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重组脂肪氧合酶基因工程菌破碎条件优化及其酶活力测定方法研究被引量：7: 2012年; 建立适用于从重组E.coli中提取重组脂肪氧合酶非机械法的破碎条件。采用化学渗透法、冻融法和酶解法破碎重组E.coli细胞,并采用单因素试验和L25(56)正交试验对细胞破碎条件进行优化。结果表明:溶菌酶添加量为1.5mg/mL、溶菌酶处理时间40min、乙二胺四乙酸二钠(EDTA-2Na)添加量为2.0mmol/L、吐温-60添加量为2%、冻融温度(-70℃冷冻37℃融解)、冻融次数3次,效果最佳,获得粗酶液的脂肪氧合酶(LOX)酶活力为6840U/mL,比优化前(4750U/mL)提高了0.44倍;并在此条件下,比较分光光度法、碘化钾-淀粉法和二甲苯酚橙法测定LOX酶活力,其中碘化钾-淀粉法简单、灵敏、快速,且测定体系具备肉眼可辨的特征颜色,可用于LOX酶活性高通量筛选。; 郭芳芳应琦张充陆兆新别小妹赵海珍吕凤霞; 关键词：脂肪氧合酶酶解法

硒结合蛋白1生物功能及抗肿瘤作用机理的研究: 硒做为一种人体必须的微量元素对于人体各种机能的提高和多种疾病的预防和治疗都具有潜在的重要价值，长期较低的硒摄入量对人体健康具有多种不利的影响。由于我国约有70％的土地处在全球的缺硒带上，其上产出的各种动、植物和微生物产品...; 应琦; 关键词：生物功能抗肿瘤作用富硒食品

一种高效分泌表达重组脂肪氧合酶的枯草杆菌表达载体及其应用: 本发明属于食品工业生物技术领域，涉及一种高效分泌表达重组脂肪氧合酶的枯草杆菌表达载体及其应用。本发明以枯草杆菌载体pHB201骨架，先通过酶切方法改造pHB201酶切位点，获得pHB-hc载体，在此计基础上通过PCR的方...; 陆兆新张充吕凤霞别小妹王昱沣赵海珍应琦; 文献传递

重组鱼腥藻脂肪氧合酶基因的克隆表达、分离纯化及活性分析被引量：10: 2012年; 克隆鱼腥藻PCC7120基因组中脂肪氧合酶(ana-LOX)基因,对该功能基因进行了定点突变研究,确定了ana-LOX的最短功能基因长度,构建原核重组表达载体,对重组ana-LOX进行了分离纯化和性质研究。从GenBank中搜索到鱼腥藻PCC7120基因组中含有LOX基因,通过序列分析和比对,发现LOX功能基因位于双功能酶AOS(单加氧酶)-LOX的C端,通过定点突变研究,证实了ana-LOX活性中心位点为His197、His202、His369、Asn373和Ile455。通过逐步缩短基因长度的策略,获得ana-LOX基因的最短功能基因长度为1 254 bp。构建的表达载体pET-32a/ana-LOX转化入BL21(DE3)宿主内,在低温16℃条件下的诱导表达,重组脂肪氧合酶活力可达6 750 U/mL。表达产物通过Ni-NTA亲和柱进行分离纯化,比活达到11.4×104U/mg蛋白,酶活回收率为60.89%。重组ana-LOX最适反应温度45℃,最适反应pH 6.0,在常温下具有较好的稳定性,金属离子Fe2+、Mg2+、Ca2+对该酶存在明显的激活作用,而Fe3+和Cu2+对该酶有强烈的抑制作用。重组ana-LOX能够改善面团的显微结构。该研究获得了高效表达重组ana-LOX,为实现其在食品加工中的应用提供了参考。; 张充周孝伟吕凤霞别小妹陶婷婷应琦陆兆新; 关键词：克隆表达定点突变分离纯化活性分析

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应琦