尤永进
- 作品数：32 被引量：168H指数：9
- 供职机构：上海市农业科学院更多>>
- 发文基金：上海市农科院青年科技发展基金上海市科学技术发展基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 猪“O”型口蹄疫基因工程苗免疫猪的免疫效力、安全性及抗体消长被引量：3
- 2000年
- 对猪“Ｏ”型口蹄疫基因工程疫苗进行免疫效力和安全性的观察，同时检测了免疫猪的抗体消长。结果表明，该基因工程疫苗对猪体是安全、有效的。免疫猪抗体乳鼠中和指数在免疫后４个月仍可达２．０，血凝价仍达２７．５。
- 徐泉兴尤永进葛艳饶忠吴永明何志华邵水龙王其泉朱宝仙周金鑫盛祖恬孙理云何永强
- 关键词：口蹄疫免疫效力安全性抗体消长
- 口蹄疫病毒非结构蛋白3abc基因的克隆与表达被引量：10
- 2003年
- 口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus , FMDV)非结构蛋白(NSP)-3ABC可用于注苗与感染动物的鉴别诊断,合成该基因的PCR引物,并在引物5 端和3 端分别加入含BamH I和Hind III限制性酶切位点序列。以FMDV毒株基因组RNA为模板,利用RT-PCR技术扩增3abc基因,得到的基因片段与T载体连接,转化DH5α。提取重组载体pT-3ABC,经BamH I/Hind III双酶切后与载体pET32a连接,转化宿主菌BL21(DE3)plysS,IPTG诱导表达目的蛋白。SDS-PAGE及Western Blotting检测和鉴定结果表明,在大肠杆菌中成功表达了NSP-3ABC蛋白,分子量约56kDa,且该表达产物可与FMDV感染的动物血清产生免疫反应。ELISA试验结果显示,表达蛋白可用于FMDV注苗与感染动物的鉴别诊断。
- 尤永进朱彩珠葛艳陈波张强饶忠徐泉兴卢永干
- 关键词：口蹄疫病毒非结构蛋白3ABC基因基因克隆口蹄疫RT-PCR
- O型口蹄疫病毒VP1T细胞、B细胞表位双拷贝基因与大肠杆菌LTB基因融合表达产物的免疫应答被引量：5
- 2007年
- [目的]为预防口蹄疫与幼畜腹泻、生产安全高效的基因工程联合疫苗提供试验依据。[方法]通过基因工程技术,把O型口蹄疫病毒VP1双拷贝21-40(20aa)与141-160(20aa)表位肽基因——2020VP1与产肠毒素大肠杆菌LTB连接到表达载体上,在大肠杆菌中表达出具有抗O型口蹄疫病毒与产肠毒素大肠杆菌双重作用的融合蛋白。[结果]运用基因工程技术构建了融合表达载体r2020-B-2020。转化宿主菌BL21(DE3)RIL后的表达产物经SDS-PAGE分析,结果显示,重组融合蛋白的分子量约为41 kD,表达量较高。动物实验表明,融合蛋白能够诱发兔体产生较强的抗FMDV中和抗体,免疫豚鼠在低浓度FMDV刺激下产生特异性T淋巴细胞增殖反应,说明融合蛋白可以诱导机体产生有效的抗FMDV细胞及体液免疫反应。融合蛋白能够与霍乱毒素CTB抗体特异结合,免疫雌鼠能够抵抗一定强度的大肠杆菌毒株攻击。[结论]融合蛋白可以同时诱导机体产生较好的抗FMDV及ETEC免疫应答反应,具有开发成为FMDV与ETEC基因工程疫苗的应用价值。
- 庄娟尤永进陈波饶忠潘洁
- 关键词：口蹄疫病毒VP1产肠毒素大肠杆菌免疫应答
- 口蹄疫注苗与感染牛(血清)鉴别诊断试剂盒中试生产研究
- 刘惠莉尤永进潘洁陈波邢继兰饶柏忠徐泉兴庄娟
- 通过PCR扩增获得了口蹄疫病毒（FMDV）3AB非结构蛋白基因，经比对分析，该序列与我国近年来流行的猪、牛源FMDV核酸及编码氨基酸序列同源性分别达99﹪及96﹪。重组蛋白可稳定表达，能作为FMDV野毒感染与疫苗免疫的鉴...
