张宇雯
- 作品数：15 被引量：54H指数：4
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- 一种快速检测血清中miRNA浓度的荧光试剂盒
- 本发明公开了一种快速检测血清中miRNA浓度的荧光试剂盒，其组成包括DNA合成的模板链、脱氧核苷三磷酸复合物、酶复合物、底物复合物、引物、缓冲液、双蒸水，其特征在于，所述引物为待测的miRNA，合成的模板链5′端的8个碱...
- 杨宝峰刘兴汉吕延杰张宇雯初文峰
- 文献传递
- 唯BH3域蛋白与细胞凋亡被引量：4
- 2007年
- 唯BH3域蛋白是Bcl-2蛋白家族中的一类仅含有BH3同源区域的促凋亡分子。不同的凋亡刺激可以通过不同的途径活化不同的唯BH3域蛋白,且表现细胞类型特异性。唯BH3域蛋白通过与同一家族的其它抗凋亡或促凋亡蛋白相互作用,在启动线粒体通路中起重要作用。有些唯BH3域蛋白在内质网通路和死亡受体通路中也起到一定作用。对该类蛋白的研究将有助于深化对凋亡的认识,并为疾病治疗提供新的方法和思路。
- 张宇雯刘兴汉
- 关键词：线粒体凋亡
- Puma基因转染对胃癌SGC-7901细胞的促凋亡作用及机制被引量：7
- 2008年
- [目的]探讨puma基因转染对人胃癌SGC-7901细胞株增殖和凋亡的影响及其作用机制。[方法]应用脂质体介导重组真核表达载体pEGFP-C1-PUMA瞬时转染至SGC-7901细胞。分别用荧光显微镜和RT-PCR法检测外源基因的表达,MTT比色法测定细胞增殖的抑制,Hoechst33342染色法检测细胞凋亡,流式细胞仪检测细胞周期和线粒体膜电位的变化,Westernblot检测细胞色素C(CytC)和凋亡诱导因子(AIF)的转位。[结果]外源性puma基因在pEGFP-C1-PUMA转染的SGC-7901细胞中实现了表达。PUMA表达使SGC-7901细胞的增殖能力降低并诱导凋亡,转染24、48、72h的生长抑制率分别为19.3%、34.7%、42.2%,凋亡率分别为19.6%、35.4%、46.6%。PUMA表达的SGC-7901细胞DNA合成受到抑制,周期阻滞在G0/G1期;线粒体膜电位明显下降,CytC、AIF从线粒体进入胞浆。[结论]puma基因转染可有效抑制胃癌SGC-7901细胞的增殖,促进其凋亡。促凋亡机制主要是线粒体途径,与线粒体膜电位降低和CytC、AIF从线粒体释放有关。
- 张宇雯刘兴汉马洪星曲天舒李冀红栗亚
- 关键词：PUMA基因凋亡线粒体
- 人肿瘤抑素相关T21RGD肽的表达与纯化被引量：2
- 2007年
- 目的构建引入RGD序列人肿瘤抑素相关21肽（T21RGD）-内含肽-几丁质结合蛋白融合表达载体，实现目的肽的几丁质珠亲和层析一步纯化。方法人工设计合成T21RGD肽基因，经重组定向克隆插入到原核表达载体pTYB2，酶切和测序鉴定正确后转化人大肠杆菌BL21（DE3），IPTG诱导其融合表达，对表达蛋白进行几丁质珠亲和层析，DTF诱导柱上裂解以获得T21RGD肽。经Trcine—SDS—PAGE和反相高效液相色谱（RP—HPLC）对纯化产物进行鉴定。结果质粒酶切和测序结果显示，含T21RGD肽基因按正确方向和序列插入质粒，融合蛋白表达量达菌体蛋白总量的50％以上，Trcine—SDS—PAGE显示了T21RGD肽目的条带与预期相符，反相高效液相色谱测定峰纯度达97％。结论成功构建T21RGD肽融合表达载体，实现了融合蛋白在大肠杆菌中高效表达和T21RGD肽几丁质珠亲和层析一步纯化，为进一步研究T21RGD肽抗肿瘤活性和作用机制奠定基础。
- 马洪星粟亚张宇雯李冀宏刘岩刘远莉李丹刘兴汉
- 关键词：肿瘤抑素RGD序列基因重组纯化
- 肿瘤抑素相关肽T42对人脐静脉内皮细胞和人胃腺癌细胞的抑制作用被引量：4
- 2007年
