唐娜
- 作品数：106 被引量：244H指数：8
- 供职机构：山东省滨州畜牧兽医研究院更多>>
- 发文基金：山东省自然科学基金现代农业产业技术体山东省现代农业产业技术体系创新团队建设专项资金系建设专项资金山东省自主创新成果转化重大专项项目更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学政治法律更多>>
- ORF016基因缺失型山羊痘病毒株及其制备方法和应用
- 本发明公开了一种gRNA，所述gRNA序列如SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：2所示，本发明还公开了重组质粒、ORF016基因缺失型山羊痘病毒株及其制备方法和应用。本发明首次通过基因敲除方法获得了ORF016基...
- 唐娜沈志强张倩苑文娴王金良魏凤任艳玲
- 文献传递
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒SDZP P126株GP2基因序列分析及其对病毒增殖的影响
- 2019年
- 旨在研究1株连续传代的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV) SDZP P126 GP2基因的变异情况,以及GP2对病毒增殖的影响。构建GP2基因全长真核载体pEGFP-N1-GP2,利用生物学软件对GP2基因进行核苷酸和氨基酸的同源性分析,并将重组质粒pEGFP-N1-GP2转染到Marc-145细胞上,接毒后检测对病毒增殖的影响。通过GP2基因核苷酸和氨基酸的同源性分析,发现9个碱基的突变,这9个碱基的突变导致了5个氨基酸的突变。其中氨基酸序列中的第10位由亮氨酸突变为苯丙氨酸,这一突变在多株致弱毒株中存在,在Marc-145细胞转染重组质粒pEGFP-N1-GP2对病毒的增殖无显著影响。初步推断SDZP P126 GP2基因的突变对病毒在Marc-145细胞上增殖没有影响。
- 张倩苏兆军魏凤毕艳丽肖跃强王金良苗立中唐娜
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒增殖
- PRRSV经典与高致病性毒株RT-PCR鉴别检测方法的建立被引量：12
- 2010年
- 根据GenBank登录的经典与高致病性PRRSVNsp2序列,设计了1对引物,所扩增的序列包含高致病性毒株缺失部分,用于区分经典与高致病性毒株,并对扩增条件进行了优化。结果表明,应用该方法,能从经典与高致病性PRRSV基因组中分别扩增出573,483bp的特异性片段,病毒基因组混合后能够同时扩增;并可以检测出1.8TCID50/100μL经典毒株及0.6TCID50/100μL高致病毒株的病毒RNA;对CSFV,JPV,PEDV,TGEV,RV,PPV,PRV,PCV-2等常见猪病毒病病原的鉴别诊断均为阴性;对分离的8株PRRSV进行检测,3株为经典毒株,5株为高致病毒株;对采集的59份确诊病料进行了检测,21份为经典毒株感染,38份为高致病毒株感染。本研究建立的RT-PCR诊断方法,具有特异、灵敏、快速等特点,可用于区分PRRSV经典与高致病毒株。
- 肖跃强管宇唐娜魏凤杨慧曲光刚沈志强
- 关键词：PRRSVNSP2基因RT-PCR
- 邻位连接技术及其在病原检测中的应用
- 2011年
- 邻位连接技术(proximity ligation assay,PLA)是近年新研发的一种蛋白质体外分析技术,该技术运用邻位连接与实时定量PCR扩增原理,通过一对可特异性识别靶蛋白的邻位探针进行双识别并连接产生可PCR扩增的检测信号,实现蛋白质的定量检测。该技术综合了抗原抗体结合的高特异性和实时定量PCR技术的高灵敏度等多方面优势,已经迅速应用到生物标记因子检测、蛋白质功能研究等领域,在疾病病原学诊断方面也取得了初步的进展。论文综述了邻位连接技术的原理,并介绍了其在疫病病原学诊断领域的研究进展。
- 唐娜王金良曲光刚沈志强
