张晓莉 作品数:13 被引量:51 H指数:5 供职机构: 华中师范大学 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 教育部留学回国人员科研启动基金 更多>> 相关领域: 生物学 医药卫生 轻工技术与工程 语言文字 更多>>
GFP用于单核细胞增生李斯特菌PrfA调控毒力基因actA转录表达的研究 被引量:1 2009年 PrfA是单核细胞增生李斯特菌(LM)中迄今为止发现的惟一个调控绝大多数毒力基因转录表达的蛋白因子。为了研究PrfA转录调控毒力基因表达的分子机制,将无启动子的绿色荧光蛋白(GFP)基因与毒力基因actA的启动子融合,连接到穿梭载体pLSV16质粒上,构建成表达融合载体pLSV16-PactA-gfp,然后将其电转化入LM野生株P14、PrfA高表达突变株P14a和prfA基因等位缺失突变株A42中表达。利用荧光显微镜和荧光酶标仪检测上述3株细菌中绿色荧光蛋白的不同表达强度,从而评价actA基因依赖于PrfA的转录活性强弱。结果显示,绿色荧光蛋白在P14a中发出的荧光强度最高,P14次之,A42最弱,两两比较均有显著差异(P<0.01),表明毒力基因actA的转录水平高低与PrfA的活性成正相关,其转录表达依赖于PrfA的调控;该试验同时也显示GFP能方便、有效地用于研究PrfA调控LM不同毒力基因的转录表达水平。 冯莹颖 张晓莉 张强 罗勤 蒋苹 钱悦 冯爱平关键词:单核细胞增生李斯特菌 转录调控 Sigma B在单核细胞增生李斯特菌耐受环境压力胁迫中的作用 被引量:5 2009年 Sigma B(σB)因子在单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes)的压力应答和毒力调控中起着重要的作用。研究发现单核细胞增生李斯特菌的致病力与耐受环境条件的胁迫息息相关。在压力存在的情况下能启动一些基因的表达,以增强细菌对环境的耐受性,这些基因包括与耐受渗透压、酸碱性环境、氧化、极端温度和宿主体内胆碱等环境压力相关的基因。本文综述了σB因子在上述几种环境压力胁迫中的作用,为深入了解该菌的生理特征、探讨食品的最佳生产和保藏条件、防止细菌的感染等方面提供新的理论依据。 张强 冯莹颖 周青春 罗勤 张晓莉 秦龙娟关键词:单核细胞增生李斯特菌 SIGMA B因子 从语境视角对英汉口译预测的研究 口译与笔译有着很大的差别,其最大特点是工作时间有限而劳动强度大。口译员需在瞬间完成听辨、记忆、翻译等几个步骤,而要以“准、顺、快”的标准来完成一次口译更是难上加难。DanielGile的认知负荷模式指出口译员必须合理分配... 张晓莉关键词:语境 口语翻译 英汉翻译 文献传递 高中生化学学习选择能力调查及策略研究 高中生化学学习选择能力研究是化学教育中一个非常重要的课题。然而在一线化学教师教学工作和科研论文中,与中学生学习选择能力相关的教学活动和研究文献较少。 化学自我效能感、化学学习动机、化学学习归因是影响高中生化学学习选择能... 张晓莉关键词:高中生 化学学习 教学活动 文献传递 Triton X-100在单菌落PCR技术中的优化作用 被引量:5 2009年 在利用单菌落PCR法直接筛选含有外源基因的重组质粒以及发生同源重组的重组子时,通过0.1%TritonX-100处理模板对PCR技术进行优化。以大肠杆菌DH5α、单核细胞增生李斯特菌的重组克隆为例,单菌落经Triton X-100处理后再进行PCR,琼脂糖凝胶电泳图谱的条带更清晰、杂带减少;克隆鉴定的阳性率明显提高,且在15μL的PCR反应混合液体系中的扩增效果更明显。对单核细胞增生李斯特菌的检测方法可以推广适用于多种革兰氏阳性菌。 