吴敬
- 作品数：180 被引量：522H指数：11
- 供职机构：江南大学生物工程学院工业生物技术教育部重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家杰出青年科学基金江苏省自然科学基金更多>>
- 相关领域：轻工技术与工程生物学化学工程文化科学更多>>
- T26P和A30P位点突变对Thermobifida fusca葡萄糖异构酶热稳定性及活性的影响被引量：2
- 2013年
- 通过定点突变技术构建了嗜热菌Thermobifida fusca葡萄糖异构酶(TFGI)的3个突变体:TFGI/T26P,TFGI/A30P和TFGI/T26P/A30P。结果表明突变体TFGI/A30P的热稳定性得到提高,70℃下半衰期从14.9h提高到22.3h,且最适温度不变,最适温度下的比酶活保持不变。而突变体TFGI/T26P和TFGI/T26P/A30P在70℃下半衰期都降到8.1h,最适温度和最适温度下的比酶活也都显著降低。TFGI及其单突变体的三维结构模型叠加分析结果表明:突变体A30P没有产生其它分子间作用力,TFGI的"Phe27环"的基本结构没有改变,因脯氨酸残基降低了蛋白解折叠的熵值,所以其热稳定性提高而比活力不变。
- 邓辉陈晟陈坚吴敬
- 关键词：定点突变热稳定性嗜热菌葡萄糖异构酶
- 发酵乳杆菌来源4,6-α-葡萄糖基转移酶的酶学表征及产物性质鉴定被引量：3
- 2021年
- 4,6-α-葡萄糖基转移酶(4,6-α-GTs)能以直链淀粉为底物合成含α(1-6)键的α-葡聚糖,在酶法合成膳食纤维中具有很大的应用潜力。根据4,6-α-GTs氨基酸序列中的保守区段设计引物,从发酵乳杆菌Lactobacillus fermentum基因组中PCR扩增得到一条假定GTFB-like 4,6-α-GTs基因(命名为gtf16),构建重组质粒pET15b-gtf16并在宿主大肠杆菌Escherichia coli BL21(DE3)成功表达,纯化后对其进行酶学表征。结果表明,该酶最适pH为5.0,最适温度为40℃。通过薄层色谱、NMR光谱、水解酶水解等检测手段对Gtf16酶转化产物进行系统的表征,发现其产物具有以下特征:与已报道的来源于罗伊氏乳杆菌Lactobacillusreuteri121菌株的4,6-α-葡萄糖基转移酶-GtfB与直链淀粉作用后的产物异麦芽寡糖结构类似;产物键型中α(1-6)键占比可达75%,产物平均分子量为23 793 Da;产物被消化酶水解后得到的抗消化成分含量可达88.22%。
- 盛露菲杨卫康吴敬陈晟
- 关键词：克隆表达酶学性质异麦芽寡糖
- 利用游离型表达质粒强化毕赤酵母表达木聚糖酶被引量：5
- 2018年
- 巴斯德毕赤酵母是用途广泛的蛋白表达系统。目前用于毕赤酵母的质粒主要以整合型质粒为主,很少见到游离的质粒用于外源基因的表达。文中通过将来源于酵母自身的自主复制序列连接到酵母整合型表达载体pGAP中构成自主复制的游离型表达载体pGAPZαA-PARS,将该载体用于表达木聚糖酶基因。转化毕赤酵母后同传统的整合型表达菌株相比,以甘油为碳源时最高酶活达到343 U/mL,比整合型表达提高了45.9%。同时游离载体表达重组酶比活相对整合表达提高了81.2%。为了节约发酵成本,进一步研究了分别以甘油、葡萄糖、蔗糖、混合碳源(蔗糖︰甘油=1︰2)等不同碳源下游离型重组菌株的表达水平。发现甘油表达水平最高,蔗糖最低,但是以工业葡萄糖为碳源时产酶成本最低。由于pGAP载体不需要以甲醇为碳源,因而文中所构建的游离载体pGAPZαA-PARS极大促进了毕赤酵母在食品行业中的应用。同时,游离型载体可大幅度提高表达水平,为进一步研究提高GAP启动子的高效表达奠定了基础。
- 潘阳吴丹吴敬
- 关键词：毕赤酵母木聚糖酶GAP启动子蛋白质表达
- 浅谈艺术染整工艺造型特色在家用纺织品中的应用被引量：2
- 2015年
- 艺术染整工艺区别于传统扎染与染整工艺,其丰富的工艺种类与三维造型特色,具有视觉工艺差别化的优势,能不断开拓着设计者的创新思维,有利于民族工艺的推广和发展。
- 吴敬奚燕锋
- 关键词：艺术染整家用纺织品
- 重组蔗糖异构酶的制备及应用条件优化被引量：3
- 2015年
- 对重组菌株E.coli BL21(DE3)/p ET-24a-pal I摇瓶发酵产酶进行研究,探讨了3 L发酵罐中不同乳糖诱导浓度对菌体高密度发酵产酶的影响。结果表明,摇瓶发酵得到胞外上清酶活253.1 U/m L,3 L发酵罐高密度发酵时,在0.4 g/(L·h)乳糖诱导浓度下,发酵上清酶活可达到最大值654 U/m L。对重组蔗糖异构酶转化蔗糖生成异麦芽酮糖的酶转化条件进行了优化,结果表明,当底物浓度为400 g/L,反应初始p H 6.5,温度30℃,加酶量20 U/g蔗糖,转化时间8 h,异麦芽酮糖可以达到最大转化率87.9%。
