余鹰
- 作品数：22 被引量：119H指数：9
- 供职机构：中南大学更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学自动化与计算机技术更多>>
- BRD7交互作用蛋白基因BRD2、BRD3在鼻咽癌组织中的表达被引量：5
- 2003年
- 背景与目的:BRD7基因是通过cDNA代表性差异分析获得的一个鼻咽癌(nasopharyngealcarcinoma,NPC)密切相关基因。采用酵母双杂交技术,已从人胎脑的cDNA文库中筛选到了两个与BRD7蛋白存在交互作用且包含溴区结构域(bromodomain)的蛋白BRD2、BRD3。本研究的目的在于进一步证实BRD7蛋白与BRD2、BRD3蛋白之间的交互作用,探讨BRD2、BRD3基因在鼻咽癌中的表达和作用模式。方法:将BRD2、BRD3基因分别与BRD7基因共转化酵母Y187后将菌落影印到尼龙膜,X-Gal检测酵母中报告基因LacZ的表达,推断BRD2、BRD3与BRD7蛋白之间的交互作用。RT-PCR方法检测BRD2、BRD3基因在正常鼻咽上皮组织和鼻咽癌活检组织中的差异表达以及在BRD7基因稳定转染的鼻咽癌细胞株(HNE1)中,BRD7基因的重表达对BRD2、BRD3基因表达水平的影响。结果:通过特异性酵母双杂交技术,发现酵母转化子的颜色呈蓝色,进一步证实BRD2、BRD3蛋白能分别与BRD7蛋白发生交互作用。RT-PCR结果显示,在鼻咽癌组织中,BRD2和BRD3基因表达下调或缺失;在BRD7基因稳定转染的HNE1细胞株中,随着BRD7基因表达的增强,BRD2、BRD3基因的表达也存在明显的上调。结论:BRD7蛋白能分别与BRD2、BRD3蛋白发生交互作用,且在mRNA水平存在一定程度的协同表达作用。
- 周鸣彭聪聂新民张必成朱诗国余鹰李小玲李桂源
- 关键词：鼻咽癌酵母双杂交技术发病机制
- 鼻咽癌侯选抑瘤基因BRD7原核表达载体的构建及其表达( 英文)被引量：9
- 2002年
- BRD7基因是一个鼻咽癌侯选抑瘤基因 ,为了构建BRD7基因的原核表达载体并使其在大肠杆菌得到表达 ,设计了带有SalⅠ ,NotⅠ酶切位点的引物 ,以已构建好的质粒 pGEM TEasy/BRD7为模板 ,用PCR扩增出BRD7基因的完整阅读框架 ,并用SalⅠ ,NotⅠ酶切PCR产物和原核表达载体PGEX 4T 2 ,然后用T4DNA连接酶将其连接 ,得到重组表达质粒PGEX 4T 2 /BRD7,经双酶切鉴定和测序验证 ,表达载体构建正确 .重组表达质粒转化感受态大肠杆菌Jm10 5后用IPTG诱导 ,成功表达了一分子质量约为 90ku的融合蛋白 ;37℃诱导 4h后 ,SDS 聚丙烯酰胺凝胶 (PAGE)电泳后 ,经扫描分析该融合蛋白产量占菌体蛋白总量 2 8 4 8% ,蛋白质印迹 (Western blot)证实了该融合蛋白的表达获得成功 .这为BRD7基因的蛋白纯化及抗体制备 ,进一步开展其功能研究奠定了基础 .
- 聂新民张必成向娟娟朱诗国周鸣董利余鹰李小玲李桂源
- 关键词：鼻咽癌BRD7原核表达载体
- 鼻咽癌分子标志物—BRD7试剂盒
- 鼻咽癌分子标志物—BRD7试剂盒。本发明通过PCR技术和直接测序法对BRD7基因的编码区进行单核苷酸多态性(Coding－region Single Nucleotide Polymorphism，cSNP)分析，并计算...
