刘筱娣
- 作品数：12 被引量：16H指数：3
- 供职机构：北京大学口腔医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金北京市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学理学更多>>
- 框内缺失突变法构建变形链球菌comE基因突变株被引量：1
- 2009年
- 变形链球菌的种内密度感应系统由com基因家族编码控制。膜受体ComD接受密度感应信号后激活菌体内的反应调节子ComE,ComE作为启动子可以调节一系列相关基因的表达。应用框内缺失突变法(in-frame deletion),通过两次同源性重组,成功构建了变形链球菌comE基因突变株IFD140ΔcomE。由于框内缺失突变没有引入任何的遗传标记物,所以有效地避免了传统的基因失活方法---插入重复(insertion duplication)和等位交换(allelic exchange),所导致的下游基因极性效应(polar effect)。经过PCR、测序分析及RT-PCR,证实IFD140ΔcomE仅在comE基因内部缺失了717bp的片段,未引入任何外源性DNA,且comE下游的comD基因可以正常转录,无极性效应产生。对IFD140Δcom表型特征的研究发现,在液体培养基中IFD140Δcom更易发生沉淀性生长和贴壁性生长。菌体呈长链状排列。IFD140ΔcomE的成功构建,为进一步研究变形链球菌种内密度感应系统奠定基础。
- 刘筱娣杜宁郭丽宏
- 关键词：变形链球菌密度感应系统
- 一种低温等离子体针对变形链球菌杀灭效果的研究被引量：3
- 2010年
- 目的研究低温等离子体针对口腔变形链球菌及其生物膜的杀灭效果。方法用载体定量杀菌试验方法和扫描电镜技术,对低温等离子体针杀菌效果进行了实验室观察。结果琼脂培养基平板上变形链球菌经激发电压1 870 V、照射距离1.5 cm、低温等离子体针处理20 s,等离子体针处理形成直径约7 mm的圆形细菌杀菌圈。染菌载体经等离子体针照射20 s,对载体上变形链球菌平均杀灭对数值为1.87;照射100 s,平均杀灭对数值为2.48。在激发电压为2 550 V时,距离1.5 cm处理20 s条件下,等离子体针对玻片上变形链球菌生物膜平均杀灭对数值为3.43。结论低温等离子体针可快速有效地杀灭变形链球菌,随照射时间延长杀菌效果提高。
- 刘筱娣杜宁彭磊张先徽陈维杨思泽郭丽宏
- 关键词：低温等离子体变形链球菌杀菌效果
- 大气条件等离子体针处理Enterococcus faecalis菌被引量：1
- 2009年
- 自行研制的等离子体针在大气压下通过介质阻挡放电产生的等离子体,再由喷嘴处安装的漏斗形装置聚焦形成针状等离子体.然后对针状等离子体的基本特性和杀Enterococcus faecalis(E.faecalis)菌进行了研究,E.faecalis菌是一种引起完善充填根管再感染的主要微生物.当等离子体针功率为5—28W时,对等离子体的温度进行了测量,表明它不同于其他热杀菌方式.通过改变等离子体针内电极末端注入的氧气量,发现适当的氧气量,不仅增加等离子体内含氧粒子的浓度而且对等离子体的长度影响也不明显.实验表明最佳参数为功率15W,0.1m3.h-1氦和2.5%氧气,间距12mm,处理时间30s.为了找出杀菌的关键粒子,进一步比较了大气压下的等离子体针的发射光谱与agar(琼脂)2mm下的光谱并找出关键粒子.
- 张先徽黄骏刘筱娣彭磊孙岳陈维冯克成杨思泽
- 关键词：介质阻挡放电光谱
- 变形链球菌thrS基因敲除菌株的构建
- 目的:变形链球菌是龋病的主要致病菌。变形链球菌功能基因的研究,对阐明其致病性的分子基础具有重要的意义。研究变形链球菌致龋相关毒力基因,主要是探讨基因的生理功能。目前多数研究者都是通过反向遗传学方法进行基因功能研究的,即构...
