刘超红
- 作品数：4 被引量：2H指数：1
- 供职机构：中国科学院武汉病毒研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 抑瘤细胞运动和侵袭的鼠FRNK重组腺病毒的构建
- 2006年
- 目的应用AdEasy复制缺陷型腺病毒载体系统构建小鼠FRNK基因重组腺病毒,并在293HEK细胞中扩增制备重组病毒。方法把小鼠FRNK基因克隆入腺病毒穿梭载体pad- Track-CMV中,构建腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV-FRNK,经Pme I内切酶酶切成线性化后,采用电穿孔转化将其转化到含有腺病毒骨架载体pAdEasy-1的感受态大肠杆菌BJ5183中,通过卡那霉素筛选获得阳性腺病毒重组质粒。再将获得的腺病毒重组质粒转染到293HEK细胞进行包装,获得FRNK重组腺病毒pAdFRNK。荧光显微镜下观察绿荧光的表达。结果经酶切和绿荧光表达证明了小鼠FRNK基因的重组腺病毒载体pAdFRNK构建成功,并制备出高滴度的重组病毒。结论成功构建携带小鼠FRNK基因的重组腺病毒pAdFRNK,为研究FRNK的基因治疗奠定了基础。
- 曹俊孙铁汉丁铭佑陈颖刘超红于皆平于红刚
- 关键词：腺病毒载体基因治疗
- 腺病毒介导人FRNK基因对结肠癌细胞Colo320WT中p190RhoGAP磷酸化和RhoA活性的影响
- 2007年
- 目的利用腺病毒载体表达人FRNK基因，体外观察其对胃泌素干预下的结肠癌细胞Colo320WT中p190RhoGAP磷酸化和RhoA活性的影响。方法2005年10月至2006年9月，武汉大学人民医院消化内科在中国科学院，武汉病毒所病毒学国家重点实验室，利用AdEasyTM系统在大肠埃希菌内同源重组构建表达人FRNK基因的腺病毒载体pAdhFRNK。脂质体转染pCR3．1-GR质粒于结肠癌细胞Colo320中，G418抗生素筛选出稳定表达胆囊收缩素乏受体／胃泌素受体（CCK-2R）的阳性克隆，逆转录一聚合酶链反应（RT—PCR）鉴定。用10～8mol／L胃泌素干预Colo320WT细胞12h和pAdhFRNK体外感染Colo320WT细胞2d后，再用10—8moL／L的胃泌素干预细胞12h，然后用免疫沉淀方法检测磷酸化的p190RhoGAP的表达，pull—down测定RhoA的活性。结果在胃泌素干预12h后的磷酸化的p190RhoGAP的表达量明显增加，RhoA活性降低，而用pAdhFRNK感染后胃泌素干预的细胞中磷酸化p190RhoGAP表达又降低，RhoA活性却增加。结论hFRNK基因可明显阻断外源性胃泌素引起Colo320WT细胞中p190RhoGAP磷酸化的表达和RhoA的活性。
- 曹俊于皆平刘超红陈新文罗和生于红刚
- 关键词：基因治疗结肠癌RHOA
- 人FRNK重组腺病毒的构建被引量：1
- 2007年
- 目的:应用AdEasy复制缺陷型腺病毒载体系统构建人FRNK基因重组腺病毒,并在HEK293细胞中扩增制备重组病毒。方法:把人FRNK基因克隆入腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV中,构建腺病毒质粒pAdTrack-CMV-hFRNK,经PmeⅠ内切酶酶切成线性化后,采用电穿孔转化将其转化到含有腺病毒骨架载体pAdEasy-1的感受态大肠杆菌BJ5183中,通过卡那霉素筛选获得阳性腺病毒重组质粒。再将获得的腺病毒重组质粒转染到HEK293细胞进行包装,获得人FRNK重组腺病毒pAdhFRNK。荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白的表达。结果:经酶切和绿色荧光蛋白表达证明了hFRNK基因的重组腺病毒载体pAdhFRNK构建成功,并制备出高滴度的重组病毒。结论:成功构建携带人FRNK基因的重组腺病毒pAdhFRNK,为研究FRNK的基因治疗奠定了基础。
- 曹俊于皆平刘超红刘启胜齐元玲于红刚
- 关键词：基因治疗腺病毒
- hFRNK基因转移对结肠癌细胞中E-钙黏素／β-连环素复合物的影响被引量：1
- 2007年
- 目的研究hFRNK基因对结肠癌细胞Colo320WT中E-钙黏素（E-cadherin）／β-连环素（β-catenin）复合物的影响。方法利用AdEasy^TM系统在大肠肝菌内同源重组构建表达人FRNK基因的腺病毒载体pAdhFRNK。脂质体转染pCR3．1／GR质粒于结肠癌细胞Colo320中,G418筛选出稳定表达CCK-2R的阳性克隆,RT-PCR鉴定。用10^-8 mol／L胃泌素干预Colo320WT细胞12 h和pAdhFRNK体外感染Colo320WT细胞2 d后,再用10^-8 mol／L的胃泌素干预细胞12 h,然后用免疫共沉淀观察TX-100可溶性部分和不溶性部分的E-cadherin和β-catenin的表达。利用细胞化学方法观察E-cadherin和β-catenin在Colo320WT细胞中的分布情况。结果在胃泌素干预12 h后的TX-100可溶性部分中,E-cadherin和β-catenin的表达量明显降低,而TX-100不溶解部分表达增加。pAdhFRNK感染胃泌素干预后的细胞,在TX-100可溶性部分中,E-cadherin和β-catenin的表达量增加,而TX-100不溶性部分中表达降低。细胞化学方法显示,E-cadherin和β-catenin在胃泌素干预12 h后,由胞膜向胞内和胞核转移,而胃泌素干预pAdhFRNK感染后的细胞中,两者分布又逆转。结论hFRNK基因可明显对抗外源性胃泌素引起Colo320WT细胞中E-cadherin和β-catenin的分布异常,其机制可能是通过阻断FAK磷酸化及其通路而实现。
- 曹俊于皆平刘超红陈新文刘嵩罗和生于红刚
- 关键词：腺病毒载体
