原向伟
- 作品数：40 被引量：117H指数：6
- 供职机构：江门市中心医院更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 重组35型腺病毒介导人骨形成蛋白基因对脂肪源性干细胞的诱导分化被引量：3
- 2007年
- 目的在体外运用人骨形成蛋白7(human bone morphogenetic protein7,hBMP-7)基因重组35型腺病毒(recombinant adenovirus's containing fibers derived from B-group serotype35,rAd5/F35)诱导大鼠脂肪源性干细胞(adipose-derived adult stem cell,ADASC)向成骨细胞定向分化,为骨组织工程探索新的细胞来源。方法以pcDNA1.1/氨苄青霉素-hBMP-7质粒为模板扩增hBMP-7基因,将回收的PCR产物片段克隆入pDC316载体,获得重组质粒pDC316-hBMP-7。骨架质粒pBHG-fiber5/35和穿梭质粒pDC316-hBMP-7共转染293细胞,同源重组产生rAd5/F35-hBMP-7。同样的方法构建rAd5/F35-增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)。在体外分别转染大鼠ADASC并留置空白对照。观察细胞形态和生长情况,ELISA检测转染基因的转录和表达,检测钙结节和骨钙素等成骨细胞表型。结果PCR、酶切鉴定表明rAd5/F35-hBMP-7质粒构建正确。rAd5/F35-EGFP对大鼠ADASC中转染效率可达90%以上,hBMP-7基因存在于转染后的ADASC中并表达相应的蛋白,诱导组钙结节形成,电镜见胞质中有钙质成分,碱性磷酸酶阳性,骨钙素表达增强。结论rAd5/F35介导hBMP-7基因可促进ADASC向成骨细胞定向分化。
- 康焱廖威明袁振华张珑涓原向伟雷磊黄保丁
- 关键词：腺病毒脂肪源性干细胞人骨形成蛋白基因治疗
- p14ARF增强顺铂诱导的骨肉瘤U2OS细胞凋亡的研究被引量：3
- 2010年
- 目的探讨p14ARF对顺铂诱导骨肉瘤U2OS细胞凋亡的影响及其机制,为提高骨肉瘤化疗敏感性提供依据。方法在不表达p14ARF的U2OS细胞中稳定转染pcDNA3.1-p14ARF质粒,构建稳定表达株;采用RT-PCR和Western blot法鉴定其表达;台盼蓝拒染法测定生长抑制作用;Hoechst33258荧光染色检测凋亡;Western blot法检测Caspase-3,9和PARP的表达和活化。结果 mRNA和蛋白水平,U2OS和U2OS-vec细胞未见p14ARF表达,U2OS-ARF细胞可见p14ARF的高表达;p14ARF单独对U2OS细胞的生长无影响,但顺铂(5μM)处理72小时后,U2OS-ARF细胞的生长抑制率明显高于U2OS和U2OS-vec细胞,相对于U2OS和U2OS-vec细胞,U2OS-ARF细胞不仅表现更为明显的凋亡形态学变化,还明显出现了Caspase-3,9和PARP的活化裂解。结论 p14ARF能够增强顺铂诱导的骨肉瘤U2OS细胞毒作用和凋亡,通过激活Caspase-PARP级联活化,提高骨肉瘤U2OS细胞对顺铂的敏感性。
- 原向伟廖威明黄秀芳梁胜根陈忠羡范全秦英朱孝峰
- 关键词：顺铂骨肉瘤细胞凋亡化疗敏感性
- 前路分节段减压植骨融合术在治疗多节段脊髓型颈椎病的临床疗效分析被引量：3
- 2012年
- 目的探讨经前路分节段减压植骨融合术治疗多节段颈椎病的临床效果。方法对我院近3年收治的37例多节段颈椎病患者采用分节段减压术的连续性资料,其中21例3节段患者采用单间隙减压+单椎体次全切除植骨融合内固定术治疗,16例4节段段患者采用保留C5椎体的切除C4、C6椎体的分节段减压。分析手术时间、术中出血量、术后6个月植骨融合率、JOA评分改善率,节段性前突角度。结果所有患者均获随访,平均12个月。手术时间110～230min,平均155min。术中失血约150～650mL,平均325.5mL。术后颈椎X线照片提示均恢复颈椎生理曲度,及椎间高度;6个月植骨融合率91.8%。无植骨块脱出、钢板螺钉折断、脑脊液瘘等严重并发症发生。术后3、6个月JOA评分为(13.6±1.9)、(14.0±1.6)分,术后3、6个月平均改善率为53.4%、58.9%。节段性前突角度术前(9.68±3.2)°,术后(16.52±2.2)°。结论颈前路分节段减压植骨融合术治疗多节段颈椎病是较好的手术方式,值得提倡。
