- 提高病理生理学实验带教质量的几点建议被引量：4
- 2001年
- 病理生理学是一门实践性很强的学科，实验教学是病理生理教学的一个重要组成部分，由于时间和经费的限制以及现行的考核体制，使得相当一部分学生不重视实验课。教员如不注理教学方式就不能很好地达到实验教学的目的。本文以实验带教过程中的一些经验体会，从教学方式的角度探讨在现有条件下提高病生实验教学质量的几点建议。
- 严俊
- 关键词：病理生理学实验教学教学方式实习带教
- PYK_2小干扰RNA对成年大鼠心脏成纤维细胞增殖的影响被引量：1
- 2005年
- 目的以富含脯氨酸的酪氨酸激酶2(PYK2)为靶基因,设计并构建短发夹状小干扰RNA表达载体,探讨PYK2小干扰RNA表达载体对心脏成纤维细胞(cardiac fibroblasts,CFs)增殖的影响。方法以pAVU6+27质粒为载体,以PYK2为靶基因,设计并构建短发夹状小干扰RNA表达载体,行酶切和测序鉴定。用PYK2短发夹状小干扰RNA表达载体转染体外培养的成年大鼠心脏成纤维细胞,反转录聚合酶链反应和Westernblot法检测PYK2基因和蛋白表达的改变,四唑盐比色法和3H-TdR掺入率检测转染后细胞的增殖和DNA合成情况。结果酶切鉴定和测序分析表明靶向PYK2的RNA干扰重组体构建成功;重组体转染CFs后,PYK2的mRNA和蛋白水平较空载体转染的对照组显著下降;重组体转染CFs后MTT比色A值和3H-TdR掺入率均明显低于对照组。结论PYK2小干扰RNA表达载体是抑制心脏成纤维细胞增殖和DNA合成的有效手段,有利于深入探讨PYK2在心肌纤维化发生发展中的作用。
- 郝嘉严俊肖颖彬
- 关键词：PYK2RNA干扰心脏成纤维细胞
- 缺氧时大鼠心脏成纤维细胞与细胞外基质相互作用及机制的研究
- 在高原环境下,机体缺氧可引发以右心室肥大为主的心肌组织结构改变,最终发展为高原心脏病。高原心脏病是高原地区的多发病,而我国是世界上高原地域最辽阔、居住人口最多的国家,因此关于高原心脏病发生机制和防治的研究在我国具有特别重...
- 严俊
- 关键词：缺氧高原心脏病心肌重塑心脏成纤维细胞细胞外基质纤维粘连蛋白
- 文献传递
- 粘附斑激酶家族新成员Pyk2的研究进展被引量：1
- 2005年
- 富含脯氨酸的酪氨酸激酶2(proline-rich tyrosine kinase2,Pyk2),又称细胞粘附激酶β(CAKβ)、相关粘附聚焦酪氨酸激酶(RAFTK),是粘附斑激酶(focal adhesion kinase,FAK)家族的新成员,与FAK具有高度同源性.Pyk2活化可催化多种含SH2结构域的底物蛋白磷酸化,涉及到多条信号传导通路,包括离子通道的调节、细胞生长增殖分化和细胞凋亡等,但其功能机制至今尚不清楚.