- 目的:观察大肠杆菌内表达的pTYB2-T42重组质粒经纯化后获得的肿瘤抑素相关肽T42,在体外对人脐静脉内皮细胞及肿瘤细胞的抑制作用。方法:实验于2006-06/11在哈尔滨医科大学生物化学与分子生物学教研室完成。在大肠杆菌中表达肿瘤抑素相关T42肽并用几丁质亲和层析纯化。采用四甲基偶氮唑盐比色法研究10～200mg/L肿瘤抑素相关肽T42、T19、T21、T19+T21半量联合和顺铂对人脐静脉内皮细胞和人SGC-7901胃腺癌细胞生长的影响,采用苏木精-伊红染色检测40mg/LT42肽作用24h后对细胞形态的影响,划痕修复实验研究40mg/LT42肽和40mg/L的T19肽+T21肽半量联合分别作用24,48h后对细胞迁移的影响。结果:①四甲基偶氮唑盐试验表明10～200mg/LT42肽对人脐静脉内皮细胞和人SGC-7901胃腺癌细胞有明显抑制作用且呈剂量依赖性,IC50分别为45mg/L和51mg/L。②40mg/LT42肽作用24h后可见人脐静脉内皮细胞和人SGC-7901胃癌细胞单个凋亡细胞与周围细胞分离,细胞皱缩呈圆形或卵圆,深染,染色质边集。③40mg/L的T42肽单独作用24h或者48h均可明显抑制人脐静脉内皮细胞、人SGC-7901胃癌细胞的迁移(P<0.05),与40mg/L的T19肽+T21肽半量联合组比较对两种细胞的迁移能力没有显著影响(P>0.05)。结论:T42肽能抑制人脐静脉内皮细胞和人SGC-7901胃腺癌细胞的生长及迁移,其抗肿瘤细胞作用强于T21肽,抑制内皮细胞增殖作用强于T19肽,抑制细胞增殖活性与T19肽+T21肽半量联合用药基本相同。
- 栗亚刘兴汉林雪松马洪星张宇雯李冀宏刘远莉李丹
- 关键词：肿瘤
- 人内皮抑素抗肿瘤相关肽基因的克隆表达及活性研究被引量：13
- 2007年
- 目的 克隆并表达人内皮抑素抗肿瘤相关肽，检测其生物活性。方法 人工合成人内皮抑素1—30位氨基酸（30肽，序列25—31由RGIRGAD改为RGDRGD）所对应的核苷酸序列，连接到质粒pTYB2中，再转化至大肠埃希菌BL21（DE3）中表达，几丁质亲和层析树脂一步纯化30肽。通过MTT法、鸡胚绒毛尿囊膜（CAM）实验、小鼠体内抑瘤实验比较30肽和内皮抑素抗肿瘤活性。结果 MTT证实30肽体外对人脐静脉内皮细胞（HUVEC）、胃癌7901细胞（SGC-7901）半数抑制浓度IC50为36μg／ml、47μg／nl，显著低于内皮抑素IC50179μg／ml、202μg／ml。CAM实验中30肽对血管的抑制作用更强。30肽在小鼠体内抑瘤率47．8％，效果优于内皮抑素28．7％。结论 30肽具有更强抗肿瘤活性，有可能成为治疗肿瘤的一种新药物。
- 李丹刘兴汉赵炜明李冀宏马洪星张宇雯栗亚
- 关键词：内皮抑素RGD序列抗肿瘤活性
- 穿膜肽-凋亡蛋白融合蛋白导入人脐静脉内皮细胞和人肺腺癌Anip973细胞的生物学特性被引量：4
- 2006年
- 目的:在大肠杆菌内表达穿膜肽与凋亡蛋白的融合蛋白,观察其诱导肺腺癌Anip973细胞凋亡的活性,并了解其是否有剂量依赖性。方法:实验于2005-08/2006-01在哈尔滨医科大学生物化学与分子生物学教研室完成。①在大肠杆菌中表达穿膜肽-凋亡蛋白并用IDA-Ni2+亲和层析纯化。②细胞增殖抑制实验:取对数生长期人脐静脉内皮细胞和Anip973细胞接种于96孔培养板中,培养12h后加入终浓度分别为0,10,20,30,40,50mg/L融合蛋白培养48h,弃上清,每孔中加入四甲基偶氮唑盐溶液穴5g/L雪20μL,继续孵育4h,检测吸光度,计算肿瘤生长抑制率。③取对数生长期人脐静脉内皮细胞、Anip973细胞,每种细胞分成两组:给药组加入终浓度为30mg/L穿膜肽-凋亡蛋白,对照组加入相同体积的磷酸盐缓冲液,继续培养48h。苏木精-伊红染色,光镜下观察细胞形态;溴乙啶/丫啶橙荧光染色观察细胞凋亡率。