刘青珍 作品数:22 被引量:45 H指数:4 供职机构: 武汉大学生命科学学院 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 更多>> 相关领域: 生物学 文化科学 医药卫生 农业科学 更多>>
杆状病毒表达系统及其基因组结构的基础与应用研究 齐义鹏 黄永秀 杨复华 李凌云 刘青珍 该项目属生物学科分子病毒学领域。主要内容包括昆虫杆状病毒载体构建,阳性重组病毒的筛选,基因组序列、结构和功能以及应用基础研究等4部分。该项目从1986年起历经13年,得到国家863、基金委、科委、教委、省市资助14次,科...关键词:关键词:杆状病毒表达系统 基因组结构 毒力测定 分子病毒学 病毒杀虫剂 用酵母双杂交系统分离一个新的人类细胞凋亡诱发基因 被引量:15 2000年 asy基因是最近发现的一个新的凋亡诱发基因,但其诱发凋亡的机制仍不清楚. 采用酵母双杂交系统,从人肺细胞系(WI-38)cDNA文库中克隆了一个asx相互作用蛋白 基因asyip(asy interacting protein). asyip在人的各种组织内均能组成型转录合成 1.8和 2.7 kb两种 mRNA转录本,但转录水平有明显差异,在脑组织中转录水平最高.而且, 脑组织中 2.7 kb mRNA转录水平大大高于 1.8 kb的转录本.序列分析表明两种转录本起 始于一个共同的 5’端,但 3’端加 poly(A)位点不同.两者共享一个大的可读框,编码 26 ku的蛋白ASYIP.推论的氨基酸一级结构表明,ASYIP含有两个大的强疏水区、两个蛋 白激酶C磷酸化位点和两个酪蛋白激酶磷酸化位点.C端具有一个内质网捕获信号 (Lys-Lys-Lys-Ala-Glu).免疫沉淀试验进一步验证ASYIP和ASY在哺乳动物细胞中可 以相互结合.与asy基因一样,asyip基因的大量表达能抑制肿瘤细胞Saos-2的生长,诱 发细胞凋亡,但效率比asy低. 齐兵 齐义鹏 M.Yutsudo 刘青珍关键词:酵母双杂交系统 两种新的凋亡诱发蛋白的聚合作用及其对细胞凋亡的调控 被引量:1 2003年 Asy(apoptosis/saibousi Yutsudo)是日本Yutsudo小组于1999年发现的一个新的人类细胞凋亡诱发基因。2000年齐兵等人通过酵母双杂交系统从人肺细胞系(W1-38)cDNA文库中克隆出一个能与ASY蛋白相互作用的蛋白的新基因haP(homologue ofasy protein)、已经证明ASY能在酵母细胞和哺乳动物细胞中形成同源二聚体,ASY与HAP能在酵母细胞中形成异源二聚体,ASY和HAP均能诱发肿瘤细胞Saos2和CGL4凋亡。通过酵母双杂交系统证明HAP能在酵母细胞中形成同源二聚体;通过交叉免疫沉淀证明HAP与ASY能在人类细胞中形成异源二聚体。通过AnnexinV,TUNEL,DNALadder和流式细胞计数等检测凋亡的技术,对asy,hap单独转染或共转染的人类正常细胞或肿瘤细胞的凋亡进行定性或定量检测,证明ASY和HAP不仅诱发人类肿瘤细胞凋亡,而且能诱发人类正常细胞凋亡,并且证明由ASY与HAP形成的异源二聚体可降低由ASY和HAP各自形成的同源二聚体诱发细胞凋亡的活性,揭示ASY与HAP形成同源或异源二聚体是调控人类细胞凋亡的重要机制。 刘青珍 甘淼 齐义鹏 李凌云 齐兵关键词:细胞凋亡调控 一个极待加强的RNA研究领域 刘青珍 齐义鹏关键词:RNA病毒 分子机制 文献传递 网络资源链接 RNA病毒基因组和转录复制多样性的分子基础 被引量:10 2001年 自然界中RNA病毒的种类和数量比DNA病毒多得多。根据基因组类型 ,RNA病毒可分为多种类型。许多研究者认为 :存在于古细菌Myxobacteria中、仅仅有一个逆转录酶基因的反转子 (Retron)可能是所有病毒的祖先。