刘铭瑶
- 作品数：37 被引量：122H指数：7
- 供职机构：东北农业大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金黑龙江省科技攻关计划博士科研启动基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生文化科学环境科学与工程更多>>
- SUMO融合系统高效表达可溶性鼠源FGF-21及其活性的研究被引量：7
- 2009年
- 利用SUMO表达载体在大肠杆菌中高效可溶性表达鼠源成纤维细胞生长因子(FGF-21)成熟蛋白,并研究其调节血糖的功能。将鼠源FGF-21成熟蛋白基因亚克隆至SUMO表达载体上,在大肠杆菌Rosetta(DE3)中诱导表达,并用镍离子螯合柱(Ni-NTA)纯化重组蛋白,透析后利用SUMO蛋白酶I切割融合蛋白,获得纯度较高的成熟蛋白。将3T3-L1成纤维细胞分化成脂肪细胞,经微量化的GOD-POD法检测培养基中葡萄糖含量,统计学分析葡萄糖消耗率。结果表明,在SUMO表达体系中鼠源FGF-21成熟蛋白基因以可溶形式表达,且可被SUMO蛋白酶I有效地切割,获得纯度较高的成熟蛋白。与未经处理的脂肪细胞对照组相比,经鼠源FGF-21成熟蛋白处理后脂肪细胞对葡萄糖的摄取利用显著增加,残存在培养基中的葡萄糖含量明显减少;两样本比较的t检验,P<0.001,差异极显著。
- 任桂萍姜媛媛刘铭瑶孙国鹏叶贤龙李德山
- 关键词：SUMO分子伴侣葡萄糖吸收
- 鼠源成纤维细胞生长因子-21对脂肪细胞糖代谢的作用被引量：19
- 2009年
- 成纤维细胞生长因子-21(FGF-21)是FGF家族的成员之一.近年发现FGF-21是一种新的代谢调节因子.从小鼠肝脏克隆FGF-21cDNA,经测序正确后亚克隆至具有羟胺切割位点的小泛素相关修饰物表达载体上,转化宿主菌Rosetta,得到的转化子经IPTG诱导后获得稳定、高效、可溶的表达产物.表达产物经羟胺切割、透析、复性、柱层析纯化后,在每升宿主菌中可获得4mg纯度为95%的成熟鼠源FGF-21蛋白,利用葡萄糖氧化酶-过氧化物酶(POD-GOD)法在小鼠3T3-L1脂肪细胞中进行生物学活性检测.结果表明,鼠源FGF-21具有促进脂肪细胞吸收葡萄糖的作用,短期作用(1h)与胰岛素相似,长期作用(8和12h)明显优于胰岛素.这一结果为以鼠源FGF-21为模型进一步研究FGF-21的生物学活性及其在糖代谢方面的作用机理奠定了基础.
- 姜媛媛刘铭瑶任桂萍王文飞刘晓民李德山
- 关键词：糖尿病糖代谢3T3-L1
- 两种scFv抗体、其编码基因及其在制备治疗或预防鸡传染性法氏囊病制剂中的应用
- 本发明公布了两种scFv抗体、其编码基因及其在制备治疗或预防鸡传染性法氏囊病制剂中的应用。发明提供了两种单链抗体(即scFv抗体)，scFv抗体具有与IBDV结构蛋白2(VP2)蛋白及多种IBDV毒株特异性结合的能力，可...
- 尹杰超李德山任桂萍郭笑辰魏颖孟婧刘铭瑶黄涛
- 文献传递
- 人FGF21突变基因及制备重组人FGF21蛋白方法
- 本发明公开了人FGF21突变基因及制备重组人FGF21蛋白方法。本发明将人FGF21基因进行突变，突变后碱基序列为SEQ IDNO.1所示，突变后的基因在原核细胞中的表达量有显著提高。本发明还提供了一种提高人FGF21蛋...