结果:①细胞增殖抑制实验结果表明浓度为10～50mg/L穿膜肽-凋亡蛋白对人脐静脉内皮细胞没有明显抑制作用,对Anip973细胞呈剂量依赖性抑制作用,半数抑制浓度为27mg/L。②30mg/L穿膜肽-凋亡蛋白作用48h后,人脐静脉内皮细胞形态没有显著改变,对照组和给药组的凋亡率分别为穴2.9±0.4雪%和穴3.1±0.6雪%,没有显著差异(P>0.05);Anip973细胞可见到细胞皱缩,染色质浓缩和出现凋亡小体等凋亡特征性形态变化,给药组和对照组凋亡率分别为穴36.8±1.7雪%和穴6.7±0.5雪%,差异显著(P<0.01)。结论:穿膜肽-凋亡蛋白能诱导肿瘤细胞凋亡,这种作用呈剂量依赖性,而对正常细胞没有毒性作用。
- 陶站华刘兴汉张宇雯马洪星刘远莉栗亚
- 关键词：肿瘤抗肿瘤药重组融合蛋白质类
- 重组人成骨生长肽对化疗小鼠白细胞减少的影响被引量：3
- 2007年
- 目的研究重组人成骨生长肽(rhOGP)对环磷酰胺(Cy)化疗损伤小鼠白细胞减少的影响;观察rhOGP对人肺腺癌Anip细胞和人胃癌SGC-7901细胞增殖的影响。方法用Cy腹腔注射每日100mg/kg,连续3d,造成小鼠的化疗损伤模型。拮抗实验中,分别给予低、高剂量的rhOGP,连续13d,采用皮下注射给药途径,于第0d、第4d(Cy造模后)、第9d、第14d检测外周血白细胞(WBC)数变化。预防实验中,分别给予rhOGP、DTT与生理盐水,连续10d,并于第8、9、10d同时给予Cy,分别于实验前、实验后记取外周血WBC数。利用MTT法和细胞生长曲线观察rhOGP对人肺腺癌Anip细胞和人胃癌SGC-7901细胞增殖的影响。结果rhOGP能促进Cy损伤小鼠WBC数的恢复,高、低剂量组间略有差异。rhOGP能明显降低Cy损伤小鼠外周血白细胞减少的幅度。rhOGP对人肺腺癌Anip细胞及人胃癌SGC-7901细胞的增殖无明显促进作用。结论rhOGP可促进Cy损伤小鼠外周血白细胞的恢复,rhOGP对Cy化疗小鼠白细胞数减少有预防作用,且对人肺腺癌Anip细胞和人胃癌SGC-7901细胞的增殖无促进作用,提示rhOGP作为肿瘤治疗辅助用药的潜在价值。
- 刘远莉李冀宏张宇雯马洪星栗亚刘兴汉
- 关键词：白细胞数环磷酰胺
- Puma/bbc3基因高表达对SGC-7901细胞的作用与机制及Puma-BH3肽的原核表达与活性研究
- Puma/Bbc3是近年来新发现的一个Bcl-2家族唯BH3域蛋白成员，可由各种p53依赖性和非依赖性刺激活化，对细胞凋亡起着全面调控的作用。为研究puma/bbc3基因高表达对人胃癌SGC-7901细胞株增殖及凋亡的影...
- 张宇雯
- 关键词：胃脏肿瘤病理细胞学
- 文献传递
- Puma基因对HeLa细胞凋亡的作用及机制的初步研究被引量：4
- 2008年
- 目的研究外源性puma基因表达对HeLa细胞的作用以及线粒体释放的细胞色素C(Cyt c)和凋亡诱导因子(AIF)是否参与了凋亡过程。方法脂质体转染HeLa细胞;RT-PCT鉴定表达效果;AO/EB染色检测puma基因的促凋亡活性;Western blot检测细胞凋亡发生后线粒体中Cyt c和AIF位置是否发生迁移。结果脂质体介导下成功实现了外源性puma基因在HeLa细胞中高表达,AO/EB染色显示转染puma基因后HeLa细胞出现了一系列凋亡形态学改变,这种变化转染48h比24h时更明显;Western blot结果显示,puma基因表达后HeLa细胞的线粒体膜间隙蛋白Cyt c、AIF向胞浆迁移,迁移的蛋白量在转染48h比24h更明显。结论Puma基因表达有促进HeLa细胞凋亡的作用,且Cyt c和AIF参与puma基因促进HeLa细胞凋亡的过程。
- 林慧敏张宇雯刘兴汉
- 关键词：PUMA细胞凋亡凋亡诱导因子细胞色素C