进化的模式如下 :反转子→反座子→反转录转座子→反转录病毒→副反转录病毒→DNA病毒。RNA病毒转录 /复制在很多特征上与DNA病毒迥然不同。依赖于RNA的RNA聚合酶是RNA病毒转录 /复制的主要催化剂。RNA病毒基因组转录和复制都从 3′端poly(A)或类tRNA结构或其他结构起始 ,内部终止是转录 ,通读到 5′末端终止是复制。RNA病毒的模板有正链病毒RNA模板、负链病毒RNA模板和全长正负链反基因组RNA模板。RNA模板的选择调控机制非常复杂 ,目前知之甚少。选择模板、RNA聚合酶与转录因子结合形成复制体是两种主要的调控方法。另外 ,5′UTR和 刘青珍 李凌云 齐义鹏 杨复华关键词:RNA病毒 转录 多样性 病毒基因组 重组昆虫杆状病毒和制备方法及其作为杀虫剂的应用 本发明公开了一种重组苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒,制备该重组多角体病毒的方法及重组多角体病毒单独或以组合物方式作杀虫剂的应用。本发明提供的重组多角体病毒,由于含有截短的苏云金芽孢杆菌杀虫晶体蛋白基因crylA(c)基因序列... 齐义鹏 杨复华 周文科 姚伦广 李凌云 肖化忠 吕颂雅 刘青珍文献传递 苏云金杆菌 delta -内毒素基因在土壤根癌农杆菌中的克隆和表达 刘青珍HAP蛋白疏水区的聚合功能及其与细胞凋亡的关系 2004年 asy和hap是一对新的细胞凋亡诱发基因 .二者单独转染细胞均能诱发细胞凋亡 ,能在酵母和哺乳动物细胞中形成同源二聚体 ,二者共转染酵母和哺乳动物细胞能形成异源二聚体 .同源二聚体诱发细胞凋亡 ,异源二聚体降低同源二聚体诱发细胞凋亡的活性 .氨基酸序列表明 ,HAP(homologousofASYprotein)含有内质网挽回模体 (KKKAE)、第一疏水区和第二疏水区 .对 3个功能区的缺失突变体研究显示 ,缺失内质网定位信号的HAPΔERS蛋白保留着同源聚合和与ASY异源聚合的能力 ,而分别缺失第一、第二疏水区的突变体HAPΔ4 8 139、HAPΔ15 7 2 18则丧失以上功能 ;通过流式计数法计算 3个缺失突变体诱发细胞凋亡比率 ,用生物统计学方法说明不同的比率与HAP诱发细胞凋亡的比率相比都有显著差异 .说明内质网定位信号、疏水区在HAP蛋白的诱发细胞凋亡过程中起重要作用 ,进一步揭示了HAP诱发细胞凋亡的机制 . 甘淼 刘青珍 齐义鹏 齐兵关键词:HAP 细胞凋亡 缺失突变体 重组昆虫杆状病毒和制备方法及其作为杀虫剂的应用 本发明公开了一种重组苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒,制备该重组多角体病毒的方法及重组多角体病毒单独或以组合物方式作杀虫剂的应用。本发明提供的重组多角体病毒,由于含有截短的苏云金芽孢杆菌杀虫晶体蛋白基因crylA(c)基因序列... 齐义鹏 杨复华 周文科 姚伦广 李凌云 肖化忠 吕颂雅 刘青珍文献传递 稳定表达egfp基因细胞的构建与克隆 被引量:9 2001年 将增强的绿色荧光蛋白 ( enhanced green fluorescent protein,EGFP)基因插在 HCMV( hum ancytom egolovirus)启动子下游 ,构建了表达质粒 p CA13 - e G,用脂质体 L ipofectin介导分别转染 He L a细胞、Vero细胞 ,仅通过细胞传代 ,就获得了能稳定高效表达 EGFP的绿色细胞 .比较发现 ,质粒 p CA13 - e G转染后 ,产生能高效表达 EGFP的 He L a细胞其比率高于 Vero细胞 ;EGFP高效表达对 Vero细胞的毒性大于对 He L a细胞的毒性 .本研究表明 ,绿色细胞轮廓清晰 ,由于其特有的性质 ,在用于细胞的形态观察、细胞分裂等研究时会有所作为 . 李志达 刘青珍 齐义鹏 杨涛关键词:绿色荧光蛋白 细胞分裂 EGFP基因 基因克隆