- 任桂萍李德山高华山刘铭瑶王文飞
- 文献传递
- 成纤维细胞生长因子21在抵抗素引发胰岛素抵抗的肝细胞模型中的糖代谢调节作用被引量：3
- 2013年
- 抵抗素是2001年Steppan等发现的一种与胰岛素抵抗有密切联系的细胞因子.本研究探讨了成纤维细胞生长因子21(FGF-21)在抵抗素过表达导致胰岛素抵抗的肝细胞中的糖代谢调节作用.构建人抵抗素真核表达载体,转染HepG2细胞,利用流式细胞仪筛选出过表达抵抗素的HepG2模型细胞,分别用不同浓度的胰岛素和FGF-21刺激细胞,用GOD-POD法检测细胞的葡萄糖摄取情况,利用实时荧光定量PCR方法检测抵抗素转染后及FGF-21处理后细胞GLUT1、PPAR-γmRNA表达的变化.PCR鉴定结果表明过表达抵抗素的HepG2模型细胞构建成功.GOD-POD法检测结果证明,模型细胞对胰岛素敏感性降低,但FGF-21仍能有效调节模型细胞的葡萄糖摄取,且呈现剂量依赖关系.实时荧光定量PCR方法检测发现,抵抗素转染后HepG2细胞GLUT1 mRNA表达增加,经FGF-21刺激后模型细胞与对照细胞相比GLUT1 mRNA的表达仍有上升趋势,PPAR-γ的变化不显著.上述结果表明,抵抗素过表达的肝细胞,对胰岛素敏感性降低,产生胰岛素抵抗,但FGF-21仍能有效调节其葡萄糖代谢.
- 刘淼王文飞刘铭瑶赵景壮白银郭茉任桂萍李德山
- 关键词：抵抗素胰岛素抵抗HEPG2
- 有机污染物的微生物修复研究进展被引量：1
- 2012年
- 多芳香烃(PAHs)、环硝胺类物质(RDX、HMX、Tetryl和CL-20)、多氯联苯(PCBs)、烷烃类化合物、氯乙烯类、硝基化合物等的有机污染物增多,对自然界和人类生活造成极大危害,自二十世纪七十年代便出现了利用微生物降解有机污染物的生物修复研究,但传统的有机污染物生物修复存在效率不高、难以维持等问题。二十世纪九十年代以来,随着分子生物学技术的迅速发展,其在污染生物修复中得到越来越多的应用,并有效地提高了生物修复效率。本文总结了近年来有机污染物污染修复中应用上述方法的研究,重点分析整理了一系列典型石油污染物降解途径中的加氧酶及其参考菌株,为今后有机污染物的生物修复提供参考。
- 王文飞刘铭瑶李德山
- 关键词：有机物污染物微生物
- 高效可溶性重组蛋白表达载体的构建被引量：9
- 2010年
- 本研究构建了两种高效表达可溶性重组蛋白的原核表达载体。一种载体由HisSUMO序列与pET30a(+)载体连接而成(命名为HisSUMO Express),表达的融合蛋白用Ni-NTA纯化,用SUMO蛋白酶I切割后可获得不留任何残基的重组蛋白。SUMO-蛋白酶I价格较贵,为减少表达蛋白的成本,第二种载体即在His-SUMO和目的序列之间加入羟胺切割位点(命名为HisSUMO Economic)。在HisSUMO Economic中表达的融合蛋白用Ni-NTA纯化,羟胺液切割后可获得仅留一个甘氨酸残基的重组蛋白。以在常规表达载体中难以表达的鼠源成纤维细胞生长因子-21(mFGF-21)为例,经葡萄糖消耗实验检测其活性,验证两种表达载体的效果。结果表明mFGF-21在两种载体中均获得了高效表达,融合蛋白占菌体总蛋白的40%以上,Ni-NTA纯化后的融合蛋白分别利用羟胺切割液和SUMO蛋白酶I切割,纯化的mFGF-21成熟蛋白回收量约为54mg/L,回收率约为6%。经两种载体表达后的mFGF-21蛋白均具有生物学活性,可促进脂肪细胞消耗葡萄糖,为进一步研究提供了基础。
- 姜媛媛刘铭瑶任桂萍朱慧萌李德山
- 关键词：高效表达载体
- FGF-21对H_2O_2诱导的大鼠心肌细胞H9c2氧化应激损伤的保护作用被引量：11
- 2014年
