刘肖
- 作品数：17 被引量：30H指数：4
- 供职机构：河南省农业科学院更多>>
- 发文基金：河南省科技攻关计划中国博士后科学基金河南省教育厅科学技术研究重点项目更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学轻工技术与工程更多>>
- 粪肠球菌ace基因缺失突变株的构建
- 2016年
- 本研究旨在构建粪肠球菌胶原蛋白黏附素基因(ace)缺失突变株,为进一步探讨该基因编码的毒力因子Ace的功能奠定基础。利用pK18mobSacB质粒作为基因敲除载体,构建粪肠球菌ace基因重组自杀质粒pK001,通过体内同源重组筛选成功敲除ace基因的突变株,然后对突变株细菌黏附体外培养猪肠上皮细胞IPEC-J2及其细菌生物被膜形成的情况进行了检测。结果显示,同源重组后,经过卡那霉素抗性筛选、PCR及Southern blot鉴定,成功获得了ace基因缺失突变株肠球菌△ace。细菌生长曲线测定试验表明,ace基因敲除对细菌的生长繁殖并无明显影响,但体外生物被膜测定试验显示基因缺失突变株肠球菌△ace的生物被膜形成能力有所降低。本研究证实了毒力因子Ace对猪源粪肠球菌与宿主黏附的重要作用,该基因缺失突变株的构建为进一步的理论研究和疫苗研发奠定基础。
- 陈丽颖李英英刘肖张秀方张留君胡慧王亚宾
- 关键词：粪肠球菌基因敲除生物被膜
- 猪流感病毒NP蛋白单克隆抗体的制备与鉴定被引量：4
- 2019年
- 为了制备猪流感病毒(SIV)核蛋白(NP)的单克隆抗体(MAb),采用差速离心法纯化H1N1和H3N2亚型SIV后交叉免疫BALB/c小鼠,利用淋巴细胞杂交瘤技术制备杂交瘤细胞,通过建立的免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)单克隆抗体检测方法进行筛选。获得3株能稳定分泌抗NP蛋白的杂交瘤细胞,分别命名为16D5、18G8和20C4,将它们诱导小鼠产生的腹水IPMA效价分别为1×10^-6、1×10^-6和1×10^-5。亚型鉴定结果显示,3株单克隆抗体的重链均为IgG1,轻链为κ链。3株单克隆抗体特异识别H1N1、H3N2、H5N1、H7N9和H9N2亚型流感病毒,并且与猪圆环病毒2型、猪伪狂犬病毒和猪细小病毒无交叉反应。Westernblot检测结果表明,3株杂交瘤细胞培养上清均在56ku附近出现一条特异性的蛋白质条带,说明针对SIV的NP蛋白制备了3株单克隆抗体。综上,成功制备了针对SIVNP蛋白的3株单克隆抗体,可识别不同亚型的SIV。
- 李鸽刘肖李青梅杨艳艳王彦红张改平
- 关键词：猪流感病毒NP蛋白单克隆抗体
- 猪源粪肠球菌含LPTXG基序样物质基因表达对其生物被膜形成的影响
- 引言肠球菌是一种广泛存在于人和动物肠道内的重要人畜共患机会致病菌,而肠球菌形成生物被膜的能力与其耐药性具有重要关系,从而影响到细菌的致病力。研究发现,肠球菌具有含LXPTG基序样的蛋白如表面蛋白(Esp)、胶原蛋白黏附素...
- 刘肖李晓博张祥胡慧王亚宾陈丽颖
- 一种动物流感抗体阻断检测试纸
- 本发明公开了一种动物流感抗体阻断检测试纸，由支撑板、抗原垫、金标垫、检测膜和吸水垫构成，抗原垫上吸附流感病毒检测抗原，金标垫吸附胶体金标记的抗流感病毒单克隆抗体mAb1，检测膜上含有检测线T“|”和质控线C“|”印迹，检...
