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肝癌相关基因HTA的重组表达及单克隆抗体的制备: 目的:本研究将肝癌相关基因(HTA)进行重组表达并制备抗HTA单克隆抗体,初步分析HTA蛋白功能及其表达谱,为进一步研究其在肝癌发生、发展中的作用及其作为肝癌诊断标志和潜在免疫治疗靶点的可行性及临床意义奠定基础。　　 ...; 宋婕; 关键词：肝细胞癌原核表达单克隆抗体蛋白功能

STC1过表达抑制人宫颈癌CaSki细胞增殖被引量：1: 2011年; 目的研究STC1基因对人宫颈癌CaSki细胞增殖及周期的影响。方法 CaSki细胞分为3组:实验组转染pcDNA3.1(+)-STC1质粒;空载体转染pcDNA3.1(+)空载体;空白对照组不加任何干扰。挑选稳定表达克隆,用RT-PCR及Western blot检测细胞中STC1基因表达水平;MTT法检测转染STC1基因对细胞增殖的影响;流式细胞仪检测转染STC1基因后细胞周期的变化。结果稳定转染后,与空载体组相比,实验组STC1基因的表达水平显著提高(P﹤0.01),CaSki细胞存活率下降(P﹤0.05),G1期细胞比例显著上升(P﹤0.05),细胞出现G1期阻滞。结论 STC1基因与CaSki细胞增殖相关,其高表达引起的宫颈癌细胞增殖速度降低可能与其所致的细胞G1期延长有关。; 李亚林郭锋杰王甲甲宋婕刘艳红李峰李跃辉; 关键词：CASKI细胞细胞增殖细胞周期

肝癌相关肿瘤标志物研究新进展被引量：12: 2011年; 肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)是常见的恶性肿瘤之一,其发病隐匿,恶性程度高,病死率高,因此早期诊断对于提高患者的生存率至关重要。目前临床上主要运用甲胎蛋白(alpha-fetoprotein,AFP)结合影像学及病理学检查进行肝癌的早期诊断;但是AFP对于肝癌筛查的特异性及敏感性均不十分理想。随着分子生物学的不断发展,多种新的标志物被相继发现,这些标志物涉及肝癌的蛋白质抗原、酶和同工酶、细胞因子、相关基因等几个方面,故成为肝癌研究的热点,并有望改变肝癌早期诊断和疗效监测的现状。; 宋婕李官成; 关键词：肝细胞癌肿瘤标志物

肝癌相关基因HTA的重组表达及蛋白功能研究: 2011年; 目的:将肝癌相关基因HTA基因(hepatoma associated gene)进行重组表达,并对HTA蛋白功能进行初步研究。方法:从肝癌细胞系HepG2细胞中扩增得到HTA338-616cDNA,再将其克隆到原核表达载体pET21a(+)-MBP内,诱导表达MBP-HTA融合蛋白及MBP蛋白,His-tag磁珠纯化试剂盒纯化2种蛋白,并用Western印迹及ELISA方法进行活性鉴定。分别用MBP,MBP-HTA蛋白刺激并培养HepG2细胞,采用MTT法、平板克隆形成实验观察细胞增殖情况,流式细胞术检测刺激前后细胞周期分布的改变。结果:成功地构建了表达分子质量约为52 kD的MBP-HTA融合蛋白的原核表达质粒pET21a(+)-MBP-HTA。与MBP刺激后的HepG2细胞及阴性对照组相比,MBP-HTA刺激后的HepG2细胞增殖明显;流式细胞术显示MBP-HTA刺激后的HepG2细胞G1期细胞减少,S期细胞增多,细胞增殖活性增强。结论:HTA蛋白可以明显地促进HepG2细胞增殖,这可能与其促进细胞从G1期过渡到S期有关。; 宋婕刘艳红李亚林李官成; 关键词：肝细胞癌肝癌相关基因原核表达细胞增殖

STCl过表达对宫颈癌CaSki细胞生物学行为的影响: 2011年; 【目的】研究转染STCl基因对人宫颈癌CaSki细胞生物学行为的影响。【方法】通过MTT、集落形成、划痕实验、Tranwell实验、裸鼠成瘤等方法检测STCl基因转染对宫颈癌CaSki细胞增殖、迁移、侵袭、体内成瘤能力的影响。【结果1MTT和集落形成实验表明，与空载体组相比，CaSki／STCl细胞生长受到抑制，细胞存活率和集落形成率较低（P〈0．05）。划痕实验显示CaSki／STCl较CaSki／NC组细胞迁移率降低（35±3．2％ VS 64±4．5％，P〈0．05）。TranweⅡ实验显示CaSki／NC的85±5，而CaSki／STCl组穿膜细胞数较少为54±4（P〈0．05）。裸鼠成瘤实验显示，CaSki／STCl组和CaSki／NC组的肿瘤平均质量依次为（O．285士0．057）g、（0．523±0．154）g，差异具有统计学意义（P,0．01）。【结论】sTCl过表达抑制宫颈癌细胞增殖、转移及侵袭，STCl基因可用于宫颈癌的基因治疗。; 李亚林郭锋杰王甲甲宋婕刘艳红李官成

人源抗肝癌全抗体基因库哺乳动物细胞表面展示载体的构建: 背景:完整的抗体通常是多价的,与靶分子有高特异性和高亲和力。它们同时结合到两个相邻的抗原表位或分子,从而增强了亲和功能,并使抗体存留在体内(如细胞表面)的时间延长。肿瘤研究和治疗的一个重要条件是建立可靠和多样的抗体制备平...; 李峰王甲甲刘艳红李亚林宋婕李跃辉李官成; 关键词：共转染肝癌; 文献传递

肝癌相关基因HTA的重组表达及多克隆抗体的制备被引量：3: 2011年; 目的将肝癌相关基因HTA进行克隆、表达并制备多克隆抗体,为进一步研究其作为肝癌导向治疗靶点的可行性及临床意义奠定基础。方法应用RT-PCR技术,从人肝癌细胞系HepG2细胞中扩增得到HTA_(338-616)cDNA,再将其克隆到原核表达载体pET21a(+)-MBP内,用IPTG诱导其在大肠杆菌BL21(DE3)中表达。His-tag磁珠纯化试剂盒纯化重组蛋白MBP-HTA,通过Western blot和ELISA方法检测重组蛋白的抗原性。将纯化的重组蛋白免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体,并采用ELISA、Western blot和免疫组化的方法检测抗体的灵敏度和特异性。结果成功地构建了表达MBP-HTA融合蛋白的原核表达质粒pET21a(+)-MBP-HTA。重组MBP-HTA融合蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)内得以高效表达,且以包涵体的形式存在。His-tag磁珠纯化试剂盒纯化和Western blot分析,得到了分子量约为52kDa的目的蛋白。获得了高效价的特异性多克隆抗体,经ELISA检测抗体的效价为1:3200,用Western blot检测的效价为1:400。免疫组织化学检测表明:肝癌组织中HTA蛋白的阳性表达率明显高于正常肝组织(P<0.01)。结论成功地制备出抗MBP-HTA多克隆抗体,该抗体有较高的效价和特异性;能用于免疫组织化学的检测,且HTA在肝癌组织中的阳性表达率明显高于正常肝组织HTA蛋白有望成为肝癌导向治疗的潜在靶点。; 宋婕刘艳红李亚林汪砥; 关键词：肝细胞癌原核表达 HTA 多克隆抗体

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