- 成纤维细胞生长因子-21(fibroblast growth factor-21,FGF-21)是机体内重要的代谢调节因子,但尚不清楚FGF-21对心血管系统的直接影响。本研究利用H2O2诱导的心肌细胞H9c2氧化应激模型,分别用MTT、流式细胞术、real-time PCR等方法评价FGF-21是否具有对抗氧化损伤引起的心肌细胞凋亡的能力及其相关作用机制。结果显示,FGF-21能提高H2O2处理后的H9c2细胞存活率,降低心肌细胞凋亡,并减少H2O2引起的ROS累积;而且FGF-21通过上调SOD活性以及调控Bcl-2/Bax的表达量,发挥抑制细胞凋亡的作用。研究结果证实,FGF-21能够保护心肌细胞免受氧化应激带来的损伤。
- 韩苗苗王文飞刘铭瑶李德山周兵于引航任桂萍
- 关键词：FGF-21心肌细胞过氧化氢氧化应激损伤
- 成纤维细胞生长因子21对胰岛素抵抗所致高血压的治疗作用被引量：9
- 2013年
- 本文研究考察成纤维细胞生长因子21(FGF21)对果糖诱导的胰岛素抵抗高血压模型的治疗作用及其机制。10%果糖诱导SD大鼠4周建立胰岛素抵抗高血压模型,成模后随机分为4组:模型对照组及FGF210.25、0.1和0.05μmol·kg-1·d-1剂量组,5只相同周龄的正常SD大鼠作为正常对照组。每天注射1次,治疗4周,给药期间每周监测大鼠体重,采用尾套法检测收缩压变化;口服葡萄糖耐量试验(OGTT)及胰岛素稳态评价模型检测胰岛素抵抗情况;给药结束时留取血清样本分别测定血清胰岛素、血脂、血糖水平。结果显示,治疗4周后,不同剂量FGF21治疗组大鼠收缩压均下降至正常水平[(122.2±3.5)mmHg,P<0.01],而注射生理盐水的模型对照组大鼠的收缩压在治疗期间一直维持在较高水平[(142.5±4.5)mmHg]。24 h观察各组大鼠血压发现,FGF21治疗组大鼠24 h血压基本维持在(130±4.5)mmHg,各时间段血压均显著低于模型对照组[(130±4.5)vs(143±5.5)mmHg,P<0.01]。FGF21治疗组大鼠血脂改善明显,总胆固醇与甘油三酯含量均显著下降至正常水平。FGF21各治疗组大鼠血清NO含量均显著高于模型对照组[(7.32±0.11),(7.24±0.13),(6.94±0.08)vs(6.56±0.19)μmol·L-1,P<0.01],且其改善程度呈现明显的剂量依赖性,表明FGF21可明显升高果糖诱导高血压模型大鼠血清NO含量,改善内皮释放NO功能。OGTT及HOMA-IR结果显示,经FGF21治疗4周后胰岛素抵抗亦明显得到改善,且呈现剂量依赖性。因此本研究揭示了FGF21通过改善胰岛素抵抗,显著降低SD大鼠由于胰岛素抵抗所引起的高血压。这一发现为临床应用FGF21治疗原发性高血压奠定了理论基础。
- 朱升龙任桂萍张振宇王文飞叶贤龙韩苗苗赵景壮徐彤宇刘铭瑶李德山
- 关键词：成纤维细胞生长因子21胰岛素抵抗高血压果糖
- 长期注射成纤维细胞生长因子21对二乙基亚硝胺诱发肝癌的预防作用被引量：7
- 2016年
- 研究成纤维细胞生长因子21(FGF21)对二乙基亚硝胺(DEN)诱导肝癌模型的预防作用及机制。健康雄性wistar大鼠随机分3组:FGF21组,模型对照组及正常对照组。FGF21组大鼠每天注射一次FGF21,注射20周。2周后,FGF21组大鼠和模型组大鼠同时每3 d注射一次DEN,直至试验结束。给药结束后,取各组大鼠血清样本测定肝功,统计各组大鼠肝癌发生率,比较各组大鼠肝脏内氧化应激水平。结果表明,FGF21治疗组肝功显著低于模型对照组,接近正常水平。通过分析各组大鼠肝脏变化发现,FGF21治疗组大鼠肝癌发生率为18.1%,而注射生理盐水的模型对照组肝癌发生率为60.0%。FGF21治疗组肝脏内的活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)含量显著低于模型对照组,接近正常对照组;FGF21治疗组肝脏内超氧化物歧化酶(SOD)活性与正常对照组持平,显著高于模型对照组。Real-time PCR结果显示,FGF21治疗组肝脏的抗氧化酶基因(G6pdh,GCL-c,Gpx-1,Sod2)表达水平显著高于模型对照组。结果表明,长期注射FGF21可通过抑制肝脏内氧化应激水平预防DEN诱导的肝癌。
- 李德山张瑛杰徐鹏飞袁清艳任桂萍刘铭瑶刘芝航
- 关键词：成纤维细胞生长因子21二乙基亚硝胺肝癌氧化应激
