方天翎
- 作品数：10 被引量：64H指数：5
- 供职机构：中山大学附属第二医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 胚胎干细胞源性肝干细胞肝内移植对宿主肝功能的影响及安全性评估(英文)被引量：3
- 2008年
- 背景：体外诱导胚胎干细胞分化为肝细胞已有不少成功的报道，但其体内移植后能否有效整合入宿主肝板、在肝内能否进一步生长分化并表达肝细胞功能以及成瘤的风险等情况目前还不清楚。目的：应用治疗性肝再生模型进行胚胎干细胞源性肝干细胞肝内移植．观察其在肝组织替代、体内的生长分化及成瘤性情况。设计：随机对照动物实验。单位：中山大学附属第二医院小儿外科。材料：选用BALB／c小鼠24只为受体，鼠龄6～8周，体质量20～352，雌雄不拘购自广州市实验动物中心。实验所用胚胎干细胞源性肝干细胞由作者所在课题组诱导胚胎干细胞分化而成。小鼠胚胎干细胞株E14由本院干细胞中心提供。方法：实验于2006-07／2007-06在中山大学附属第二医院干细胞研究中心完成。将24只小鼠随机分为2组：肝再生模型＋干细胞移植组和肝切除＋干细胞移植组，每组12只。前组分两次按50mg／kg剂量腹腔内注射倒千里光碱（retrorsine），间隔2周，第2次注射4周后行70％肝部分切除制造肝损伤；然后经门静脉分别移植1×10^5羟基荧光素乙酰乙酸（CFDA-SE）荧光标记的细胞入小鼠肝内进行胚胎干细胞源性肝干细胞移植。后组在行70％肝部分切除制造肝损伤模型后进行胚胎干细胞源性肝干细胞移植。主要观察指标：荧光显微镜下观察移植细胞组受体鼠肝脏内分布、整合与体内生长分化情况。2周后行白蛋白荧光免疫组化（双荧光染色）、血清白蛋白水平检测其功能状况。将胚胎干细胞源性肝干细胞注入治疗性肝再生小鼠肝内，将未分化的胚胎干细胞移植入小鼠腋区皮下作为对照，观察胚胎干细胞源性肝干细胞体内成瘤情况。结果：①肝干细胞在受体鼠肝内生长情况：CFDASE标记的胚胎干细胞源性肝干细胞肝内移植1周，受体小鼠肝实质内可见散在绿色荧�
- 邓小耿宋尔卫闵军张杰陈伦曾炳胜方天翎陈积圣
- 关键词：胚胎干细胞肝细胞移植诱导分化
- 肝细胞生长因子诱导骨髓间质干细胞分化为心肌细胞被引量：28
- 2004年
- 目的 :探讨肝细胞生长因子 (HGF)体外诱导骨髓间质干细胞 (MSC)定向分化心肌细胞的一种新方法。方法 :分离SD大鼠骨髓MSC ,培养至 4 - 6代后 ,添加HGF(终浓度 10 μg/L)持续培养 30d ,倒置显微镜下动态观察分化细胞的自律性搏动和对 0 1%异丙肾上腺素和无Ca2 + 孵育液的反应 ,并行心肌肌凝蛋白表达鉴定。结果 :分化第 14 - 2 0d骨髓间质干细胞增殖形成集落 ,10 % - 5 0 %克隆中开始出现持续节律收缩的细胞群体 ,节律频率为 70- 90次 /min ,异丙肾上腺素加快其搏动速率 ,无Ca2 + 孵育液则抑制之。细胞心肌肌凝蛋白表达鉴定为心肌细胞。结论 :HGF可诱导骨髓间质干细胞分化为心肌细胞 。
- 方天翎闵军邓小耿钱世鵾褚忠华陈亚进邵静魏菁陈积圣
- 关键词：肝细胞生长因子心肌分化
- 纳米生物磁小体和MUC1双导向转染碘泵基因治疗胰腺癌
- 陈汝福李志花谢德荣霍景山蒋宁一方天翎张俊峰孙键陈积圣
- 1)提供一种新型的靶向性体内基因转染载体系统和为临床提供一种通过基因转染增加核素治疗胰腺癌的新方法；2)建立基因转染提高放射性核素治疗胰腺癌的方法学，为临床应用核素治疗胰腺癌奠定方法学基础。