- 郝嘉严俊肖颖彬
- 关键词：蛋白质酪氨酸激酶蛋白激酶类心血管疾病
- 低氧促进大鼠心脏成纤维细胞胶原蛋白合成被引量：3
- 2005年
- 目的研究低氧(2%氧)对成年Wistar大鼠心脏成纤维细胞胶原蛋白合成、总蛋白合成及Ⅰ、Ⅲ型胶原前α肽链mRNA表达的影响。方法分离培养成年Wistar大鼠心脏成纤维细胞,采用液体闪烁计数方法检测心脏成纤维细胞胶原酶敏感的3H-脯氨酸掺入率来观察细胞胶原蛋白合成变化,并检测3H-亮氨酸掺入率观察细胞总蛋白合成的变化,采用RT-PCR检测Ⅰ、Ⅲ型胶原前α肽链mRNA的表达。结果成年Wistar大鼠心脏成纤维细胞在低氧第24、48小时胶原酶敏感的3H-脯氨酸掺入率较常氧组显著增加,分别增加132%(P<0.05)和163%(P<0.01);低氧12h起Ⅰ、Ⅲ型胶原前α肽链mRNA表达显著高于常氧培养的细胞。结论低氧能够直接促进体外培养的成年Wistar大鼠心脏成纤维细胞胶原蛋白合成和Ⅰ、Ⅲ型胶原前α肽链mRNA的表达,提示低氧对心脏成纤维细胞胶原合成代谢的直接调节可能是低氧性心肌纤维化的重要机制。
- 严俊高钰琪张恒王培勇谢增柱
- 关键词：低氧心脏成纤维细胞胶原
- 成年大鼠心脏成纤维细胞的分离培养被引量：14
- 2001年
- 目的 建立成年大鼠心脏成纤维细胞的离体培养模型。方法 以组织块消化法分离细胞,以差数贴壁法去除其它细胞,常规培养、传代,免疫组化染色进行细胞鉴定并绘制生长曲线观察细胞传代后成纤维细胞的基本特征及生长特性的变化。结果 第2～4代细胞生长良好、稳定,波形蛋白染色阳性,Ⅷ因子相关抗原及肌动蛋白染色阴性。结论 组织块消化法是一种适用于成年大鼠心脏成纤维细胞分离培养的简便方法,第2～4代细胞适于实验。
- 严俊高钰琪谢增柱
- 关键词：心脏成纤维细胞细胞培养
- 低氧促进大鼠心脏成纤维细胞DNA合成及Ⅰ、Ⅲ胶原mRNA表达被引量：4
- 2004年
- 目的 :研究低氧 (2 %氧 )对成年Wistar大鼠心脏成纤维细胞DNA合成及Ⅰ、Ⅲ型胶原前α肽链表达的影响。方法 :分离培养成年Wistar大鼠心脏成纤维细胞 ,采用液体闪烁计数方法检测心脏成纤维细胞的DNA合成速率 ,采用原位杂交技术检测Ⅰ、Ⅲ型胶原前α肽链mRNA的表达。结果 :成年Wistar大鼠心脏成纤维细胞在低氧第 6h、12h时3 H TdR掺入量较常氧组显著增加 ,分别增加 34% (P <0 .0 5 )和 36 % (P <0 .0 1) ;低氧第 4h、8h、12hI型胶原前α肽链mRNA表达显著高于常氧培养的细胞 ;低氧第 2h ,Ⅲ型胶原前α肽链mRNA表达显著高于常氧培养的细胞。结论 :低氧能够直接促进体外培养的成年Wistar大鼠心脏成纤维细胞DNA合成和Ⅰ、Ⅲ型胶原前α肽链表达 ,提示低氧对心脏成纤维细胞生长和胶原表达的直接调节可能是低氧性心肌纤维化的重要机制。
- 严俊高钰琪谢增柱
- 关键词：低氧心脏成纤维细胞胶原
- RNA干扰技术沉默黏附斑激酶诱导心脏成纤维细胞失巢凋亡被引量：3
- 2006年
