何晓燕
- 作品数：34 被引量：77H指数：5
- 供职机构：重庆医科大学附属儿童医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金重庆市卫生局科研项目重庆市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学文化科学更多>>
- miR-21对早期糖尿病肾病db／db小鼠蛋白尿的影响被引量：3
- 2010年
- 目的了解miR-21对早期糖尿病肾病db／db小鼠24h尿白蛋白、肾小球形态学及其分子机制的影响。方法24只5周龄雄性小鼠分为4组：6只db／m小鼠作为对照组，18只5周龄高血糖且无蛋白尿的db／db小鼠分别随机分为pGenesil—miR-21质粒处理组、对照空质粒处理组及未处理组，每天尾静脉液压法注射质粒30mg·kg^-1·d^-1，直至未处理组db／db小鼠尿白蛋白排泄（UAE）显著高于db／m小鼠组。在光学显微镜下观察肾小球形态大小，计算机计算肾小球面积，实时RT—PCR检测肾脏组织miR-21的表达水平，Western印迹、免疫组化PTEN、p-Akt（Ser473）和P13Kp85d肾脏组织的蛋白质表达水平。结果5周龄db／db小鼠连续注射质粒4周后，未处理组db／db小鼠出现高血糖伴UAE显著增高，提示9周龄db／db小鼠进入早期糖尿病肾病阶段。实时RT-PCR结果显示，在注射pGenesil—miR-21重组质粒的db／db小鼠肾脏组织中，miR-21的表达显著增高（P〈0．01）。光镜观察和肾小球面积测量实验发现，pGenesil-miR-21重组质粒组肾小球显著减小。Western印迹和免疫细胞化学结果显示，miR-21处理组的db／db小鼠肾脏组织中PTEN蛋白较注射对照空质粒和未注射质粒的db／db小鼠组显著降低，而P13K p85α和磷酸化Akt（Ser473）蛋白显著增高（均P〈0．01）。结论miR-21通过特异性靶向调控PTEN／P13K信号传导途径，以抑制肾小球肥大，可能是一个新的糖尿病肾病的保护因子。
- 张政彭惠民陈涛徐晓明何晓燕晏宁
- 关键词：糖尿病肾病微RNAPTEN磷脂酰肌醇3激酶
- β-榄香烯诱导神经母细胞瘤细胞凋亡及其机制被引量：8
- 2018年
- 目的探讨β-榄香烯对儿童神经母细胞瘤生长的抑制作用及其可能的机制。方法不同质量浓度β-榄香烯体外作用于神经母细胞瘤细胞株SH-SY5Y、IMR-32、SK-N-DZ及胚肾细胞株293T 24 h,用CCK-8法检测细胞存活率,流式细胞术检测SH-SY5Y及SK-N-DZ细胞的凋亡率,Hoechst 33342染色检测凋亡小体,流式细胞术检测细胞周期和Brd U掺入率,Western blot检测caspase-3、caspase-8及caspase-9蛋白表达。结果β-榄香烯对3株神经母细胞瘤细胞的生长均有抑制作用,且呈剂量依赖性,而对正常细胞抑制作用轻微;β-榄香烯作用于SH-SY5Y及SK-N-DZ细胞24 h后,与对照组相比,药物组细胞早期凋亡率上升(P<0.05),凋亡小体明显增加(P<0.05);细胞各周期比例无明显差异(P>0 05);Brd U掺入率无明显差异(P>0.05);与对照组相比,药物组caspase-3及caspase-9蛋白表达明显增多(P<0.05),而caspase-8无明显差异(P>0.05)。结论β-榄香烯对神经母细胞瘤细胞的生长具有抑制作用,其作用机制是通过激活内源性凋亡通路诱导细胞凋亡,而与细胞周期及细胞增殖无明显关系。
- 杨燕何晓燕王珊邹琳章均彭亮吕麟亚
- 关键词：Β-榄香烯神经母细胞瘤细胞凋亡CASPASE-3CASPASE-9
- TRECs筛查方法的建立及联合IL2RG基因分析对重症联合免疫缺陷症的诊断意义被引量：1
- 2015年
- 目的拟建立适合临床应用的新生儿筛查技术，结合Sanger测序技术，明确重症联合免疫缺陷（SCID）相关基因突变，为患儿的早期筛查与诊治提供依据。方法前瞻性研究。利用Taqman实时荧光PCR技术，建立定量检测滤纸干血斑中T细胞受体重排删除环（TRECs）的方法，进行方法学评价；收集2013年1月至2014年6月到重庆医科大学附属儿童医院就诊的SCID疑似患儿30例，检测干血斑TRECs拷贝数和外周血基因组DNA中IL2RG核酸序列；结合患JH$床诊断，分析两种方法的临床符合率。结果自建荧光定量PCR法的最低检测量为10^3拷贝／ml，批内及批间变异系数分别为〈4．7％和〈9．1％。30例SCID疑似患儿中，17例TRECs含量低于参考区间，根据临床表现，最终均确诊为SCID，自建方法的临床符合率为17／17。17例SCID确诊患儿均为男孩，其中16例存在IL2RG基因突变（7例移码突变，6例错义突变，2例无义突变，1例剪切突变），1例为RAGI基因复合杂合错义突变。结论建立以TRECs为基础的新生儿筛查技术，联合应用IL2RG基因分析技术，将有助于SCID患儿的早期发现、早期诊断及治疗方案的正确选择。
- 何晓燕刘姗戴荣欣刘玮刘之岱余朝文唐诗赵晓东邹琳
- 关键词：重症联合免疫缺陷基因重排
- Let-7a表达质粒的构建及其对肺癌A549细胞k-Ras蛋白表达的抑制作用被引量：2
- 2010年
- 目的探讨let-7a介导的基因表达调控在肺癌形成中的作用。方法依据miRBase数据库中hsa-let-7a序列,设计两条寡核苷酸片段,退火处理后克隆至pGenesil-1质粒,构建重组质粒pGenesil-let-7a,同时设计并构建一个阴性对照质粒pGenesil-control。将pGenesil-let-7a及pGenesil-control转染肺癌A549细胞,经G418筛选,建立稳定表达let-7a-GFP及control-GFP的细胞株。采用MTT比色法检测活细胞数并绘制生长曲线;半定量RT-PCR、Western blotting及免疫细胞化学检测k-Ras表达的差异。结果经测序证实重组质粒构建成功,与未处理的A549细胞和稳定表达pGenesil-control的细胞相比,在稳定表达pGenesil-let-7a的A549细胞中,细胞生长明显减慢,k-Ras的蛋白表达明显降低,而k-Ras的mRNA水平无明显变化。结论 let-7a在翻译水平抑制了k-Ras的表达,并对细胞生长具有显著的抑制作用。
- 何晓燕陈俊霞欧阳溪张政彭惠民
- 关键词：微RNA肺癌K-RAS
- 儿童重大疾病防控关键技术的研发与应用
- 邹琳田代印刘姗代继宏余朝文何晓燕符州包蕾舒逸刘之
- 项目组以肿瘤、肺疾病及遗传病儿童重大疾病为研究对象，研究其发病新机制、诊断新方法与治疗新靶点，推广应用至全国，提高患儿生存质量，取得如下创新性成果：
(一)针对肿瘤，以白血病和神经母细胞瘤(NB)为主要研究对象，研发2...
