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宋庆贺: 作品数：12 被引量：14H指数：3; 供职机构：第四军医大学更多>>; 发文基金：国家自然科学基金中国博士后科学基金陕西省自然科学基金更多>>; 相关领域：生物学医药卫生更多>>

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基因重组人骨形成蛋白4成熟肽在大肠杆菌中的大规模发酵表达及纯化被引量：3: 2005年; 含有编码人骨形成蛋白4成熟肽(Bone morphogenetic protein 4 mature peptide,hBMP-4m)cDNA表达质粒的菌株,经50代传代,质粒不丢失,仍然稳定高表达hBMP-4m。将此菌株导入15 L NBS发酵罐中进行恒溶氧高密度发酵、诱导表达,测定发酵菌液OD600值为43.5,离心收集菌体,PAGE电泳结果hBMP-4m占细菌总蛋白量的39％。悬浮所收集的菌体、裂菌,洗涤后的包涵体中hBMP-4m占蛋白量的85％。将少量包涵体用8 mol尿素缓冲液溶解分别上SP阳离子和Q阴离子交换柱,用连续盐浓度的洗脱液洗脱蛋白,收集各蛋白峰做蛋白电泳分析,找到洗脱液的最合适盐浓度。然后将全部包涵体用8 mol尿素缓冲液溶解,上阳离子交换柱SP柱,以最佳盐浓度洗脱液洗脱,获得纯度为91％的hBMP-4m。再上阴离子交换柱Q柱,最佳盐浓度洗脱液洗脱后,所得hBMP-4m纯度为98％。; 秦云陈苏民关路媛陈南春赵玮钦宋庆贺; 关键词：蛋白质表达蛋白质纯化

人Lrp蛋白多克隆抗体的制备被引量：2: 2007年; 目的:制备人Lrp蛋白多克隆抗体.方法:克隆全长lrp-cDNA编码序列并进行原核表达与鉴定.用镍离子螯合柱(Ni-NTA)纯化原核表达的全长Lrp蛋白,获得纯度较高的目的蛋白.用纯化后蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体并吸附去除非特异性反应成分.结果:Western印迹结果表明,纯化前后的抗血清在69ku处均检测到目的蛋白条带,说明吸附纯化后的抗体可以与Lrp蛋白特异结合.而纯化后抗体Western印迹结果目的条带只有一条,说明吸附纯化后得到高特异性抗血清,其免疫印迹的效价在10-6以上,有较高免疫印迹滴度.结论:成功制备了高效价高特异性的兔抗人Lrp蛋白的多克隆抗体,为Lrp功能的进一步研究提供了重要的实验工具.; 于欣平宋庆贺侯立朝杜可军熊利泽陈苏民陈南春代忠明; 关键词：脂多糖类抗体制备

人lrp-cDNA全长编码区的克隆及其功能的初步研究: 脂多糖/(lipopolysaccharide，LPS/)是革兰氏阴性细菌感染的主要致病因子，与某些炎症的发生密切相关。一般认为，脂多糖/(LPS/)经过脂多糖结合蛋白/(LBP/)、脂多糖受体CD14及Toll样受体将...; 宋庆贺; 关键词：脂多糖原核表达抗体制备细胞定位; 文献传递

小鼠脂多糖应答蛋白LRP的大肠杆菌表达及其兔抗血清抗体的制备被引量：1: 2006年; 目的原核表达小鼠脂多糖应答蛋白并制备兔抗mLRP抗血清。方法参考GenBank中已登录的人lrp-cDNA序列,对小鼠的同源表达序列标签(EST)序列进行拼接,预测mlrpcDNA序列。用设计的引物,进行RT-PCR,从脂多糖刺激的NIH3T3细胞中扩增mlrp的cDNA序列,克隆入pTAT载体中,构建mlrp的原核表达载体。以其转化在大肠杆菌中诱导表达后,将获得的His-TAT-mLRP融合蛋白免疫家兔,用丙酮沉淀全菌蛋白吸附法制备纯化的抗mLRP血清,用West-ernblot鉴定抗体的特异性。结果预测的mlrpcDNA的长度为1905bp。将克隆获得的1554bp大小的mlrp-cDNA编码区序列插入pTAT质粒中,在大肠杆菌中表达出His-TAT-mL-RP融合蛋白。以其免疫家兔,制备了特异性兔抗mLRP的血清。结论mlrp的原核表达及特异性兔抗mLRP血清的制备,为进一步研究mLRP的功能奠定了基础。; 代忠明陈苏民杜可军陈南春宋庆贺骆文静陈景元; 关键词：原核表达多克隆抗体

原核生物pPLacZ报道分子系统的构建及鉴定: 2006年; 构建可以鉴定原核基因启动子和检测基因转录活性的报道分子系统pPLacZ。用PCR方法从野生型大肠杆菌基因组DNA中扩增lacZ基因的全基因序列(3258bp)和结构基因序列(3089bp)克隆入经改建的含有pUC19的多克隆位点的pBR322载体中,经酶切和测序鉴定正确的两个质粒分别命名为pPLacZ-Control和pPLacZ-Basic。用PCR从野生型大肠杆菌基因组DNA中扩增热休克基因htpX的启动子序列并克隆入pPLacZ-Basic中,经酶切测序鉴定正确的报道载体pPLacZ-htpX转入细菌中,检测高温应激时β-半乳糖苷酶活性水平。成功构建了原核生物报道分子系统pPLacZ以及检测基因htpX的报道质粒pPLacZ-htpX。应用此系统通过检测LacZ的比活性成功测定了大肠杆菌htpX基因高温应激时其转录活性的动态变化。原核生物质粒报道分子系统pPLacZ操作简便,可替代国际通用的原核噬菌体报道分子系统对原核基因的启动子进行鉴定和转录活性检测。; 黄勇张晓楠王丽宋庆贺王涛陈南春陈苏民; 关键词：LACZ

