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孔洁

作品数：1 被引量：1H指数：1
供职机构：上海交通大学医学院上海市肿瘤研究所更多>>
发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
相关领域：医药卫生更多>>

合作作者

文献类型

  • 1篇中文期刊文章

领域

  • 1篇医药卫生

主题

  • 1篇真核
  • 1篇人源
  • 1篇特异
  • 1篇特异性
  • 1篇特异性抗体
  • 1篇细胞
  • 1篇细胞培养
  • 1篇细胞培养技术
  • 1篇抗体
  • 1篇DKK1
  • 1篇哺乳动物
  • 1篇哺乳动物细胞

机构

  • 1篇上海交通大学

作者

  • 1篇邓云
  • 1篇孔娟
  • 1篇屠红
  • 1篇张志刚
  • 1篇覃文新
  • 1篇李宗海
  • 1篇游海燕
  • 1篇胡素文
  • 1篇孔洁
  • 1篇蒋华
  • 1篇沈秋瑾
  • 1篇倪涛

传媒

  • 1篇肿瘤

年份

  • 1篇2011
共 1 条 记 录，以下是 1-1
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排序方式：
人源DKK1真核悬浮分泌表达系统的建立及其特异性抗体的制备和鉴定被引量：1
2011年
目的:利用哺乳动物细胞悬浮培养表达系统分泌表达人源Dickkopf-1(DKK1)蛋白,纯化蛋白并制备特异性抗体。方法:构建DKK1真核表达载体pCMVcStrep-DKK1,并借助脂质体将载体瞬时转染入Free-Style293-F细胞(无血清培养),ELISA和蛋白印迹法检测DKK1蛋白表达量。利用亲和层析法纯化DKK1蛋白,Wnt信号通路荧光素酶报告系统检测其生理活性。以纯化的DKK1蛋白免疫BALB/c小鼠获得相应抗体,并初步鉴定其抗原特异性。结果:DKK1蛋白分泌表达在Free-Style293-F细胞培养液中,蛋白浓度在转染后第5天达最高(20mg/L)。所纯化的DKK1蛋白能够抑制Wnt3a蛋白诱导的报告基因的表达。抗DKK1小鼠抗体能特异性识别细胞内源性DKK1蛋白。结论:建立了在哺乳动物细胞悬浮培养系统中高效分泌表达人源DKK1重组蛋白的表达系统,并获得相应的特异性抗体,为其下一步结构与功能研究及在肿瘤中的应用奠定了实验基础。
沈秋瑾孔娟邓云蒋华胡素文孔洁倪涛游海燕李宗海屠红张志刚覃文新
关键词：细胞培养技术哺乳动物细胞
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