何建勇
- 作品数：69 被引量：231H指数：8
- 供职机构：沈阳药科大学生命科学与生物制药学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学自动化与计算机技术理学更多>>
- 1株土壤放线菌的分类鉴定及其抗菌活性的研究被引量：3
- 2010年
- 对从土壤微生物中筛选到的放线菌菌株1356进行分类学和抗菌活性的研究。采用多相分类法,对菌株的形态特征、培养特征、生理生化特性及16 SrRNA基因序列进行了研究。结果表明:该菌株的形态特征、培养特征、生理生化特性为链霉菌属的特征;16S rDNA序列分析及系统进化树分析表明其序列与灰色产色链霉菌的同源性最高;该菌株的发酵产物对番茄叶霉、白色念珠菌、小麦根腐菌等17种真菌均有不同程度的抑制作用。放线菌1356菌株具有广谱抗真菌活性而对细菌无作用;初步确定其为链霉菌属灰色产色链霉菌的一个亚种。
- 陈雪婷郭婷婷田威何建勇
- 关键词：放线菌菌株鉴定RDNA真菌
- 平滑青霉或者疣孢漆斑菌及用其制备人参皂苷F<Sub>1</Sub>的方法
- 本发明公开了生物转化制备人参皂苷F<Sub>1</Sub>的两个菌株和用其改变三醇型人参皂苷糖基制备人参皂苷F<Sub>1</Sub>的方法。选取具有水解人参皂苷的活性菌株，人参皂苷F<Sub>1</Sub>采用需氧发酵...
- 张怡轩王金辉吴春福何建勇吴秀丽
- 酮古龙酸菌细胞色素c基因的克隆及表达
- 2010年
- 目的:从酮古龙酸菌SCB329中分离细胞色素c(Cytc)相关基因,在大肠杆菌中进行表达并验证。方法:根据酮古龙酸菌SCB329基因组序列设计引物,通过PCR从SCB329基因组中扩增cytc基因,酶切后连接pET22b表达载体,转化至大肠杆菌DH5α后提取质粒,经PCR、质粒双酶切及测序鉴定后,转入大肠杆菌BL21(DE3),并对表达条件进行考察;用Chelating Sepharose珠粒对可溶性的Cytc-His融合蛋白进行纯化;经光谱扫描和血红素染色等方法对表达蛋白定性分析。结果:PCR扩增的cytc基因长513 bp;重组菌在IPTG浓度为0.025 mmol/L的条件下,于28℃诱导10 h后,SDS-PAGE分析可见表达条带,相对分子质量约为18×103;Ni柱亲和层析纯化得到目的蛋白,纯化蛋白经光谱扫描呈现Cytc特征峰,血红素染色呈现阳性结果。结论:从酮古龙酸菌SCB329中分离得到一种cytc基因,并表达纯化了融合蛋白Cytc-His,纯化蛋白呈现Cytc特性,为研究酮古龙酸菌中产酸关键酶的电子传递机制奠定了基础。
- 贾宁熊向华赵岩汪建华何建勇张惟材
- 关键词：细胞色素C电子传递
- 兽用抗生素诺西肽(nosiheptide)的研究进展被引量：6
- 2004年
- 诺西肽 (nosiheptide)是我国近年批准使用的兽用抗生素 ,由于其具有显著的抑制革兰氏阳性细菌、促进动物生长、在动物体内无残留等特点 ,因而作为饲料添加剂在畜牧业得到了越来越广泛的应用。文章就其理化性质 ,作用机制 ,生物合成途径 ,生物合成基因克隆 ,菌种选育与发酵工艺研究 ,检测方法 。
- 韩果红楼双凤王晶何建勇
- 关键词：兽药饲料添加剂
- 甲基营养菌MP688中启动子探针载体的构建被引量：2
- 2012年
- 目的:以半乳糖苷酶基因作为报告基因,构建适于探测甲基营养菌MP688启动子的载体。方法:通过PCR扩增半乳糖苷酶基因片段,连入质粒pCM66构建启动子活性探针载体pMPlacZ。根据MP688的基因组序列设计引物,通过PCR扩增5个pqqA基因、核糖体亚基A基因(rpsA)、核糖体亚基B基因(rpsB)、伴侣分子groel基因和甲醇脱氢酶基因(mdh)等共9个基因的启动子序列,将这9个启动子片段连入pMPlacZ进行活性测定。结果:构建了一个适于探测甲基营养菌MP688的启动子活性的载体pMPlacZ;利用构建的报告系统对MP688中9个基因的启动子进行了活性比较,得到3个与吡咯喹啉醌合成相关的强启动子。结论:构建的启动子活性检测载体可以有效、灵敏地用于MP688强启动子的筛选和启动子活性检测。