- 关键词：
- 关键词：胰腺癌放射性核素治疗
- 体外诱导小鼠胚胎干细胞分化为肝细胞的研究被引量：6
- 2006年
- 目的 基于肝脏发育生物学进展，建立有效诱导胚胎干细胞（ESC）向肝细胞分化的体外培养体系。方法 小鼠ESC细胞系E14，在内含1000U／ml的rmLIF的无饲养层高糖DMEM培养基中培养，去除rmLIF后用悬滴培养法制备成拟胚体。依次加入10^-7M的Dexamethasone、10μg／L的FGF-4、25μg／L的HGF等诱导因子，继续培养1～2周。然后取分化细胞，行细胞形态学观察、免疫细胞化学染色检测白蛋白和CK8／18的表达、RT-PCR检测白蛋白和转甲状腺蛋白等肝细胞特征性蛋白的mRNA转录水平。糖原染色、尿素合成功能检测则对其功能进行检验。结果 ESC体外培养生长旺盛，呈”巢状”克隆性增殖。去除rmLIF后悬浮培养，一般2～3d可制备成拟胚体。序贯加入Dex、FGF-4和HGF等诱导因子进行分化培养后，约于ED12可见分散、克隆样增殖的小上皮样细胞集落，ED19左右有较多细胞分化为多角形的肝细胞样细胞。免疫组化染色，见胞浆内出现棕黄色颗粒，表达肝细胞特有的白蛋白以及CK8／18等蛋白。RT-PCR显示有白蛋白、转甲状腺蛋白等的mRNA转录。糖原染色见胞浆内存在红色颗粒，呈阳性反应；尿素合成功能检测显示，培养液内可见尿素氮的逐日升高，说明细胞具有肝细胞特有的糖原合成、尿素合成和分泌功能。结论 加入FGF-4、HGF和Dex等肝脏胚胎发育时期的关键性调控因子的体外培养体系可以诱导胚胎干细胞分化为肝细胞样细胞。
- 邓小耿闵军张杰曾炳胜方天翎陈积圣
- 关键词：细胞培养动物实验替代试验
- 胚胎干细胞体外分化为功能性肝细胞过程中肝细胞生长因子诱导系统中瘀胆血清的促进作用(英文)
- 2007年
- 背景:目前各种诱导胚胎干细胞(ESC)分化为肝细胞的方法中,大多忽略了对分化细胞功能的诱导与鉴定。是否表达肝细胞功能应作为ESC向肝细胞分化的鉴定指标之一。目的:观察在肝细胞生长因子(HGF)体外诱导小鼠胚胎干细胞向肝细胞分化的体系中,瘀胆血清病理环境对分化细胞表达肝细胞功能的作用。设计:观察对比,体外细胞学实验。单位:中山大学附属第二医院肝胆外科。材料:实验于2004-10/2007-02在中山大学附属第二医院医学研究中心完成。小鼠E14ESC系由中山大学干细胞与组织工程中心提供;SD大鼠20只,鼠龄2周,购自中山大学动物实验中心。实验过程中对动物的处置符合动物伦理学要求。方法:对SD大鼠施以胆总管结扎切断手术,制作瘀胆模型,饲养10d后取全血制备瘀胆血清。用悬滴培养ESC发育5～7d的拟胚体,将其离散细胞种植于不同的分化体系,分别进行自主分化、20μg/L肝细胞生长因子、5%瘀胆血清+20μg/L肝细胞生长因子诱导分化。主要观察指标:①倒置显微镜下动态观察细胞形态变化。②分化4周时进行白蛋白、甲胎蛋白、CK18/19、糖原及吲哚氰绿和荧光二乙酯染色。③采用相应试剂盒每3天检测细胞合成白蛋白、三酰甘油及尿素氮功能。结果:①ESC自主分化难以控制,分化为3个胚层的细胞。肝细胞生长因子促进ESC向内脏内胚层和中胚层(心肌)分化,但两者仅能表达低水平的肝细胞特异性功能。②引入瘀胆血清的肝细胞生长因子诱导体系中ESC能分化为较为形态均一的多角形细胞,其糖原、吲哚氰绿和荧光二乙酯染色均为阳性;白蛋白、三酰甘油和尿素氮合成能力显著高于自发分化和肝细胞生长因子诱导结果(P<0.05～0.01)。结论:采用瘀胆血清体外模拟病理性微环境可促进HGF诱导的ESC源性肝细胞表达高水平的肝特异性代谢功能。