- 关键词：
- 关键词：口蹄疫酶联免疫吸附试验
- K_(88)、K_(99)、987P基因工程三价苗的免疫效力试验被引量：6
- 1995年
- 对六个批次的K_(88)、K_(99)、987P基因工程三价苗作免疫效力测定。第一次试验,对用三个批次基因工程三价苗被动免疫(通过初乳)的仔猪,以三种强毒菌进行攻击,死亡率上均获得100%保护,黄痢腹泻发病率上获得98%保护;而对照仔猪,对三种强毒菌的攻击,发病率均达100%,死亡率分别是K_(88)为96%、K_(99)为72.7%、987P为80%,平均83.3%。第二试验的另外三个批次的基因工程三价苗的被动免疫(通过初乳)仔猪,虽然三种强毒菌的攻击剂量各增加三分之一,但保护率仍达到与第一次试验一致的结果;而对照仔猪,黄痢腹泻发病率均达100%,死亡率分别为K_(88)100%、K_(99)95%、987P91%,平均95%。
- 徐泉兴周智爱尤永进赵洪兴庄乐平乌正芳饶忠王健王其泉朱宝仙吕永济奚丽棣周金鑫何军
- 关键词：K88K99基因工程被动免疫保护率
- 口蹄疫病毒VP1 T、B细胞表位与大肠杆菌肠毒素融合蛋白的免疫保护性研究被引量：1
- 2009年
- 作者对O型口蹄疫病毒(FMDV)VP1双拷贝T细胞表位(aa 21-40)、B细胞表位(aa 141-160)融合蛋白2020-2020VP1及其与肠毒素大肠杆菌肠毒素融合后蛋白2020-B-2020和2020-B-2020-STI进行了免疫分析。动物试验表明,用2020-2020VP1、2020-B-2020和2020-B-2020-STI 3种融合蛋白分别免疫动物,免疫动物血清中均可产生针对FMDV的抗体。免疫豚鼠在低浓度FMDV刺激下能够产生特异性T淋巴细胞增殖反应,说明3种融合蛋白都能诱导机体产生FMDV特异性细胞及体液免疫反应。2020-B-2020和2020-B-2020-STI融合蛋白免疫雌鼠能够抵抗大肠杆菌强毒株攻击,免疫保护率如下:2020-B-2020 60%/1.5MLD,2020-B-2020-STI 100%/1.5MLD。2020-B-2020-STI免疫血清中具有STI中和抗体,且融合蛋白不具STI毒性。ELISA结果显示,2020-B-2020和2020-B-2020-STI能与霍乱毒素(cholera toxin)CTB抗体特异性结合。结果表明,2020-B-2020-STI具有开发成为口蹄疫及肠毒素大肠杆菌疫苗的应用价值。
- 庄娟尤永进陈波饶忠潘洁
- 关键词：口蹄疫病毒VP1STI免疫应答
- 利用RNAi抑制口蹄疫病毒的复制(英文)被引量：3
- 2004年
- 根据口蹄疫病毒 IRES和 L 串联序列两侧的保守区域设计了 2个引物 ,利用 RT- PCR和 PCR方法扩增出该串联序列 ,并进行了测序。测序结果表明 ,扩增产物与 Gen Bank上相应的序列具有很高的序列同源性 (大于 99% )。在测序的基础上 ,选择了 L 基因上的 1个靶位点 (位于启始密码子下游第 2 2 9nt后 2 1 nt长的序列 ) ,合成了 si RNA表达盒SEC- L2 2 9。细胞单层长成 5 0 %～ 70 %时 ,将纯化的 SEC- L2 2 9转染到 BHK细胞中 ,转染 4 h后用高感染复数 FMDV接种 ,2 4 h后用间接免疫荧光方法对口蹄疫病毒在 BHK细胞中的复制进行检测。研究结果表明 ,SEC- L 2 2 9极大地抑制了口蹄疫病毒在 BHK细胞中的复制 ,且该抑制作用具有序列特异性 ,并降低了 BHK细胞的死亡率。另外 ,2 5 ng和5 0 ng SEC- L2 2 9处理组间对病毒复制的抑制作用差异不明显 ,可能是病毒基因组发生了突变。本试验表明 ,利用 PCR方法合成的 SEC在 BHK细胞中能特异性地抑制 FMDV的复制 。
- 任武泽潘洁孙世铎庄娟徐泉兴饶忠尤永进
- 关键词：RNAI口蹄疫病毒哺乳动物细胞
- 大肠杆菌热敏性肠毒素研究进展被引量：1
- 2005年
- 大肠杆菌肠毒素是引起腹泻的主要致病因子,可以分为热敏性肠毒素和耐热性肠毒素两类。本文就热敏性肠毒素的理化性质、分子结构和生物学功能、免疫原性、免疫佐剂作用以及国内外对其免疫原性与佐剂效应的应用研究进行了综述。
- 庄娟曹祥荣潘洁饶忠陈波尤永进
- 关键词：分子结构生物学功能免疫原性免疫佐剂大肠杆菌腹泻
- 区分动物疫苗免疫与病毒感染的口蹄疫非结构蛋白3AB鉴别诊断试剂盒的研制被引量：7
- 2007年
- 以口蹄疫非结构蛋白3AB作为抗原的ELISA,适用于鉴别诊断感染和注苗动物。以3ABC基因片段为模板,经RT-PCR扩增得到3AB基因片段,与pET32a连接后,转化宿主菌BL21(DE3)plysS,IPTG诱导表达目的蛋白。SDS-PAGE和Westernblot结果表明,表达的重组3AB蛋白,分子量约为50Ku,ELISA结果显示,重组3AB蛋白可用于猪、牛口蹄疫病毒感染与疫苗免疫抗体的鉴别诊断。
- 陈波尤永进潘洁朱彩珠饶钟陈倍娟吴永明顾晓峰游丕荣徐泉兴卢永干
- 关键词：口蹄疫病毒非结构蛋白酶联免疫吸附试验
- 猪、牛口蹄疫病毒非结构蛋白酶联免疫吸附试验检测试剂盒
- 本发明涉及口蹄疫病毒非结构蛋白3AB在大肠杆菌表达系统中的克隆和表达，及其表达产物在口蹄疫注苗与感染动物的鉴别诊断方面的应用。利用本发明的检测试剂盒，可高效、特异性地对口蹄疫易感动物猪、牛等作感染与免疫抗体的鉴别诊断。本...
- 尤永进潘洁陈波徐泉兴饶忠
- 文献传递