- 目的:利用短发夹RNA干扰载体介导的RNA干扰技术沉默成年大鼠心脏成纤维细胞中黏附斑激酶,观察细胞增殖和凋亡的变化。方法:实验于2004-12/2005-12在解放军第三军医大学新桥医院中心实验室完成。实验选用10～12周龄清洁级的雄性Wistar大鼠24只,以转染靶向黏附斑激酶的重组RNA干扰质粒的心脏成纤维细胞为干预组,选择未转染细胞和转染空质粒、非特异siRNA的细胞为不同对照组,共4组,各6只。消化法培养大鼠心脏成纤维细胞,设计、构建和鉴定黏附斑激酶RNA干扰载体,westernblot法测量黏附斑激酶的沉默效率,四唑盐比色法检测细胞增殖,DNA缺口末端标记技术检测细胞凋亡,流式细胞仪测定B细胞淋巴瘤2和bax的变化。结果:Wistar大鼠24只,全部进入结果分析。①酶切鉴定和测序鉴定表明黏附斑激酶RNA干扰载体构建成功,转染细胞后,Westernblot结果表明第二个重组黏附斑激酶RNA干扰载体的RNA沉默效率最高,为72.1%,其余分别为66.2%和55.3%。②Pavu6+27-黏附斑激酶2转染组A490值明显低于未转染细胞和转染空质粒、非特异siRNA组(0.179±0.017,0.30±0.002,0.296±0.006,0.281±0.007;t=17.802,16.436,14.993,P<0.01);凋亡率较其余各组则明显升高犤(22.28±2.13)%,(4.72±1.67)%,(6.36±0.92)%,(8.19±1.33)%;t=-19.05,-17.31,-15.16,P<0.01犦。③Pavu6+27-黏附斑激酶2转染组bax上升明显,与正常对照组和空质粒转染组比较,差异十分显著(2.15±058,1.01±0.04,1.12±0.04;t=-4.79,-4.318,P<0.01);与阴性对照组比较,差异显著(1.19±0.31,t=-3.59,P<0.05)。④Pavu6+27-黏附斑激酶2转染组B细胞淋巴瘤-2表达较正常对照组、空质粒转染组、阴性对照组显著上升(1.62±0.15,1.04±0.03,1.09±0.01,1.23±0.04;t=-9.39,-8.701,-6.338,P<0.05)。结论:通过RNA干扰技术沉默心脏成纤维细胞中黏附斑激酶基因的表达,可诱导心脏成纤维细胞凋亡,抑制或降低心脏成纤维细胞中黏附斑激酶表达可能是防
- 郝嘉严俊郭红肖颖彬
- 关键词：转录脱噬作用
- 低氧对成年大鼠心脏成纤维细胞表型的影响被引量：4
- 2005年
- 目的研究低氧(2%氧)对成年Wistar大鼠心脏成纤维细胞表型的影响。方法分离培养成年Wistar大鼠心脏成纤维细胞,采用免疫细胞化学染色检测肌成纤维细胞的典型标记———α平滑肌肌动蛋白,用液体闪烁计数方法检测心脏成纤维细胞胶原酶敏感的3H脯氨酸掺入率来观察细胞胶原蛋白合成变化,并检测3H亮氨酸掺入率观察细胞总蛋白合成的变化。结果低氧24h、48h时,成年Wistar大鼠心脏成纤维细胞的α平滑肌肌动蛋白表达较常氧组显著增强;同时细胞胶原蛋白合成速率亦显著增加,在低氧第24h、48h胶原酶敏感的3H脯氨酸掺入率较常氧组分别增加132%(P<0.05)和163%(P<0.01)。结论低氧能够促进成年Wistar大鼠心脏成纤维细胞向肌成纤维细胞表型转换。
- 严俊翟羽张恒王培勇高钰琪谢增柱
- 关键词：低氧成纤维细胞肌动蛋白类表型
- 缺氧促进大鼠心脏成纤维细胞表型转化
- 目的与方法:采用免疫组化和液体闪烁计数的方法分别检测α-平滑肌肌动蛋白的表达、胶原酶敏感的H-脯氨酸结合率、以及H-亮氨酸结合率,以观察缺氧(2%O)对离体培养的成年Wistar大鼠心脏成纤维细胞功能的影响。结果:成年W...
- 严俊高钰琪张恒陈莉王培勇
- 关键词：缺氧心脏成纤维细胞肌成纤维细胞表型转化
- 文献传递
