吴仁彪
- 作品数：1 被引量：0H指数：0
- 供职机构：吉林大学畜牧兽医学院更多>>
- 发文基金：吉林省科技发展计划基金国家科技支撑计划更多>>
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- 牛型结核分枝杆菌MPT64蛋白的原核表达及纯化
- 2011年
- 目的原核表达并纯化牛型结核分枝杆菌MPT64蛋白。方法以牛型结核分枝杆菌Vallee株全基因组DNA为模板,PCR扩增MPT64基因,克隆至pET-28a(+)载体,构建重组原核表达质粒pET-MPT64,转化至E.coli BL21(DE3)中,IPTG诱导表达。表达产物经SDS-PAGE鉴定后,用Ni-NTA亲和层析纯化,Western blot鉴定纯化蛋白。结果获得的MPT64基因测序结果与GenBank中登录的MPT64基因核苷酸序列同源性为100%;重组表达质粒pET-MPT64经酶切鉴定表明构建正确;表达的重组MPT64蛋白相对分子质量约为26 000,主要以可溶性形式表达,表达量约占全菌总蛋白的11%;纯化的重组MPT64蛋白纯度达93%,可与抗结核牛血清发生特异性反应。结论 成功原核表达并纯化了牛型结核分枝杆菌MPT64蛋白,其可作为诊断抗原用于新型牛结核病的检测。
- 谭为聂映吴仁彪程黎庆闫广谋张西臣张瑞
- 关键词：原核细胞基因表达纯化