张晓莉 冯莹颖 张强 罗勤 蒋苹 钱悦关键词:TRITONX-100 重组克隆 单核细胞增生李斯特菌毒力基因inlB/actA双缺失突变株的构建 被引量:4 2010年 单核细胞增生李斯特菌inlB和actA毒力基因的编码产物InlB和ActA是与其致病性相关的重要毒力因子,与该菌在细胞间扩散、传播有着直接的关系,其中肌动蛋白聚集因子ActA是细菌由细胞浆扩散至相邻细胞所必须的因子,而内化素InlB在对肝细胞的侵袭过程中起着重要作用。本研究中利用同源重组技术在inlB缺失菌株基础上成功构建了毒力基因inlB和actA双缺失的突变株,获得减毒突变株,为构建预防人类和动物疾病的疫苗载体奠定了基础。 王莉 冯飞飞 张强 冯莹颖 邓灵福 张晓莉 罗勤关键词:单核细胞增生李斯特菌 同源重组 单核细胞增生李斯特菌毒力基因actA转录调控机制的初步研究和缺失突变株的构建 单核细胞增生李斯特菌,简称单增李斯特菌(LM)是常见的食源性致病菌,2002年被WHO列为仅次于大肠杆菌O157,沙门氏菌、志贺氏菌后的第四大重要的食源性致病菌。单增李斯特菌是一种人畜共患病李斯特菌病的病原,主要通过食用... 张晓莉关键词:单核细胞增生李斯特菌 毒力基因 转录调控 文献传递 一步法定点突变技术快速构建bsh基因突变启动子 被引量:4 2009年 目的:建立一种高效便捷的定点突变方法,为基因表达调控以及蛋白质结构和功能的研究提供技术支撑。方法:以构建单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes)中编码胆碱水解酶(bile salt hydrolase,BSH)的bsh基因突变启动子为例,采用一对完全互补并带有突变位点的引物扩增携带bsh基因启动子的重组质粒DNA全序列,通过DpnⅠ消化PCR产物中剩余的甲基化的模板DNA,酶切后的PCR产物直接转化大肠杆菌,从而获得含有突变启动子的重组质粒。结果:通过一步法定点突变技术成功构建了bsh基因的三种突变启动子。结论:该方法简单高效,只要把握好对引物设计,高保真的DNA聚合酶、模板DNA的浓度以及PCR扩增程序的选择,突变成功率可以达到100%。 冯莹颖 张强 周青春 罗勤 张晓莉 秦龙娟关键词:单核细胞增生李斯特菌 调控蛋白PrfA的单个氨基酸突变对单核细胞增生李斯特菌毒力基因转录水平的影响 被引量:5 2008年 PrfA是单核细胞增生李斯特菌(L.monocytogenes)中迄今为止发现的唯一一个调控绝大多数毒力基因转录表达的蛋白因子.为了深入研究PrfA结构和功能的关系,模拟一株自然界分离得到的PrfA组成型突变株P14A(血清型4b),将标准野生株EGDe(血清型1/2a)的PrfA第145位甘氨酸突变为丝氨酸(简称PrfA*),分别构建野生型PrfA和突变型PrfA*表达融合载体,提取并纯化相应蛋白用于体外转录,直接检测依赖于PrfA的毒力基因plcA,hly和actA启动子的转录活性;同时,将携带prfA和prfA*的载体分别电转化入prfA基因缺失菌株中,应用实时RT-PCR检测plcA,hly和actA体内转录水平.实验结果显示:突变型PrfA*蛋白明显增强了plcA,hly和actA启动子的体外转录活性;依赖于PrfA的毒力基因在携带突变型PrfA*蛋白的菌株中的体内转录水平远远高于携带野生型PrfA蛋白的菌株,说明PrfA第145位甘氨酸突变为丝氨酸后增强了PrfA蛋白与其靶基因的结合能力,从而提高其表达水平. 罗勤 周青春 冯莹颖 张晓莉关键词:单核细胞增生李斯特菌 体外转录 《黑暗的心》中的陌生化及翻译研究 文学翻译区别于其他翻译的主要特征就在于文学作品有文学性。俄国形式主义认为,文学性就是使特定文本成为文学作品的东西。没有了文学性,文学也就不称其为文学了。所以在翻译文学作品时要尤其注意文学性的翻译。俄国形式主义学派代表人物... 张晓莉关键词:英汉翻译 陌生化手法 《黑暗的心》 文献传递