：质粒DNA纯化层析
- 国内不同基因型Asia1型口蹄疫病毒RT-PCR检测方法的建立
- 2009年
- 目的建立口蹄疫病毒(FMDV)Asia1型江苏/05谱系及新疆/03谱系毒株的二联RT-PCR检测方法。方法在比较大量国内外FMDV流行毒株序列的基础上,设计检测不同基因型Asia1型FMDV江苏/05谱系及新疆/03谱系毒株的二联PCR引物,优化单项和二联RT-PCR反应条件,并进行特异性及相关病毒检测。结果优化的单项和二联RT-PCR特异性均良好,检测9份FMDV,病料的结果与其基因序列测定结果完全一致。结论已建立了FMDVAsia1型江苏/05谱系和新疆/03谱系毒株的二联RT-PCR检测方法,为FMDV的诊断、流行病学调查及疫苗应用奠定了基础。
- 于长勇金宁一王春凤鲁会军胡博刘昊张丹牟伟锋丛艳昭谷长维常巧呈刘存霞颜雯叶明
- 关键词：口蹄疫病毒RT-PCR
- 猪附红细胞体病间接ELISA诊断试剂盒的研制及初步应用
- 2010年
- 以纯化的猪附红细胞体特异性抗原为包被抗原,在建立猪附红细胞体病间接ELISA检测方法的基础上对各反应参数进行了优化,并初步组装成试剂盒。组装的试剂盒抗原最佳包被质量浓度为30 mg/L,被检血清稀释度为1∶100,酶标二抗的最适工作滴度为1∶4 000,底物TMB最适反应条件为室温15 min;检测血清的判定标准为D450值≥0.13定为阳性反应,D450值≤0.11定为阴性反应,0.11~0.13定为疑似反应;该试剂盒不与猪大肠杆菌病、猪弓形虫病及猪瘟等阳性血清发生交叉反应,具有较好的特异性;在不同时间对阴阳性样品重复检测8次,阴阳性血清的D450值变异系数均未超过10%,说明该试剂盒具有良好的重复性;通过对组装试剂盒中各组分的稳定性和保存时间的测定结果证实,该试剂盒的保质期暂定为6个月;应用保存6个月的试剂盒通过对吉林省延边地区的60份猪血清样本检测,并与间接ELISA比较,其阳性符合率达100%,说明该试剂盒具有较好的稳定性。
- 张守发齐楷贾立军梁晚枫丛艳昭
- 关键词：猪附红细胞体间接ELISA试剂盒
- 反转录病毒介导的稳定表达HIV-1 Gag蛋白和增强型绿色荧光蛋白细胞系的建立被引量：4
- 2011年
- 本研究旨在建立中国流行株人免疫缺陷病毒(HIV-1)衣壳蛋白(Gag)哺乳动物稳定表达细胞系。将HIV-1核心蛋白基因gag和增强型绿色荧光蛋白基因EGFP依次串联插入反转录病毒载体pFB-neo,构建重组反转录病毒载体pFB-gag-EGFP,并与含有辅助病毒gag-pol和env基因的质粒pVPack-GP、pVPack-10A1共转染HEK293T细胞,包装出的反转录病毒感染小鼠骨髓瘤细胞SP2/0。荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白EGFP表达,验证HIV-1核心蛋白Gag表达,G418抗性筛选阳性细胞。结果表明,HIV-1核心蛋白Gag和增强型绿色荧光蛋白可在SP2/0细胞中稳定表达,HIV-1核心蛋白gag基因稳定表达细胞系成功建立,为抗AIDS治疗用基因工程制剂及靶向药物的活性检测提供了理想方法。
- 王婧李昌李林溪胡博丛艳昭任大勇王卓越杜寿文金宁一
- 关键词：反转录病毒载体人免疫缺陷病毒核心蛋白增强型绿色荧光蛋白