- 李桂源余鹰熊炜曾朝阳李小玲朱诗国张必成周鸣
- 文献传递
- 应用混合探针文库筛选法克隆多个肿瘤差异表达基因被引量：12
- 2000年
- 目的：进一步分离在鼻咽癌组织中表达下调／缺失的候选抑瘤基因。方法：采用PCR方法对有差异表达的cDNA序列（AF152605和AF091517）进行探针标记，Northern杂交确定其mRNA转录本大小，进而混合两种PCR探针对骨骼肌cDNA文库进行筛选，阳性克隆经PCR鉴定后直接测序。结果：克隆了转录本为2．2Kb、1．1Kb和1．4Kb三个基因，GenBank登录号分别为AF179285、AF170307和AF194971。结论：混合探针文库筛选法是同时、快速获得多个cDNA片段其全长序列的可借鉴实验手段。
- 余鹰谢奕朱诗国周鸣张必成李桂源public.cs.hn.cn
- 关键词：鼻咽肿瘤文库筛选抑瘤基因基因克隆
- BRD7基因转染对鼻咽癌细胞生长的抑制作用被引量：25
- 2001年
- 目的：探讨鼻咽癌负相关基因ＢＲＤ７对鼻咽癌细胞系ＨＮＥＩ生长的影响。方法：构建ＢＲＤ７基因真核表达载体ｐｃＤＮＡ３.１（＋）／ＢＲＤ７重组体，采用脂质体介导转染技术，将ＢＲＤ７真核表达重组质粒和空载体质粒分别导入鼻咽癌细胞系ＨＮＥ１，Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交和ＲＴ－ＰＣＲ分别检测外源性ＤＮＡ的整合和ＢＲＤ７基因的表达，并借助细胞生长曲线、软琼脂集落形成试验、流式细胞计数和裸鼠接种方法对转染细胞的生物学行为进行了检测。结果：转染ＢＲＤ７基因的 ＨＮＥ１生长倍增时间为５３ ｈ，较ＨＮＥ１（２３．９ｈ）和空载体转染 ＨＮＥ１（２４.１ｈ）明显延长，流式细胞仪表明，ＢＲＤ７表达升高延缓细胞由Ｇ０－Ｇ１期进人Ｓ期，ＢＲＤ７转染ＨＮＥ１在软琼脂中集落形成率较对照组显著下降（Ｐ＜０．０１），裸鼠接种试验显示ＢＲＤ７基因转染细胞ＨＮＥ１生长速度受到抑制。结论：ＢＲＤ７基因重表达有助于ＨＮＥ１的恶性表型的逆转；ＢＲＤ７是一个鼻咽癌相关的抑瘤基因良好的候选者。
- 余鹰朱诗国张必成李忠花向娟娟周鸣李小玲李桂源
- 关键词：鼻咽肿瘤BRD7抑瘤基因基因转染HNE1NPC
- 鼻咽上皮组织定向cDNA文库的快速构建被引量：7
- 2001年
- 目的 采用SMART (switchingmechanismat5′endofRNAtranscript)技术 ,快速构建了高质量的成人鼻咽上皮组织定向cDNA文库。方法 从成人正常鼻咽上皮组织分离总RNA ,利用经修饰的oligo(dT)引物 (含sfiIB酶切位点 )合成cDNA第一链 ,同时根据真核生物mRNA 5′端帽子结构特点 ,利用SMART核苷酸 (含sfiIA酶切位点 )作为cDNA第二链在mRNA 5′端延伸出去的模板 ,进而以此序列为引物利用LD PCR(Long distance PCR)合成双链cDNA ,双链cDNA经sfiI(IA&IB)酶切和过柱分级分离后 ,克隆入经sfiI酶切的λTripIEX2载体后经体外包装而成cDNA文库。结果 获得 1.5× 10 6个重组子 ,重组率达 10 0 %。文库扩增后 ,滴度达 3.8× 10 9pfu/ml,插入cDNA平均长度为 1.5kb。结论构建的成人鼻咽cDNA文库具有良好的质量 ,该cDNA文库为进一步筛选。
- 张必成余鹰邱元正钱骏周鸣李忠花张小慧向娟娟朱诗国李桂源
- 关键词：鼻咽肿瘤DNA重组基因文库遗传学技术CDNASMART
- 一个有假基因特点的鼻咽癌相关基因的分离和克隆(英文)被引量：4
- 2002年
- 用定位候选克隆法克隆了一个与鼻咽癌相关的基因 ,命名为NAG73基因 .结构分析显示NAG73的基因序列无内含子 ,无典型的启动子序列 ,polyA尾 .与人类生长激素促分泌因子基因的第 4个外显子和 3′端非翻译区同源 .说明NAG73可能是人类生长激素促分泌因子基因的假基因 .同时 ,实验证明NAG73在一些细胞和组织中活跃表达 .在正常鼻咽上皮细胞 ,鼻咽癌上皮细胞和鼻咽癌活检组织 ,NAG73有表达差异 .序列分析显示NAG73有编码翻译产物的可能 .NAG73可能可编码产物 .该产物在鼻咽癌的发病发展中发挥作用 .
- 向娟娟余鹰王洁如朱诗国张必成李忠花李桂源
- 关键词：假基因鼻咽癌相关基因基因克隆染色体3P
- 鼻咽癌相关基因NAG4编码蛋白的表达模式被引量：3
- 2001年
- 目的:明确人鼻咽癌相关基因NAG4编码产物的特性和活细胞内定位,了解其与癌变的关系。方法:构建了绿色荧光蛋白GFP与NAG4融合基因的真核表达载体,通过脂质体介导分别转染非洲绿猴肾永生化细胞系COS7、人宫颈癌细胞系HeLa、人鼻咽癌细胞系HNE1以及原代培养正常鼻咽上皮PNNE,瞬时表达后荧光显微镜观察NAG4编码蛋白的活细胞内定位及其在鼻咽癌中改变。结果:NAG4基因编码产物在COS7细胞的胞浆和胞核内可见表达,而在HeLa细胞中仅在细胞浆存在;有30％的鼻咽癌细胞仅分布在胞浆,而在所有的正常鼻咽上皮细胞胞核和胞浆均有表达。结论:NAG4基因编码核转录蛋白在细胞恶变过程中可能有细胞浆到细胞核的移位障碍。
- 余鹰曹利张必成朱诗国周鸣向娟娟李桂源
- 关键词：鼻咽肿瘤绿色荧光蛋白
- 鼻咽癌上皮细胞株HNE1 cDNA文库的构建及鼻咽癌表达上调基因的筛选
- 2002年
- 张必成李忠花朱诗国曹利余鹰李伟芳李桂源
- 关键词：鼻咽肿瘤CDNA克隆NPC上调基因
- 基于移动代理的分布式网络管理系统研究与实现
- 计算机网络的复杂化和异构化要求网络管理系统能够提供更加智能、动态、高效率的网络控制能力。
本文首先分析了网管技术和移动代理技术的研究现状、总结了当前网络管理系统在性能、效率等方面存在的不足。接着在探讨移动代理技...
- 余鹰
- 关键词：网络管理移动代理网络管理协议
- 文献传递
