目的观察糖基化终末产物(advanced glycation end products,AGEs)及其受体(receptor of advanced glycation end products,RAGE)对巨噬细胞胆固醇摄取功能的影响。方法培养THP-1细胞株,用PM A诱导分化使其成为巨噬细胞,以100μg/ml的氧化LDL(oxidized LDL,ox LDL)孵育细胞使其转化为泡沫细胞。分别以浓度为300、600μg/ml的AGEs对细胞进行刺激,应用用浓度为10μg/ml的抗RAGE抗体对细胞进行预处理,采用油红O染色测定细胞内脂质含量,通过RT-PCR及Western印迹法来检测各组巨噬细胞RAGE表达以及与胆固醇摄取相关因子SRA2、CD36表达变化,将干预后的巨噬细胞与荧光标记的ox LDL共同孵育,动态观察巨噬细胞在不同干预条件下胆固醇摄取功能的变化。结果高浓度AGEs诱导后,巨噬细胞内脂质含量增加,RAGE表达增加,SRA2、CD36表达增加,巨噬细胞胆固醇摄取能力增加。应用抗体阻断RAGE轴后,AGEs引起的改变均有明显恢复。结论 AGEs-RAGE相互作用可以促进巨噬细胞摄取胆固醇,增加细胞内脂质累积,从而易于形成泡沫细胞。
目的观察糖基化终末产物(advanced glycation end products,AGEs)及其受体(receptor of advanced glycation end products,RAGE)对巨噬细胞胆固醇流出功能的影响。方法培养THP-1细胞株并用佛波酯诱导分化使其成为巨噬细胞,与100μg/ml的氧化LDL(oxidized LDL,ox LDL)孵育细胞使其转化为泡沫细胞。分别以浓度为300μg/ml的AGEs、600μg/ml的AGEs对细胞进行刺激,用浓度为10μg/ml的抗RAGE抗体对细胞进行预处理,通过油红"O"染色测定来反映细胞内脂质含量,通过RT-PCR及Western Blot的方法来检测各组巨噬细胞RAGE表达以及与胆固醇流出相关因子ATP-结合盒转运子(ATP-binding cassette,ABC)G1、ABCA1及肝X受体-α(Liver X Receptor-α,LXRα的表达变化),通过将干预后的巨噬细胞与荧光标记的ox LDL共同孵育,并加入HDL及载脂蛋白A1(apolipoprotein A1,apo A1)介导胆固醇流出,测定细胞培养基中的荧光强度,动态观察巨噬细胞在不同干预条件下胆固醇流出功能变化。结果经AGEs诱导后,巨噬细胞内脂质含量增加,RAGE表达增加,ABCG1表达下降,巨噬细胞胆固醇流出能力减弱。AGEs效应呈浓度依赖性。应用抗体阻断RAGE功能后,AGEs引起的改变均有明显恢复。结论 AGEs-RAGE相互作用可以抑制巨噬细胞流出胆固醇,增加细胞内脂质累积,从而易于形成泡沫细胞。