- 李青梅张改平王彦红郭军庆刘肖石建州李鸽孙亚宁杨继飞柴书军赵东
- 文献传递
- H1N1亚型猪流感病毒单克隆抗体IPMA检测方法的建立被引量：4
- 2019年
- 本试验旨在建立一种针对检测抗H1N1亚型猪流感病毒单克隆抗体的免疫过氧化物酶单层细胞试验(immunoperoxidase monolayer assay,IPMA)筛选方法。通过优化MDCK细胞接毒量、细胞接毒后培养时间、封闭液的种类和工作浓度、工作时间等各个反应条件,并对建立的IPMA筛选方法的特异性、敏感性和重复性进行评价。结果显示,建立的IPMA检测方法的最优反应条件为MDCK细胞接毒10 2.63 TCID 50/100μL H1N1亚型猪流感病毒,37℃培养24 h,含3‰H 2O 2的甲醇室温固定15 min,5%脱脂乳37℃封闭2 h,50μL杂交瘤细胞上清作为一抗,37℃孵育2 h,羊抗鼠HRP-IgG二抗37℃孵育1 h。所建立的IPMA方法能特异性地检测H1N1亚型猪流感病毒单克隆抗体,与猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪圆环病毒2型(PCV2)和猪瘟病毒(CSFV)阳性血清不发生交叉反应;其敏感性检测结果显示,可检测1∶3 200的HI=2-9标准H1N1猪阳性血清;批间和批内重复性试验结果较好。综上所述,本试验成功建立了抗H1N1亚型猪流感病毒单克隆抗体的IPMA检测方法,该方法特异性强、敏感性高、重复性好,为生产鉴定H1N1亚型猪流感病毒单克隆抗体提供了一种简便、实用、有效的检测手段。
- 石建州石建州李青梅刘肖刘肖郭军庆邓瑞广郭军庆
- 关键词：H1N1亚型猪流感病毒单克隆抗体
- 双重PCR检测生鲜猪肉中大肠杆菌O157∶H7和沙门菌方法的建立与应用被引量：2
- 2015年
- 目的建立生鲜猪肉中大肠杆菌和沙门菌的双重PCR检测方法,并初步调查生鲜猪肉中大肠杆菌和沙门菌的污染情况。方法以大肠杆菌O157∶H7 rfb E基因和沙门菌inv A基因为靶基因设计引物。通过对单个基因PCR和多重基因PCR扩增进行特异性、敏感性试验以及优化反应体系,建立快速检测大肠杆菌和沙门菌的双重PCR法。在郑州市不同地区的综合性超市、冷鲜肉专卖店和农贸市场随机抽检144份生鲜猪肉样品,分别进行了PCR检测和常规微生物学检验。结果建立的双重PCR方法特异性好,抗干扰能力强,灵敏度可达到10 pg/μl。在144份样品中检测出大肠杆菌的样品数为10份,检出率为6.94%;检出沙门菌的样品数为13份,检出率为9.03%;大肠杆菌和沙门菌同时检出的有2份,占总样品的1.39%。结论初步建立了同步、简便、快速、灵敏地检测生鲜猪肉中大肠杆菌、沙门菌的双重PCR方法;生鲜猪肉中存在致病菌的污染问题,将威胁到食品安全和人体健康,不容忽视。
- 张秀方武二丽刘肖张伟强胡慧邵刘云王亚宾陈丽颖
- 关键词：沙门菌双重PCR食源性致病菌食品安全
- 一种猪伪狂犬病毒强毒株和疫苗毒株鉴别检测试纸
- 本发明涉及一种家畜疫病感染与免疫的鉴别检测器具，特别是涉及一种猪伪狂犬病毒强毒和疫苗毒鉴别检测试纸，由支撑板，样品垫，金标垫，检测膜和吸水垫构成，检测膜上含有强毒检测线T1“│”，疫苗毒检测线T2“│”和质控线C“│”印...
- 乔松林杨继飞李青梅郭军庆邢广旭柴书军万博解伟涛王寅彪刘肖邓瑞广张改平
- 纳米颗粒疫苗研究进展被引量：5
- 2014年
- 纳米颗粒指小于100-1000nm的微粒，纳米颗粒疫苗不但能提高抗原的稳定性和免疫原性，而且能够靶向性递呈抗原和缓慢释放，增强机体产生免疫应答。综述了近年来纳米颗粒在疫苗发展过程中的应用，介绍了不同纳米颗粒作为运输系统或免疫佐剂与免疫细胞之间的相互作用。
- 李鹏郭军庆李清州刘肖王选年王川庆张改平
- 关键词：疫苗佐剂
- 猪圆环病毒2型重组Cap蛋白体外稳定性研究
- 2015年
- 为筛选猪圆环病毒2型(PCV2)Cap蛋白在体外的稳定性条件,采用建立的PCV2双抗夹心ELISA方法,对Cap蛋白在不同贮藏条件下的抗原活性进行了检测。结果表明,Cap蛋白在25℃以下贮存时,其活性保持稳定;贮存时温度变化对蛋白质稳定性影响较大;在甘氨酸和甘油2种蛋白保护剂存在条件下,蛋白质活性稳定性增强。表明,Cap蛋白的体外贮存、改造及病毒样颗粒组装应在25℃以下进行,尽量避免温度剧烈变化,同时添加蛋白质保护剂有利于蛋白质的体外稳定。
- 刘肖金前跃郭军庆王寅彪张腾李鹏陈丽颖张改平
- 关键词：猪圆环病毒2型CAP蛋白稳定性
- 一种猪伪狂犬病毒强毒株和疫苗毒株鉴别检测试纸
- 本发明涉及一种家畜疫病感染与免疫的鉴别检测器具，特别是涉及一种猪伪狂犬病毒强毒和疫苗毒鉴别检测试纸，由支撑板，样品垫，金标垫，检测膜和吸水垫构成，检测膜上含有强毒检测线T1“│”，疫苗毒检测线T2“│”和质控线C“│”印...
- 乔松林杨继飞李青梅郭军庆邢广旭柴书军万博解伟涛王寅彪刘肖邓瑞广张改平
- 文献传递
