刘建
- 作品数：7 被引量：14H指数：3
- 供职机构：中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技重大专项上海市科学技术委员会资助项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 一种化合物在制备抗日本血吸虫病的药物中的应用
- 本发明公开了一种结构式（I）化合物在制备抗日本血吸虫病的药物中的应用。本发明通过对日本血吸虫脂肪酸合成途径的深入分析，认为参与该途径的3-氧化酰基-酰基载体蛋白还原酶（3-Oxoacyl-ACP Reductase，OA...
- 胡薇刘建王吉鹏王树奇杨忠徐斌鞠川
- 文献传递
- IL-2和GM-CSF免疫治疗耐多药结核病的研究被引量：4
- 2012年
- 本研究在结核病小鼠模型中评估了白细胞介素-2(IL-2)和粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)与抗菌药物异烟肼(INH)、利福平(RIF)联合使用治疗结核菌感染的治疗效果.首先,在药物敏感型结核杆菌H37Rv感染小鼠模型中,通过测定存活率、小鼠肺部和脾脏菌落数以及分析肺部组织病理情况评估IL-2和GM-CSF的治疗效果.然后,在耐多药结核菌株OB35感染小鼠模型中评估免疫治疗方案的治疗效果.在H37Rv感染模型中,与非治疗组小鼠相比,经IL-2或GM-CSF单细胞因子治疗后的小鼠肺部的菌落数分别减少了0.82lg CFU(P<0.01)和0.58lg CFU(P<0.05),而脾脏的菌落数分别减少了1.42lg CFU(P<0.01)和1.22lg CFU(P<0.01).虽然当单细胞因子与INH+RIF(HR)联合使用时,并未在抑菌率上表现出任何优势,但是肺部组织病理切片显示联合免疫治疗组小鼠肺部损伤明显减弱.在耐药结核杆菌OB35感染小鼠模型中,和未治疗组以及抗菌药物治疗组相比,免疫治疗能有效降低肺脾菌落数,同时减少肺部损伤.值得一提的是,相对于其他治疗组,两种细胞因子共同参与的免疫治疗能进一步提高小鼠存活率到30%;而且能比单一抗菌药物治疗更有效地减少肺脾菌落数(其中肺部减少1.02lg CFU,脾脏减少1.34lg CFU,P<0.01).该研究表明,IL-2和GM-CSF共同参与的免疫治疗可能是治疗耐药结核病(MDR-TB)的有效策略之一.
- 张雍容刘建王勇鲜巧阳邵凌云杨忠王小宁
- 关键词：结核病耐多药结核IL-2GM-CSF免疫治疗
- 金诺芬抗日本血吸虫活性机制及其细胞毒性的探讨被引量：1
- 2012年
- 目的探讨金诺芬对日本血吸虫（Schistosoma japonicum）童虫和成虫作用效果的差异及其作用靶点，测定金诺芬对宿主细胞的毒性。方法用二硫苏糖醇（DTI？）／胰岛素还原法体外测定金诺芬对重组sjTrx-酶活性的影响。用日本血吸虫尾蚴感染4～6周龄雌性昆明鼠（童虫组10只小鼠，600-800条／只；成虫组10只小鼠，80-100条／只）．灌注法收集童虫（15d）和成虫（35d）。虫体经无菌生理盐水充分洗涤后，转移至预先添加培养基的12孔板中．分别加入金诺芬和吡喹酮至其终浓度为1、5和10μg／ml，显微镜下观察化合物处理2、24、48和72h后虫体的形态改变和死亡情况。CCK．8试剂盒测定金诺芬（5和10Ixg／m1）对3种人源宿主细胞（HepG2、293T和Hela）的毒性。结果10μg／ml金诺芬作用下，40min内重组Si协．1还原胰岛素的总量减少54．5％。5μg／ml金诺芬体外作用24h后．成虫死亡率达75％，而童虫未见死亡；10μg／ml金诺芬作用72h后，童虫和成虫均全部死亡，但童虫死亡时间较成虫延迟。金诺芬和吡喹酮作用后，光镜下观察．虫体均出现颜色变灰暗、挛缩和卷曲等现象：电镜下可见虫体表被膜结构严重破坏。细胞毒性测试结果显示，5μg／ml金诺芬可使细胞相对活力降低85％以上，而10μg／ml时细胞几乎全部死亡。结论sjTrx-是金诺芬作用靶点之一。金诺芬具有较强的细胞毒性作用，对日本血吸虫成虫和童虫的作用效果存在差异．对成虫的作用效果更显著。