- 陈忠羡付朝华梁胜根范全薛忠林谢清华赵振东原向伟雷洪俊秦英
- 关键词：多节段颈椎病分节段减压植骨
- 腺相关病毒介导人骨形态发生蛋白7基因体外转染脂肪源性干细胞的研究被引量：4
- 2006年
- 目的构建人骨形态发生蛋白7(hBMP7)基因重组腺相关病毒载体并观察其在脂肪源性干细胞(ADAS cells)中的表达,为骨组织工程探索新的基因治疗方法和细胞来源。方法以pcDNA1．1／Amp-hBMP7质粒为模板扩增,将回收的PCR产物片段克隆入pUC18载体,获得重组质粒pUC18-hBMP7。双酶切质粒pUC18-hBMP7、pSNAV,回收的两片段转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,获得重组质粒PSNAV-hBMP7。用重组Ⅰ型单纯疱疹病毒HSV1-rc／△UL2感染BHK-21细胞,裂解细胞收获病毒液。采用“氯仿处理-PEG／NaCl沉淀-氯仿抽提”三个步骤分离浓缩和纯化,测定病毒滴度。培养大鼠ADAS cells,并检测细胞表面标记物。在体外分别转染rAAV2-hBMP7和rAAV2-GFP,流式细胞仪、Western-blot方法检测转染基因的表达。结果PCR、酶切鉴定以及测序分析表明,BMP7基因成功克隆入质粒pSNAV-hBMP7载体中,并在BHK21细胞中成功包装出具有感染活性的重组腺相关病毒载体rAAV2-hBMP7。早期对ADAS cells的转染效率可达90％, Western-Blot方法检测到第1周与第8周的转染组细胞均有蛋白水平的表达。结论成功构建了hBMP7基因重组腺相关病毒载体和培养出大鼠ADAS cells,rAAV2-hBMP7载体在体外可高效转染大鼠ADAS cells。
- 康焱廖威明盛璞义张珑涓原向伟雷磊黄保丁
- 关键词：腺相关病毒脂肪源性干细胞基因治疗
- 姜黄素诱导人骨肉瘤U2OS细胞凋亡的实验研究被引量：3
- 2008年
- 目的探讨姜黄素对人骨肉瘤U2OS细胞凋亡的诱导作用及其分子机制,为姜黄素应用于骨肉瘤治疗提供实验依据。方法以不同浓度的姜黄素处理骨肉瘤U2OS细胞,应用MTT法检测细胞活性,用Bliss法计算IC50值,通过流式细胞术和Hoechst 33258荧光染色检测细胞凋亡,比色法检测Caspase-3、8、9活性。结果2.5、5.0、10.0、20.0、40.0、80.0μmol/L的姜黄素明显抑制骨肉瘤U2OS细胞生长并呈剂量依赖关系,48h的IC50值为21.63μmol/L;20μmol/L姜黄素作用12、24、48h诱导U2OS细胞的凋亡率分别为:12.5%、23.1%和46.2%,细胞出现明显的凋亡特征性形态变化;姜黄素处理U2OS细胞48h后Caspase-3、8、9的活性明显增强。结论姜黄素可通过激活Caspase级联活化而抑制骨肉瘤U2OS细胞生长并诱导其凋亡。
- 范全原向伟马俊辉
- 关键词：姜黄素骨肉瘤细胞凋亡CASPASE
- α干扰素增强骨肉瘤细胞对依托泊苷敏感性的实验研究被引量：4
- 2014年
- 目的探讨α干扰素(IFN-α)在人骨肉瘤U2OS和MG63细胞中对依托泊苷敏感性的作用及其机制。方法采用IFN-α和依托泊苷单独或联合处理骨肉瘤U2OS和MG63细胞72 h,应用流式细胞术和DNA Ladder检测细胞凋亡的变化,Western blot法检测PARP、p53、MDM2、Bax、Bcl-2的表达。结果流式细胞术表明IFN-α在p53正常的U2OS细胞中明显增强依托泊苷诱导的凋亡(P<0.05),却对依托泊苷诱导p53突变的MG63细胞凋亡无明显影响(P>0.05);DNA Ladder表明与单药组相比,IFN-α与依托泊苷联用72 h在U2OS细胞出现明显的DNA梯形条带,而在MG63细胞中无此现象;Western blot结果表明在U2OS细胞中联合用药组出现PARP的明显裂解活化,并且IFN-α明显增强依托泊苷引起的p53信号通路p53、MDM2、Bax等凋亡基因的表达,并抑制抗凋亡基因Bcl-2的表达,而在MG63细胞中则无此现象。结论 IFN-α能够通过激活p53依赖性信号通路增强依托泊苷诱导的骨肉瘤U2OS细胞凋亡,联合应用IFN-α和传统化疗药物如依托泊苷可能成为提高骨肉瘤化疗敏感性的有效途径。
- 黄秀芳原向伟
- 关键词：Α干扰素依托泊苷骨肉瘤P53
- α干扰素通过 p53依赖性通路增强阿霉素诱导的骨肉瘤细胞凋亡被引量：1
