崔蕾蕾
- 作品数：6 被引量：12H指数：2
- 供职机构：江苏大学基础医学与医学技术学院更多>>
- 发文基金：江苏省科技厅基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 幽门螺杆菌cag PAI编码的Ⅳ型分泌系统被引量：8
- 2007年
- 幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)是定植于人胃部特定的病原菌,感染呈全球分布,感染率高达50%以上。现已证实它是轻度胃炎,消化性溃疡及胃癌的主要病因。Ⅰ型H.pylori菌株含有一个约40kb的特殊基因片段,即cag致病岛(cytotoxin associated gene pathogenicity island,cag PAI),该片段只出现于致病相关菌株,基因呈高密度分布并编码一个分泌转运系统称为Ⅳ型分泌系统(type Ⅳ secretion system,TFSS),通过转运相关毒素而参与H.pylori诱导上皮细胞细胞内的酪氨酸磷酸化、细胞骨架重排、基垫结构形成、活化核转录因子NF-κB、诱导促炎细胞因子白细胞介素-8的表达等,故在H.pylori的致病中起着关键作用。近年来,研究者们致力于研究Ⅳ型分泌系统的功能,但是对于这个装置是如何转运蛋白进入宿主细胞的确切机制还是知之甚少,因此,对Ⅳ型分泌系统的研究将有助于进一步明确H.pylori致病机制,并为临床诊断和治疗提供新的靶点。
- 崔蕾蕾邵世和
- 关键词：幽门螺杆菌CAGPAI
- 幽门螺杆菌Ⅳ型分泌系统HP0527-C基因的克隆表达及其生物学功能的初步研究被引量：1
- 2008年
- 为克隆表达幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)NCTC 11637 hp0527-c基因,探讨其生物学功能。设计引物扩增,T-A克隆,测序正确后构建表达载体pET-28a-hp0527-c,转化大肠杆菌BL21,经IPTG诱导表达后以Ni2+-NTA柱获得纯度为98%重组蛋白。经Western blot鉴定正确后,免疫新西兰大白兔获得了较高滴度的多克隆抗体;将重组蛋白作用于BGC-823细胞,RT-PCR检测细胞IL-8mRNA表达增高;同时用MTT法来检测重组蛋白对细胞增殖的影响,结果表明其活性呈现一定量的时间和剂量依赖性。已成功克隆了HP0527-C的重组蛋白,初步探讨了其与细胞之间的相互作用,为进一步阐明H.pylori致病机制奠定了基础。
- 母润红邵世和马方王华崔蕾蕾钟桥鞠小丽董苏荣
- 关键词：幽门螺杆菌克隆表达细胞因子细胞增殖
- 幽门螺杆菌Cag-PAI hp0525基因的克隆表达及其重组蛋白HP0525对SGC-7901细胞增殖的影响
- 2009年
- 目的：由于文献报道幽门螺杆菌（Helicobacter priori）是产生胃溃疡和胃癌的致病菌之一，一个重要的影响因素是由cag致病岛编码的四型分泌系统。Hp0525是Cag致病岛中重要成分，是一种内膜蛋白ATPase。而幽门螺杆菌中Cag蛋白的表达以及Cag PAI编码的各自蛋白功能研究得还很少，为进一步研究幽门螺杆菌的致病机制和研发幽门螺杆菌诊断试剂盒及疫苗，特克隆幽门螺杆菌NCTC 11637hp0525（caga）基因，并对其进行测序，构建原核重组质粒，表达HP0525蛋白，初步研究其对SGC-7901细胞增殖的影响。方法：应用PCR技术从H.pylori基因组DNA中扩增hp0525编码基因片段，克隆至pMD18-T载体后，再将其定向插入pET-30a载体中，双酶切鉴定筛选阳性克隆，以DNA自动分析仪进行序列测定。测序分析正确后，经IPTG诱导表达，表达蛋白以Ni^2＋-NTA柱进行纯化，并经Western blot和MALDI-TOF鉴定，透析除盐后的蛋白，通过免疫新西兰大白兔和抗体效价的测定，纯化的蛋白作用于SGC-7901细胞，用MTT法检测蛋白对细胞增殖的影响。结果：成功克隆hp0525基因，全长993bp，编码330个氨基酸，与GenBank公布的其他H.pylori菌株基因序列的核苷酸同源性为97％-99％。工程菌诱导后SDS-PAGE显示新生表达蛋白带，相对分子质量为36000，与预期一致，经Ni^2＋-NTA柱纯化后可获得纯度为98％重组蛋白。蛋白作用于SGC-7901细胞后，结果呈现一定量的时间和剂量依赖性。它是一种ATPase，通过测定具有一定的活性。活性为4．40IU／ml结论：成功克隆hp0525基因，并在大肠杆菌BL21中表达，经过镍柱纯化后得到纯度较高的蛋白，MTT法来检测出重组蛋白抑制细胞增殖；同时具有一定的酶活力，为进一步研究其生物学功能奠定了基础。