- 刘建胡薇徐斌王吉鹏王树奇王小宁
- 关键词：金诺芬日本血吸虫靶点细胞毒性
- 日本血吸虫钙蛋白酶基因的原核表达及功能分析被引量：1
- 2014年
- 目的克隆表达日本血吸虫钙蛋白酶(Sjcalpain),了解Sjcalpain在尾蚴内的分布及其在尾蚴侵染中的作用。方法根据SjCalpain基因全序列(GenBank登录号为AB016726)设计引物,PCR分别扩增Sjcalpain的催化位点区域和Ca2+结合位点区域的基因片段,克隆入pET-28a原核表达载体,并在大肠埃希菌(E.coli)BL21(DE3)中进行原核表达,组氨酸标签亲和层析法纯化表达产物。聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析蛋白表达和纯化情况。纯化的重组蛋白免疫新西兰白兔制备兔多克隆抗体,ELISA和蛋白质印迹(Western blotting)分别检测多克隆抗体的效价和特异性。利用免疫荧光定位技术观察Sjcalpain在尾蚴组织中的分布情况。将尾蚴和钙蛋白酶抑制剂孵育后感染小鼠,计算血吸虫减虫率。结果成功构建了Sjcalpain的催化位点/pET-28a和Ca2+结合位点/pET-28a原核表达重组质粒,在E.coli BL21(DE3)中成功表达目的蛋白,相对分子质量(Mr)约为43 000和39 000,与预期大小一致,且均为包涵体表达。组氨酸标签亲和层析成功纯化得到目的重组蛋白。间接ELISA结果显示,多克隆抗体的效价超过1∶80 000。免疫定位结果显示,Sjcalpain在日本血吸虫尾蚴头部分布较多。尾蚴侵染抑制实验中,钙蛋白酶抑制剂作用组平均获虫19条,对照组平均获虫23条,减虫率为17.4%。结论 Sjcalpain蛋白产物主要分布在日本血吸虫尾蚴的头部;Sjcalpain被抑制后可以减少入侵宿主的尾蚴数量,说明Sjcalpain在尾蚴感染宿主皮肤过程中发挥一定的作用。
- 杜晓峰徐斌刘建王吉鹏刘牧刘秀凤马晓琳胡薇鞠川
- 关键词：日本血吸虫尾蚴钙蛋白酶免疫定位侵染
- 日本血吸虫硫氧还蛋白-1的克隆、表达和功能分析被引量：4
- 2012年
- 目的克隆、表达日本血吸虫硫氧还蛋白-1(SjTrx-1)编码基因,测定重组SjTrx-1蛋白的酶催化活性,分析SjTrx-1基因在血吸虫不同发育阶段的转录本差异,观察其在日本血吸虫成虫体内的组织分布情况。方法从日本血吸虫cDNA文库中挑选SjTrx-1的基因序列,应用PCR技术对目的片段进行体外扩增,并克隆入原核表达载体pET28a,重组质粒转化E.coli BL21(DE3)细胞,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,组氨酸标签亲和层析法纯化表达产物,二硫苏糖醇(DTT)/胰岛素还原法测定重组SjTrx-1蛋白的酶催化活性。纯化的重组SjTrx-1蛋白免疫新西兰白兔,以制备的免疫兔血清作为抗体,应用免疫荧光定位技术检测SjTrx-1在日本血吸虫成虫体内的分布情况。制备日本血吸虫各虫期的总RNA样品,利用RT-PCR方法扩增目的片段,分析SjTrx-1基因在各发育阶段的转录本丰度。