- 程胜段绪果吴敬
- 关键词：异麦芽酮糖酶转化摇瓶发酵高密度发酵
- 南通蓝印花布成衣创新设计
- 2013年
- 南通蓝印花布历史悠久,有着深厚的艺术底蕴,唯有在创新理念的指导下,才能使其得到传承与发展。本文针对传统南通蓝印花布成衣设计存在的弊端,通过设计实践,探索了现代南通蓝印花布在图案造型、色彩设计、材料设计及多元化成衣设计方面的创新艺术手法,使古老的南通蓝印花布表现出现代气息。
- 奚燕锋吴敬梁惠娥
- 关键词：蓝印花布成衣设计艺术手法图案造型
- Bacillus stearothermophilus NO2环糊精葡萄糖基转移酶Leu277突变提高α-环糊精产量
- 2023年
- 环糊精葡萄糖基转移酶(cyclodextrin glucosyltransferase,CGTase)能够以淀粉为底物发生环化反应生成环糊精,包括α-环糊精(α-cyclodextrin,α-CD)、β-环糊精及γ-环糊精,其中α-环糊精产量低且易降解。该研究选择Bacillus stearothermophilus NO2来源的CGTase,考察其突变体E142P、L277M、L277F、E142P/L277M、E142P/L277F、L277M/N353A及L277F/N353A以可溶性淀粉为底物生产α-CD的能力。与野生型相比,最优突变体为E142P/L277M,α-环糊精产量提高1.7 g/L,且在产物中占比提高14.3%。分子动力学(molecular dynamics,MD)模拟结果表明,E142P/L277M突变体中2个突变位点相互影响较小。此外,L277M/N353A催化效果较差,MD结果表明该突变体整体结构变化较大且溶剂可及表面积增大,不利于转糖苷反应的发生。该研究为CGTase的分子改造提高环化反应活性以及CGTase在α-环糊精工业化生产中提升产量提供了新思路。
- 孔德民左方圆吴敬王蕾
- 关键词：环糊精葡萄糖基转移酶可溶性淀粉Α-环糊精定点突变环化反应
- 重组角质酶的制备及合成乙酸乙酯条件优化
- 2018年
- 为了实现镰孢菌角质酶的高效表达,对重组菌株P. pastoris KM71/pPIC9K-ScCuA在3 L发酵罐进行了发酵工艺优化,获得的最优发酵条件为:诱导温度28℃,初始诱导菌浓OD600为100,诱导阶段甲醇体积分数为1%条件下进行诱导产酶。在该条件下发酵138 h时上清酶活可达到最大值419 U/mL,是优化前的2倍。对重组角质酶在有机溶剂中合成乙酸乙酯的酯化条件进行了优化,结果表明,当底物乙酸浓度为0.1 mol/L,乙醇浓度为0.15 mol/L,温度50℃,在异辛烷中反应16 h,乙酸乙酯可以达到最大转化率94.12%。
- 郭小杰宿玲恰吴敬陈晟
- 关键词：毕赤酵母高密度发酵酯合成乙酸乙酯
- 重组大肠杆菌产角质酶-CBM摇瓶发酵优化及分泌表达研究被引量：4
- 2011年
- 在TB培养基的基础上,通过单因素分析和正交设计对重组大肠杆菌产角质酶-CBM发酵进行优化,得到最适培养基的组分为:甘油5 g/L,蛋白胨16 g/L,MgSO4.7H2O 2.5 mmol/L,K2HPO413.7 g/L,KH2PO41.53 g/L,菌体生长至对数前中期时添加终浓度为1 g/L乳糖和0.75 g/L甘氨酸,30℃发酵48 h,角质酶-CBM产量可达63 U/ml,较TB培养(20 U/ml)提高了近3倍。考察了热激作用、渗透调节物质及温度两控制对角质酶-CBM分泌表达的影响,在添加Lactose和Glycine后,发现在添加终浓度为75 mmol/L的L-脯氨酸,37℃热激1 h或47℃热激0.5 h,变温至25℃发酵,角质酶-CBM产量可达90 U/ml,较TB恒温培养提高了近四倍。
- 郭森吴丹陈晟吴敬陈坚
- 关键词：正交设计渗透调节物质
- 淀粉基未来食品及其制备方法研究进展被引量：9
- 2021年
- 随着现代社会经济的快速发展,人们生活水平显著提高,饮食需求从吃饱求生存转变为吃好求健康,未来食品成为食品领域学术界和产业界关注的热点。以淀粉基食品为代表的碳水化合物为人体主要能量来源,但淀粉基食品在人体内易消化后造成能量过剩,带来一系列亚健康问题。在加工过程中可通过改变淀粉及其部分降解产物分子结构或键型来降低其热量,同时还兼具益生功能,这有利于迎合未来大众消费者对营养健康的需求,已成为未来食品领域研究的重要组成部分。作者概述了淀粉改性产品种类及其生化特征和生理功能,并重点阐述了其制备方法研究进展,可为进一步开发和生产淀粉基未来食品提供理论基础和技术指导。
- 宿玲恰吴敬
- 关键词：淀粉淀粉加工健康食品
