何丽芳
- 作品数：6 被引量：16H指数：2
- 供职机构：湖南大学化学化工学院化学生物传感与计量学国家重点实验室更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家科技攻关计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学自动化与计算机技术更多>>
- 分子信标用于p53 mRNA的体外定量检测被引量：9
- 2006年
- 根据p53基因的序列设计并合成了能特异性检测p53mRNA的分子信标(MB),发展了一种快速定量测定细胞内总RNA提取物中p53mRNA的方法.采用鼻咽癌(CNE2)细胞系和经RNA干扰技术降低p53基因表达的CNE2-p53RNAi细胞系,抽提总RNA并用MB检测,验证了MB的检测对象是p53mRNA.将该方法应用于多种肿瘤细胞内p53基因表达水平的分析,表达变化趋势与经典的mRNA分析方法RT-PCR检测结果相符.在此基础上,用MB对5-氟尿嘧啶(5-Fu)处理的肺腺癌细胞(A549)进行了p53mRNA的体外定量检测,结果表明采用MB能够快速地获知该药物对细胞内p53mRNA表达影响的信息.
- 何丽芳唐红星王柯敏谭蔚泓刘斌孟祥贤李军王炜
- 关键词：分子信标P53RNA干扰5-氟尿嘧啶
- 分子信标荧光探针快速检测p21mRNA的新方法
- 2005年
- 1996年美国科学家首次设计并合成了一种新型荧光探针--分子信标(MB)[1],它是一种同时带有荧光基团和熄灭基团的发夹型单链DNA分子,能对目标DNA或RNA分子产生特异性的识别.由于具备了良好的检测性能,并且杂交以后无须分离多余的未杂交探针,MB在生物医学中得到了广泛的应用,如基因芯片的制备、痕量核酸的分离、活体细胞中mRNA的监测等[2].目前,检测mRNA的手段主要依靠RT-PCR,但是从反转录到PCR以及再次扩增是一个较麻烦的过程,实验成本高、周期长,也常出现假阳性和假阴性问题,影响了其准确性.
- 王炜李军王柯敏刘斌唐红星何丽芳
- 关键词：分子信标荧光探针生物医学
- 基于分子探针的肿瘤细胞p53 mRNA定量检测及点突变检测研究
- 恶性肿瘤是严重威胁人类健康的疾病之一,越来越多的研究表明恶性肿瘤发生过程与细胞内相关基因表达水平的改变具有密切联系。因此,建立快速、准确、灵敏检测基因表达水平的方法,对于肿瘤的发病机理研究、早期诊断和治疗具有重要意义。本...
- 何丽芳
- 关键词：分子探针分子信标P53点突变5-氟尿嘧啶
- 文献传递
- 超滤法处理改善小鼠单抗的固定化效果
- 2007年
- 商品化小鼠单抗试剂中普遍添加了高浓度的保护蛋白,如牛血清白蛋白(BSA),这给抗体的固定化带来了严重的干扰。本研究基于超滤技术发展了一种超微量抗体试剂(用量为10μL,约含2μg抗体、100μgBSA)预处理方法,能有效去除商品化抗体试剂中的高浓度BSA,使微珠表面固定化小鼠单抗的数量显著提高,并在蛋白质检测中得到了较好的结果,为缓解抗体产品供应现状对蛋白质芯片研究工作的制约提供了一条简单实用的途径。
- 陈韵晴羊小海王柯敏何丽芳
- 关键词：抗体固定化超滤蛋白质芯片
- p53及p21^(waf1)蛋白表达与人舌癌细胞多药耐药性的关系被引量：6
- 2006年
- 目的探讨p53及p21waf1蛋白表达与人舌癌细胞系Tca8113多药耐药性(MDR)的关系。方法采用脂质体介导的转染技术,将野生型p53(wt-p53)基因导入人舌癌耐药细胞系Tca8113/BLM;分子信标(Molecular Beacon)法检测人舌癌细胞系Tca8113及其耐药细胞系Tca8113/BLM中p53基因的mRNA水平;W estern blot检测亲本、耐药细胞和转染细胞中p53、p21waf1、P-gp和MRP蛋白的表达变化;MTT法检测不同细胞的药物敏感性,流式细胞仪检测细胞周期的改变,激光共聚焦显微镜观察细胞凋亡。结果在人舌癌耐药细胞系Tca8113/BLM中p53基因的表达明显下调,并且未检测到p21waf1蛋白的表达;转染了wt-p53的耐药细胞Tca8113/BLM/p53中p53和p21waf1蛋白表达均显著上调,而P-gp和MRP的蛋白表达则明显下调,其对药物BLM的敏感性增加10.1倍(P<0.01);转染细胞的周期也发生改变,G2期细胞增加,G1和S期细胞减少,转染细胞明显出现凋亡。结论人舌癌耐药细胞系Tca8113/BLM多药耐药性的产生,可能通过p53和p21waf1的表达下调使得多药耐药性相关蛋白P-gp和MRP表达上调来实现。
- 何春梅刘斌王柯敏唐红星何丽芳李惠敏
- 关键词：舌肿瘤蛋白质P53
- 基于分子信标荧光增强速率检测活细胞内p21 mRNA表达被引量：1
- 2007年
- 根据肿瘤抑制基因p21序列设计合成分子信标,通过显微操作将其注入p21表达水平存在差异的两种鼻咽癌细胞内,以活细胞成像方式动态检测了分子信标进入鼻咽癌细胞后荧光信号的变化.p21分子信标注入两种细胞后,荧光信号均逐渐增强,约15min后达到最大值;注入细胞后4min内,细胞间荧光增强速率存在明显差异,该差异反映了p21mRNA表达水平的变化趋势,与常规逆转录PCR(RT-PCR)结果相符.在使用分子信标进行活细胞内mRNA表达水平的研究中,通过分析荧光增强速率的变化,可有效降低细胞内的酶的影响,提高检测结果的准确性.
- 唐红星羊小海王柯敏谭蔚泓刘斌何丽芳王炜
- 关键词：分子信标P21鼻咽癌细胞活细胞成像