结果构建了重组表达载体SjTrx-1/pET28a,在E.coli中实现了重组SjTrx-1蛋白的可溶表达,其相对分子质量(Mr)约为38 000,与预测的融合蛋白大小相符。经组氨酸标签亲和层析法获得纯化重组蛋白SjTrx-1,并测定了其体外的酶催化活性。虫期转录特异性分析显示,该基因在各个虫期均存在转录,其中胞蚴、童虫和成虫阶段的丰度较高,毛蚴和尾蚴中含量相对较低。荧光定位结果显示,SjTrx-1蛋白在虫体内分布广泛,且无组织特异性。结论 SjTrx-1在日本血吸虫虫体内分布广泛,在胞蚴、童虫和成虫阶段的丰度较高。
- 刘建徐斌张晓刘璐胡薇王小宁
- 关键词：日本血吸虫硫氧还蛋白-1免疫定位
- 一种化合物在制备抗日本血吸虫病的药物中的应用
- 本发明公开了一种结构式（I）化合物在制备抗日本血吸虫病的药物中的应用。本发明通过对日本血吸虫脂肪酸合成途径的深入分析，认为参与该途径的3-氧化酰基-酰基载体蛋白还原酶（3-Oxoacyl-ACP Reductase，OA...
- 胡薇刘建王吉鹏王树奇杨忠徐斌鞠川
- 文献传递
- 日本血吸虫醛糖还原酶基因RNA干扰效应的初步研究被引量：4
- 2014年
- 目的研究siRNA诱导的日本血吸虫醛糖还原酶(SjAR)基因转录本和蛋白水平的RNA干扰(RNAi)效应。方法设计并合成2条针对SjAR基因的siRNA(siRNA-1和siRNA-2)和1条阴性对照siRNA(siRNA-NC)。用日本血吸虫尾蚴感染4~6周龄雌性昆明鼠(800~1 000条/鼠),13 d后灌注小鼠肝门静脉收集童虫,每(120±10)条童虫为一组,分别采用电转法和浸泡法对各组童虫进行RNAi处理。电转处理法:向电击杯中分别加入5μg siRNA-1、siRNA-2、siRNA-NC或等体积的焦碳酸二乙酯(DEPC)水(空白对照),经125 V 20 ms方波脉冲电击童虫1次后,继续培养48 h;浸泡处理法:向童虫培养基中加入siRNA-1、siRNA-2或siRNA-NC溶液至siRNA浓度为200 nmol/L,第3天时更换一半新鲜培养基并补充siRNA,共培养5 d。每处理设3个平行对照组。干扰结束后,采用TRIzol法提取虫体RNA和可溶性总蛋白,将RNA反转录为cDNA,以SjGAPDH基因为内参,实时定量PCR检测SjAR转录本相对表达水平的变化,Western blotting分析SjAR蛋白水平的变化。结果实时定量PCR结果显示,采用siRNA-1、siRNA-2和siRNA-NC电转后,虫体SjAR转录本水平分别为(90.6±16.2)%、(84.2±7.3)%和(105.9±10.3)%,与空白对照组[(100.9±16.8)%]的差异均无统计学意义(P>0.05);使用siRNA-1、siRNA-2浸泡后,SjAR转录本水平为(48.6±8.2)%和(73.4±4.7)%,均较空白对照组[(100.0±3.3%)]显著下降(P<0.01),而阴性对照siRNA-NC浸泡后的虫体SjAR转录本的表达水平为(101.43±14.33)%,与空白对照组比较表达差异无统计学意义(P>0.05)。Western blotting分析和条带定量结果显示,以空白对照组为标准,使用siRNA-1、siRNA-2和siRNA-NC浸泡后,SjAR蛋白水平分别为79.0%、97.8%和103.2%。结论使用浸泡法对日本血吸虫童虫SjAR进行RNAi处理可降低靶基因转录本和蛋白的表达水平。
- 王树奇徐斌刘建王吉鹏胡薇
- 关键词：日本血吸虫醛糖还原酶RNA干扰