- 关键词：蛋白质分析疾病诊断病原学检测
- 表达EGFP重组猪繁殖与呼吸综合征病毒的构建与鉴定被引量：3
- 2020年
- RT-PCR获得猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)XZ06a株基因组,在基因组5’末端、3’末端分别添加锤头样核酶、丁型肝炎病毒核酶序列,并插入改造的pCAGEN表达载体中,构建DNA-launched感染性克隆,然后在病毒基因组ORF1b与ORF2间引入ORF6 TRS序列、酶切位点及EGFP基因,转染Marc-145细胞拯救表达EGFP的重组病毒并噬斑克隆纯化,Western blot检测EGFP表达并对获得的表达EGFP的重组病毒进行TCID50测定与分析。结果显示:PRRSV基因组大小为15145 nt,转染后5~7 d即可观察到重组病毒所致特异性病变灶,经过噬斑纯化,能够观察到携带EGFP基因的重组病毒在对应病变灶均有绿色荧光,最终获得稳定表达EGFP的重组病毒,且重组病毒感染16 h时即可检测EGFP表达;与亲本病毒相比,表达EGFP重组病毒致细胞出现病变时间有所延长,增殖滴度有所降低。本研究成功构建了表达EGFP的重组PRRSV,为开展PRRSV病毒复制机制、感染特性、致病机制、疫苗开发等研究奠定了基础。
- 唐娜杨慧刘磊张松林于雪孙培姣沈志强肖跃强
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒感染性克隆EGFP
- 一种用于动物原代细胞快速小量制备的装置
- 一种用于动物原代细胞快速小量制备的装置，涉及细胞制备技术领域，解决了现有技术动物原代细胞制备步骤繁琐和污染率高的问题，包括预设数量的收集管体，所述的收集管体内设置有密封连接的筛网，收集管体的顶部设置有密封连接的密封盖；收...
- 唐娜徐倩倩王文秀高庆芳
- 杂交猪IL-2和IL-6全基因克隆及序列分析被引量：2
- 2009年
- 为研究杂交猪白细胞介素2(IL-2)和白细胞介素6(IL-6)在机体免疫应答中的作用,将杂交猪外周血淋巴细胞在伴刀豆球蛋白A(Con A)的刺激下进行体外培养后,提取淋巴细胞总RNA,应用RT-PCR技术扩增出杂交猪淋巴细胞IL-2和IL-6的cDNA,克隆到pMD18-T载体上并测序。测序结果表明:杂交猪IL-2基因核苷酸序列与参考序列的同源性为100%;IL-6基因核苷酸序列与GenBank登录的参考序列的核苷酸同源性在99.8%～100%之间,推导氨基酸同源性在99.1%～100%之间。
- 沈志强汪明赵德明王金良唐娜曲光刚
- 关键词：白细胞介素2白细胞介素6杂交猪
- 用于同时检测PEV和PTV的直接扩增荧光RT-PCR引物探针组和试剂盒及方法
- 本发明公开了一种用于同时检测PEV和PTV的直接扩增荧光RT‑PCR引物探针组和试剂盒及方法，所述引物探针组包括4条不同的引物和2条不同的探针，其中，2条扩增PEV的引物，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1～2所示；1...
- 于新友王文秀李天芝唐娜刘博谢金文谷英华
- 文献传递
- AQP1突变型基因、蛋白、细胞系及其应用
- 本发明公开了鸡AQP1突变型基因，突变型蛋白、该基因突变细胞系及其在细胞悬浮培养中的应用。本发明还公开了AQP1突变型细胞系的制备方法。本发明通过敲除了鸡胚成纤维细胞系DF‑1细胞AQP1蛋白第一个跨膜区后间隔序列，获得...
- 唐娜沈志强管宇徐倩倩苗立中王金良苑文娴高庆芳张倩
- 文献传递
- 山羊痘病毒AV41株在三种原代细胞上的培养特性比较
- 本研究分别采用常规方法制备了绵羊睾丸细胞、绵羊肾细胞、犊牛睾丸细胞三种原代细胞，接种山羊痘病毒细胞弱毒AV41株进行传代培养，比较该病毒株在三种细胞上的病变时间、病变形态、病毒传代稳定性等增殖特性，并进行特异性、安全性、...
- 唐娜孙翠平王文秀张倩苗立中管宇沈志强
- 关键词：山羊痘病毒疫苗免疫细胞培养