- 2016年
- 目的：探讨α干扰素（IFNα）对阿霉素诱导骨肉瘤细胞凋亡的影响及其分子机制。方法采用α干扰素（IFN）和阿霉素单独或联合处理骨肉瘤 U2OS 和 MG63细胞72 h，通过 MTT 法测定细胞生长抑制，应用流式细胞术、Hochest 33258荧光染色和 DNA Ladder 检测细胞凋亡，免疫印迹法检测聚腺苷酸二磷酸核糖转移酶（PARP）、凋亡相关蛋白（p53、Bax、Bcl－2、Mdm2、p21、Caspase－3）和PARP 的表达，实时聚合酶链反应（RT－PCR）检测 p53在 mRNA 水平的表达，通过 siRNA 干扰进行 p53的表达沉默。结果IFNα本身对 U2OS 和 MG63无细胞毒作用，但在 p53正常的 U2OS 而非 p53突变的 MG63细胞中增强阿霉素引起的细胞毒作用和凋亡，在 IFNα＋阿霉素组的 U2OS 细胞出现更明显的凋亡形态学改变和 DNA 梯形条带。在 U2OS 细胞中，IFNα对各基因的表达无影响，p53、Bax、Mdm2、p21可被阿霉素上调，并被联合用药进一步增强。而 Bcl－2在阿霉素作用后下调，并被联合用药进一步下调，在 MG63细胞中，各基因的表达无明显变化。在 U2OS 细胞中转染 p53－siRNA 阻断了p53的表达，经联合用药处理72 h 后，较空白组和对照 siRNA 组，转染 p53－siRNA 组的细胞活力明显增高明显，并且相对于对照 siRNA 组，联合用药引起的 caspase－3和 PARP 的活化也在 p53－siRNA 组明显减弱。结论IFNα可通过 p53依赖性凋亡途径增强阿霉素诱导的骨肉瘤细胞凋亡，联合 IFNα生物治疗和化疗可望应用于骨肉瘤的治疗。
- 原向伟黄秀芳陈忠羡梁胜根廖威明
- 关键词：骨肉瘤Α干扰素阿霉素P53
- 经皮椎体成形术致骨水泥渗漏的原因分析
- 目的探讨经皮椎体成形术中骨水泥外渗原因及防范方法。方法135例行经皮椎体成形术的患者纳入本研究,共171个椎体。对患者进行术前VAS疼痛评分,并将塌陷的椎体根据Genant半量法进行分级。按常规方法实施椎体成形术。结果1...
- 薛忠林陈忠羡范全付朝华雷洪俊谢清华原向伟秦英刘一涛
- 气管推移训练对颈椎前路减压植骨融合内固定术术后康复影响的研究
- 2022年
- 目的探讨术前气管推移训练对颈椎前路减压植骨融合内固定术的患者术后并发症及术后康复的影响。方法回顾性分析江门市中心医院2017年1月到2021年7月行颈椎前路减压植骨融合内固定术的患者205例的临床资料,其中行单节段颈椎前路减压植骨融合内固定术的患者122例,行双节段颈椎前路减压植骨融合内固定术的患者83例。单节段患者中62例为术前气管推移训练组,60例为对照组。双节段患者中45例为气管推移训练组,38例为对照组。观察和分析的指标包括术后饮水呛咳、声音嘶哑、咽喉疼痛时间、咽喉疼痛程度、术后声音嘶哑及术后吞咽困难。结果205例患者全部顺利完成手术,无患者死亡。在单节段颈椎前路减压植骨融合内固定术的患者中,气管推移训练组和对照组在术后饮水呛咳、术后声音嘶哑、术后吞咽困难等方面的差异无统计学意义(P>0.05),但气管推移训练组比对照组术后咽喉疼痛的时间更短,术后咽喉疼痛的程度更轻(P<0.05)。在双节段颈椎前路减压植骨融合内固定术的患者中,气管推移训练组比对照组发生术后饮水呛咳、声音嘶哑、吞咽困难的患者更少(P<0.05),术后咽喉疼痛的时间更短、程度更轻(P<0.05)。结论颈椎前路减压植骨融合内固定术的患者术前进行气管推移训练有利于患者术后的术后快速康复,增强患者的术后舒适感,尤其对双节段颈椎前路减压植骨融合内固定术的患者更加明显。
- 覃芝蓉陈凤莲原向伟
- 关键词：气管推移训练颈椎病
- Survivin在骨肉瘤中的表达及其意义被引量：1
- 2004年
- 目的 探讨凋亡抑制基因Survivin与骨肉瘤发生发展、病理分级之间的关系。方法 用免疫组织化学S -P染色技术对 30例骨肉瘤标本进行Survivin蛋白表达的检测 ,以 10例骨软骨瘤作为对照组。结果 骨软骨瘤组无Survivin阳性表达 ,骨肉瘤组阳性表达率为 83 3% ,两者染色率与染色强度相比差异均具有显著性(P <0 .0 5 ) ,Ⅱ、Ⅲ级组与Ⅰ级组染色率与染色强度相比差异均具有显著性 (P <0 .0 5 )。结论 Survivin蛋白不仅可以作为一种新的骨肉瘤诊断标志物 。
- 秦本刚贺长清吴学建原向伟
- 关键词：骨肉瘤SURVIVIN基因免疫组织化学