- 母润红邵世和钟桥崔蕾蕾张成义
- 关键词：幽门螺杆菌克隆增殖
- 幽门螺杆菌外膜36kDa蛋白重组表达、纯化及初步鉴定
- 2008年
- [目的]构建幽门螺杆菌(H.pylori)NCTC11637菌株36kDa(OMP36)外膜蛋白基因原核表达系统,探索研制H.pylori疫苗的新途径。[方法]培养和收集H.pylori NCTC11637菌株,提取基因组DNA,PCR扩增目的基因片断。将其克隆到T载体并测序,再将目的基因克隆入PET32a(+),构建重组表达载体PET32a-OMP36。转化E.coliBL21后IPTG诱导表达,经SDS-PAGE鉴定、镍亲和层析纯化、Western blot检测表达蛋白。[结果]测序分析表明,插入的基因片断为987bp,表达的蛋白的相对分子质量(M r)约为36kDa,并显示具有良好的抗原性。SDS-PAGE检测表明,表达量占细菌总蛋白的37%,镍亲和层析纯化率约92%。Western blot检测表达蛋白具有良好的抗原活性。[结论]成功克隆了外膜蛋白OMP 36kDa的编码基因,其表达产物OMP36有望成为新的Hp疫苗候选分子,为H.py-lori疫苗的研制和试剂盒的开发奠定了良好的基础。
- 鞠小丽邵世和郝渭滨董苏荣崔蕾蕾
- 关键词：幽门螺杆菌外膜蛋白基因表达蛋白纯化
- 幽门螺杆菌Ⅳ型分泌系统cagT基因的克隆表达及其重组蛋白对SGC-7901细胞增殖和分泌细胞因子功能的影响被引量：3
- 2008年
- 【目的】初步研究幽门螺杆菌（Helicobacter pylori，H．pylori）NCTC 11637 cagT（HP0532）基因对SGC-7901细胞增殖和白细胞介素-8（IL-8）分泌的影响。【方法】应用PCR技术从H．pylori基因组DNA中扩增cagT编码基因片段，将其定向插入pQE30载体中，双酶切鉴定筛选阳性克隆。测序分析确认后，IPTG诱导表达，表达蛋白以Ni^2＋-NTA柱进行纯化，并经Western blot鉴定，纯化的蛋白作用于SGC-7901细胞，提取细胞总RNA，RT-PCR扩增IL-8，并用MTT法检测蛋白对细胞增殖的影响。【结果】成功克隆了cagT基因，全长843bp（GenBank登录号为EF114758），编码280个氨基酸，与GenBank公布的其他H．pylori菌株基因序列的核苷酸同源性为97％-99％。工程菌诱导后SDS-PAGE显示新生表达蛋白带，相对分子质量约为32kDa，经Ni^2＋-NTA柱纯化后可获得纯度为98％重组蛋白。经透析复性后的蛋白（终浓度10μg／mL）作用于SGC-7901细胞后，可诱导细胞因子IL-8在mRNA水平上的表达。不同浓度CagT蛋白与SGC-7901细胞作用，细胞增殖的程度随着蛋白浓度的增加逐渐降低，细胞的增殖受到抑制。【结论】CagT蛋白可刺激SGC-7901细胞IL-8的表达，并抑制细胞增殖，为进一步研究其生物学功能奠定了基础。
- 崔蕾蕾邵世和李良菊王华母润红鞠小丽董苏荣钟桥
- 关键词：幽门螺杆菌白细胞介素-8
- 幽门螺杆菌NCTC11637 cagT基因的克隆及序列分析
- 2007年
- 目的:克隆幽门螺杆菌(H pylori)NCTC 11637 cag T(HP0532)的编码基因,并分析其核苷酸序列.方法:应用PCR技术从H pylori基因组DNA中扩增cag T编码基因片段,克隆至pGEM-T载体后,再将其定向插入pQE30载体中,双酶切鉴定筛选阳性克隆,并进行序列分析.结果:NCTC 11637 cag T基因全长843 bp(GenBank登录号为EF114758),编码280个氨基酸,与GenBank公布的其他H pylori菌株基因序列的核苷酸同源性为97%-99%.结论:成功克隆了cag T基因,为进一步研究其生物学功能奠定了基础.
- 崔蕾蕾邵世和
- 关键词：幽门螺杆菌克隆测序