TNF-α对人lrg基因表达的调控被引量：2: 2009年; 目的:观察TNF-α对脂多糖应答基因(lrg)在人HEK293和U937细胞中表达的影响.方法:正常培养人胚肾细胞(HEK293)和人单核细胞(U937),用TNF-α(终浓度1×106U/L)刺激2h.提取刺激前后HEK293和U937细胞的总蛋白,用纯化后的兔抗人Lrg抗血清作一抗(1∶1000),对TNF-α刺激前后的HEK293和U937细胞进行Western Blot分析.提取刺激前后HEK293和U937细胞的总RNA,用RT-PCR分析TNF-α对lrg在细胞中表达的影响.以β-actin为内参.结果:Western Blot分析显示,用TNF-α刺激2h后,lrg在人HEK293和U937细胞内的蛋白含量明显上升;RT-PCR结果显示,用TNF-α刺激2h后,人HEK293和U937细胞内的lrg mRNA水平明显上升.结论:TNF-α的刺激增强了人HEK293和U937细胞内lrg的表达,提示lrg可能参与了TNF-α诱导的炎症反应.; 秦明哲李树志侯立朝杜可军宋庆贺张斌陈南春陈苏民谢克亮; 关键词：脓毒症

DOC2抑制对宫颈癌SiHa细胞系的生长: 2006年; 目的:探讨卵巢癌缺失2(DOC2)基因对宫颈癌Si-Ha细胞系生长的抑制作用.方法:采用基因转染技术,将含有全长DOC2cDNA的真核重组表达质粒和空载体质粒(pcD-NA3.1)转染到人宫颈癌SiHa细胞系(无DOC2基因的表达)中,了解其对细胞增殖能力及细胞周期的影响.结果:转染DOC2基因的宫颈癌细胞生长受到抑制(P<0.05),其在软琼脂克隆形成能力明显降低(P<0.05).DOC2有使G1期细胞比例增高、S期细胞比例下降的趋势,但SiHa细胞和SiHa-pcD-NA3.1细胞之间无显著差异.结论:DOC2基因能抑制宫颈癌细胞系的增殖.; 李萍辛晓燕刘淑娟宋庆贺毛敬; 关键词：宫颈肿瘤基因疗法

人lrp-cDNA全长编码区的克隆及其在大肠杆菌中的表达被引量：4: 2006年; 目的:扩增人lrp-cDNA全长编码区、并在大肠杆菌中表达和鉴定.方法:提取脂多糖刺激后HEK293细胞的总RNA,通过RT-PCR的方法扩增出全长人lrp序列,将其克隆入原核表达载体pcTAT后转化大肠杆菌诱导表达,做SDS-PAGE分析;并用免疫印迹法鉴定6His-TAT-LRG融合蛋白表达.结果:测序结果表明,获得了全长人lrp-cDNA全长编码区,其序列与GenBank已经公布的不完全一致;SDS-PAGE分析表明,6His-TAT-Lrp融合蛋白在大肠杆菌中成功表达,表达量约占菌体总蛋白的17%;免疫印迹法鉴定显示,该融合蛋白可与相应抗血清产生阳性反应.结论:得到人lrp-cDNA全长编码区序列,并成功表达,为人lrp功能的深入研究奠定了基础.; 宋庆贺柴玉波陈苏民陈南春黄勇代忠明; 关键词：脂多糖应答基因逆转录聚合酶链反应

Hlrg基因定点突变体的构建及其对HepG2细胞的影响: 2006年; 构建Hlrg基因的定点突变体,研究突变Hlrg基因表达的蛋白对HepG2细胞的影响。首先利用数据库对Hlrg基因的结构特点进行分析,在此基础上用PCR法构建Hlrg基因的定点突变体。将突变的Hlrg基因克隆到pcDNA3.1(+)载体中,并稳定转染到HepG2细胞中。流式细胞仪和透射电镜观察突变基因表达的蛋白对HepG2细胞的影响。结果获得了针对Hlrg基因的定点突变体,亮氨酸拉链中的第二个亮氨酸被突变成丝氨酸。发现稳定表达HLrgm蛋白的HepG2细胞中出现一定比例的凋亡细胞。表明构建了Hlrg基因定点突变体,为进一步的功能研究奠定了基础。; 杜可军常文辉侯立朝宋庆贺刘承利陈苏民陈景元柴玉波; 关键词：定点突变 HEPG2细胞

人Lrp蛋白在细胞中的定位及LPS对其表达的影响被引量：5: 2006年; 为了对脂多糖应答基因(lrp)的功能进行深入的研究,用镍离子螯合柱(Ni-NTA)纯化后的全长Lrp蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体并吸附去除非特异性反应成分.Western印迹表明,吸附纯化后的抗体可以与Lrp蛋白特异结合,并有较高免疫印迹滴度,为Lrp功能研究提供了重要的工具.激光共聚焦扫描荧光显微镜检测显示Lrp主要位于细胞核膜周围.Western印迹、RT-PCR以及细胞免疫组化染色结果都表明,用LPS刺激后,lrp在人HEK293和U937细胞内的表达均有明显的上升.结果提示,Lrp可能与对Lrp介导的反应有关.; 宋庆贺于欣平陈苏民陈南春代忠明侯立朝; 关键词：脂多糖抗体制备细胞内定位

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