- 刘筱娣郭丽宏
- 关键词：变形链球菌
- 文献传递
- 变形链球菌UA159磷酸蔗糖变位酶基因功能丧失菌株的构建被引量：4
- 2008年
- 目的:构建变形链球菌UA159磷酸蔗糖变位酶基因(phospho-sugar mutasegene,psm)功能丧失菌株,为进一步研究变形链球菌psm功能做准备。方法:将变形链球菌UA159 psm内部上、下游2段序列分别克隆至自杀质粒pFW5的2个多克隆位点(MCS-I和MCS-II),构建重组质粒,并经酶切和测序证实。利用同源重组(homologous recombination)原理,采用自然转化的方法,实现重组自杀质粒和变形链球菌UA159同源序列的等位交换(allelic exchange)。结果:经过PCR和测序分析,证实变形链球菌UA159基因组中的psm被重组质粒的基因(含有壮观霉素抗性)取代。结论:成功构建了变形链球菌UA159psm功能丧失菌株。
- 段劲刘筱娣郭丽宏
- 关键词：变形链球菌同源重组
- 变形链球菌ComE蛋白在大肠杆菌中的高效表达与纯化
- 2009年
- 目的:构建变形链球菌comE基因原核表达载体,诱导ComE融合蛋白高效表达,获取高质量的ComE融合蛋白。方法:提取变形链球菌基因组,PCR扩增得到变形链球菌comE基因片段,BamH Ⅰ和Xho Ⅰ双酶切后定向克隆到pET28a(+)表达载体中,并转化入E.coli BL21(DE3)。IPTG诱导融合蛋白表达,Western blot鉴定表达产物。进行蛋白表达的可溶性鉴定,并优化诱导时菌液的A600值、IPTG浓度、诱导时间和温度4个表达条件。然后用优化的条件大量诱导表达ComE融合蛋白,采用镍柱和分子筛两步法进行纯化。结果:经PCR、双酶切反应以及测序鉴定,重组质粒中的插入序列为comE基因的全长片段(753bp),无碱基的突变与读码框架的偏移。Western blot证实表达产物确为6×His-ComE融合蛋白,相对分子质量约为33000。目的蛋白在上清和沉淀中均有表达,且当A600为0.4时,加入IPTG至终浓度0.10mmol/L,37℃诱导4h后表达量最大。结论:成功构建pET28a(+)-comE原核表达载体,用优化后的6×His-ComE融合蛋白在E.coli BL21(DE3)中的表达条件,获得纯化的变形链球菌ComE融合蛋白。
- 彭磊刘筱娣郭丽宏
- 关键词：变形链球菌原核表达蛋白纯化密度感应
- SELEX技术筛选变形链球菌UA159适配子可行性的研究被引量：2
- 2012年
- 目的:研究SELEX技术用于筛选口腔致龋菌适配子的可行性。方法:化学合成长度为35mer的随机ssDNA文库,利用SE-LEX技术,分别以变形链球菌UA159(以下简称变链UA159)、乳杆菌和离心管作为靶物质,筛选适配子,不对称PCR扩增筛选产物,所得适配子进行克隆、测序,分析其二级结构,并对其二级结构进行了初步分析。结果:显示各个靶物质的筛选产物在第二轮筛选时就已经表现出具有特征性的二级结构。结论:SELEX技术可以用于口腔致龋菌适配子的筛选。
- 黄博彭磊王帅刘筱娣郭丽宏
- 关键词：SELEX乳杆菌适配子
- 变形链球菌生物膜形成相关基因的研究进展被引量：3
- 2006年
- 变形链球菌是公认的主要致龋菌,其重要的毒力因子之一就是在牙表面形成生物膜。生物膜的形成是变形链球菌在牙面聚集生存以及致龋所必需的结构。本文综述了变形链球菌当中与生物膜形成相关的基因,以期为防龋研究提供新的思路。
- 刘筱娣郭丽宏
- 关键词：变形链球菌生物膜基因
- 变形链球菌反应调控蛋白ComE结合序列的初步筛选被引量：1
- 2010年
- 目的:从变形链球菌基因组中筛选反应调控蛋白ComE结合的核酸序列。方法:⑴提取变形链球菌UA159基因组,进行超声剪切处理。以基因组片段为模板,用随机引物进行延伸,切胶纯化和PCR扩增后获得基因组文库。⑵应用基因组SELEX技术,以ComE蛋白为靶物质,与变形链球菌基因组文库共同孵育,循环筛选8轮。筛选产物TA克隆后送去测序,测序结果进行生物信息学分析。⑶将分析得到的2个序列分别克隆入pFW5-luc载体中,然后分别重组到变形链球菌UA159野生株和comE突变株的基因组中,采用RT-PCR的方法检测luc片段的表达。结果:⑴获得了变形链球菌UA159的基因组文库,片段范围约为100～300bp。⑵随机挑取54个克隆送去测序,经生物信息学分析和RT-PCR初步验证,最终获得1个ComE蛋白可能的结合序列。结论:采用基因组SELEX技术,筛选反应调控蛋白ComE可能的结合序列,并进行了初步验证,为后续进行变形链球菌反应调控蛋白ComE调控机制的研究奠定了基础。
- 彭磊吴丹黄博刘筱娣郭丽宏
- 关键词：变形链球菌
- 变形链球菌thrS基因生物信息学分析及同源重组质粒的构建被引量：1
- 2010年
- 背景:变形链球菌是公认的主要致龋菌,细菌的黏附、生物膜形成、产酸、耐酸等各个表型都与细菌的致龋性相关。有研究结果提示,苏氨酰-tRNA合成酶基因(threonyl-tRNA synthetase,thrS)可能与变形链球菌的黏附、产酸、耐酸等致龋性表型相关。目的:对苏氨酰-tRNA合成酶基因进行保守性分析,构建用于变形链球菌苏氨酰-tRNA合成酶基因敲除的重组质粒。方法:首先通过生物信息学结合SouthernBlot对苏氨酰-tRNA合成酶基因的保守性进行分析,再将变形链球菌苏氨酰-tRNA合成酶基因上下游序列分别克隆至自杀质粒pFW5上的多克隆位点,构建用于基因敲除的重组质粒。观察苏氨酰-tRNA合成酶基因的保守性及重组质粒的构建结果。结果与结论:苏氨酰-tRNA合成酶基因在实验中所列6种变形链球菌中保守存在;经过聚合酶链反应和酶切分析,重组质粒所插入片断无误。表明重组质粒pFW5-thrS构建成功。重组质粒pFW5-thrS的构建可用于今后变形链球菌苏氨酰-tRNA合成酶基因功能的研究。
- 刘筱娣段劲郭丽宏
- 关键词：变形链球菌重组质粒生物信息学基因