- 杜宝华葛欣王文溪熊向华汪建华何建勇张惟材
- 关键词：甲基营养菌半乳糖苷酶
- 5-酮基avermectin基因工程菌的构建被引量：3
- 2008年
- 采用基因插入失活的方法,将1.5kb安普霉素抗性基因插入1.8kb aveF基因内部SalI位点,构建重组质粒pPC-5,并转化除虫链霉菌D2-14,获得基因工程菌株AV-F1。经HPLC分析,发现该菌株主要产生两个组分,分别为5-酮avermectin 1a和5-酮avermectin 2a,还产生一个小组分为acermectin B1a。5-酮avermectin基因工程菌株的构建成功,为化学合成新的avermectin衍生物提供了可利用的原料来源。
- 马颖谡何建勇张怡轩
- 关键词：除虫链霉菌AVERMECTIN基因失活
- 阿卡波糖产生菌原生质体的制备与再生被引量：1
- 2008年
- 目的研究阿卡波糖产生菌原生质体制备与再生的条件。方法通过溶菌酶破壁的方法制备原生质体,考察影响原生质体制备与再生的因素。结果和结论确认原生质体的制备条件为:一级培养采用SM2液体培养基,培养时间为33 h,转二级培养的转种体积分数为15%;二级培养采用R2YE培养基,培养时间为20 h,甘氨酸质量分数为0.7%;溶菌酶作用质量浓度为3 g.L-1,作用时间100 min,最大原生质体制备量达到8×1010个.L-1。考察了原生质体再生培养基的组成,在优化的再生培养基上,再生率达到9.2%。
- 郑斐马妮田威陈光何建勇
- 关键词：阿卡波糖原生质体制备原生质体再生
- 甲基营养菌MP688基因组完成图构建
- 2011年
- 目的:在Solexa测序建立的甲基营养菌MP688基因组精细图的基础上,构建MP688基因组完成图。方法:根据MP688基因组序列设计引物,进行常规PCR扩增,填补Scaffold内部缺口;利用BLASTN、BLAT软件分析预测6个Scaffold定位关系;通过组合PCR、长距离PCR等填充Scaffold间的物理缺口。结果:常规PCR填充Scaffold内部4个缺口;BLASTN、BLAT软件分析预测了Scaffold定位关系;组合PCR填充Scaffold间的2个物理缺口,长距离PCR填充其余4个物理缺口。结论:得到了MP688的基因组完成图,为MP688的吡咯喹啉醌生物合成途径的阐明和进一步的代谢工程育种奠定了基础。
- 智静娟熊向华何建勇汪建华何涛张惟材
- 关键词：甲基营养菌
- 一株银杏内生真菌代谢产物的初步研究被引量：7
- 2007年
- 从银杏树皮内侧分离纯化获得6种类27株内生真菌。使用TLC、HPLC、HPLC/ESI-MSn方法对上述真菌胞内代谢产物进行研究,最终发现1株真菌菌株G3B经发酵后产生银杏内酯B等成分。经形态学初步鉴定该菌株为镰孢菌属(Fusarium)真菌。
- 易大为张怡轩何建勇赵文倩吴春福
- 关键词：银杏内生真菌银杏内酯白果内酯
- 棒状链霉菌中lat基因的置换与克拉维酸的选择性生产被引量：3
- 2005年
- 目的提高棒状链霉菌的克拉维酸生产能力 ,去除副产物头霉素C。方法将安普霉素抗性基因片段插入到 4 7kb的lat pcbAB基因片段中 ,采用接合转移方法对棒状链霉菌中头霉素C生物合成的关键基因lat基因进行了置换。结果与结论经PCR验证 ,染色体上正常的lat pcbAB基因被插入失活的基因所替代。对重组菌株的发酵产物进行HPLC检测 ,发现所有的重组菌株均不再合成头霉素C ,并且重组菌株C35 85 lat ::apr、C2 5 1 lat::apr和C16 6 lat::apr的克拉维酸产量较出发菌株分别提高了 2 6 7 6 8%、4 3 6 9%和 35 0 5 %。结果表明基因插入失活是去除多余组分 。
- 舒杨何建勇田威张怡轩张寒丽
- 关键词：棒状链霉菌基因置换高效液相色谱法克拉维酸