- 关键词：
- 关键词：基因诊断
- let-7a靶向调控NIRF基因对肺癌A549细胞增殖的影响及分子机制研究
- 目的:借助生物信息学手段对let-7a的靶基因进行预测和分析，以期获得更多的有关let-7a参与的转录后调控机制的信息。
方法:利用miRGen数据库，以hsa-let-7a基因为检索词，选择miRanda，Pic...
- 何晓燕
- 关键词：肺癌A549细胞增殖分子机制
- 文献传递
- 小鼠微RNA miR-21真核表达质粒的构建及其在小鼠肾小球系膜细胞中的表达被引量：2
- 2010年
- 目的构建小鼠微RNA miR-21真核表达质粒,并在小鼠肾小球系膜细胞中表达。方法人工合成小鼠miR-21基因序列,构建miR-21真核表达质粒pGenesil-miR-21。使用脂质体Lipofectamine2000转染小鼠肾小球系膜细胞后,G418筛选,获得稳定转染克隆,提取总RNA,通过实时荧光定量RT-PCR技术检测miR-21的表达。结果经酶切鉴定和测序证实,合成的miR-21基因序列完全正确,并已成功克隆到真核表达质粒pGenesil-1上。重组真核表达质粒转染小鼠肾小球系膜细胞后,筛选出的阳性克隆可稳定高表达miR-21。结论已成功构建miR-21真核表达质粒,并在小鼠肾小球系膜细胞中高效表达,为进一步探讨miR-21的生物学功能奠定了基础。
- 张政彭惠民徐晓明何晓燕
- 关键词：微RNAMIR-21真核细胞肾小球系膜细胞
- RNA干扰核糖核酸酶抑制因子对非浸润性膀胱癌BIU-87细胞的影响
- 核糖核酸酶抑制因子(Ribonuclease Inhibitor,RI)是一种胞浆内酸性糖蛋白,由许多亮氨酸重复顺序组成,含有这样结构的一百多种蛋白质显示了广泛的功能,包括细胞周期调节、DNA 修复、胞外基质的相互作用及...
- 欧阳溪何晓燕褚颖豪陈俊霞
- 关键词：核糖核酸酶抑制因子BIU-87细胞
- 文献传递
- miRNA-451表达质粒的构建及其对iNOS基因表达的抑制被引量：1
- 2009年
- 目的:探讨miRNA-451对肾小球系膜细胞中诱导型一氧化氮合酶(Inducible nitric oxide synthase,iNOS)基因表达的影响。方法:依据miRBase数据库中mmu-miR-451序列,设计两条寡核苷酸片段,退火处理后克隆至pGenesil-1质粒,构建pGenesil-1-miRNA-451质粒及阴性对照质粒pGenesil-1-control。将pGenesil-1-miRNA-451及pGenesil-1-control质粒分别转染小鼠肾小球系膜细胞,经G418筛选,建立稳定表达pGenesil-1-miRNA-451及pGenesil-1-control的细胞株。采用MTT比色法检测活细胞数并绘制生长曲线;RT-PCR、Western blot及免疫细胞化学检测iNOS基因表达的差异。结果:经测序证实重组质粒构建成功,与未处理的小鼠肾小球系膜细胞和稳定表达pGenesil-1-control的细胞相比,在稳定表达pGenesil-1-miRNA-451的小鼠肾小球系膜细胞中,细胞增殖受到抑制,iNOS基因的蛋白表达明显受到抑制,而iNOS基因的mRNA水平无明显变化。结论:miRNA-451在翻译水平抑制了iNOS基因的表达,并对小鼠肾小球系膜细胞生长具有显著的抑制作用。
- 李春蕾何晓燕彭琼乐张政武卫华彭惠民
- 关键词：INOS基因肾小球系膜细胞基因表达
- let-7a调控人肺腺癌细胞株A549中NIRF基因的表达
- NIRF 是近年来新发现的一种核蛋白,其蛋白质内部含有 UBL(ubiquitin-like)、 PHD(plant homeodomain)、SRA(set and ring associated)、RING(real...
- 何晓燕彭惠民陈俊霞欧阳溪
- 关键词：MICRORNA肺癌
- 文献传递