- 闵军方天翎陈亚进邓小耿商昌珍刘璐曹君陈积圣
- 关键词：胚胎干细胞肝细胞生长因子肝细胞
- 含淤胆血清的培养体系从大鼠骨髓细胞中筛选与扩增肝干细胞亚群被引量：10
- 2003年
- 目的 :探讨采用含淤胆血清的培养体系从骨髓细胞中筛选与扩增骨髓源性肝干细胞的可行性。方法 :制备含 2 %、5 %、7%和 10 %淤胆血清的筛选培养液 ,培养大鼠骨髓细胞 ,4d时加入肝细胞生长因子促进肝干细胞生长 ,2周时行免疫组化与RT -PCR检测肝干细胞标志、糖原染色和尿素合成试验分析功能。结果 :在 2 %淤胆血清中 ,骨髓细胞不能形成克隆 ,7%与 10 %的血清则骨髓细胞逐渐凋亡。在 5 %的淤胆血清时 ,骨髓源性肝干细胞在此病理筛选培养液中能够生存并选择性生长 ,而其他类型细胞则脱落凋亡 ;第 2周时 ,形成肝细胞样集落 ,细胞表达胚胎时期肝细胞特征性蛋白 ,具有肝细胞特有糖原和尿素合成功能。结论 :含淤胆血清的微环境筛选培养体系能够有效地从骨髓细胞中筛选骨髓源性肝干细胞 ,为临床肝细胞替代治疗的获取丰富供体细胞来源提供了新的思路。
- 蔡云峰闵军方天翎褚忠华邓小耿何劲松陈积圣
- 关键词：骨髓干细胞细胞分离
- 含淤胆血清的培养体系体外诱导胚胎干细胞表达肝细胞功能的研究被引量：10
- 2004年
- 目的 探讨病理微环境体外诱导对小鼠胚胎干细胞(ESC)表达肝细胞功能的作用。 方法 悬滴培养ESC发育5-7 d的拟胚体,将其离散细胞种植于不同的分化体系,观察ESC在自主分化、肝细胞生长因子(HGF)或5％淤胆血清+HGF诱导下每天的分化情况(倒置相差显微镜),以及细胞的糖原、甘油三酯、白蛋白及尿素氮合成功能,细胞吲哚氰绿(ICG)和荧光二乙酯(FDA)染色的情况。 结果 ESC自主分化难以控制,分化为3个胚层的细胞。HGF促进ESC向内脏内胚层和中胚层(心肌)分化,但两者仅能表达低水平的肝细胞特异性功能。引入淤胆血清的HGF诱导体系中ESC能分化为较为均一的多角形细胞,具有较高水平的糖原、甘油三酯、白蛋白和尿素氮合成能力,ICG和FDA染色阳性。 结论 自主分化和HGF诱导ESC表达肝细胞代谢的能力有限。体外模拟病理性微环境可诱导ESC定向分化为肝系细胞,并具有较高水平的肝细胞代谢功能。
- 方天翎闵军邓小耿钱世鹍褚忠华陈亚进邵静魏菁陈积圣
- 关键词：ESC分化HGF肝细胞功能体外诱导
- 淤胆血清“病理微环境”诱导胚胎干细胞向肝细胞分化被引量：8
- 2004年
- 目的 :探讨淤胆血清“病理微环境”培养体系诱导胚胎干细胞 (ESC)向肝细胞分化的可行性。方法 :将小鼠ESC细胞系E14在无白血病抑制因子培养基中培养 ,使其自发分化为拟胚体 ,加入FGF - 4和HGF初步诱导 ,然后置于 5 %淤胆鼠血清“病理微环境”筛选培养液中继续培养 2周 ,然后进行细胞形态学观察 ,白蛋白和CK8/ 18免疫组化染色 ,白蛋白与转甲状腺蛋白RT -PCR检测 ,细胞糖原染色及尿素合成功能分析。结果 :经初步诱导分化的ESC置于 5 %淤胆血清“病理微环境”筛选培养液中培养 ,初期细胞生长受抑制 ,2周后分化为肝细胞样细胞 ,细胞呈现良好的均质性 ;免疫组化染色显示白蛋白和CK8/ 18表达 ;RT -PCR显示有白蛋白、转甲状腺蛋白等的mRNA转录 ;细胞有糖原和尿素合成功能。结论 :采用含淤胆血清的病理微环境培养体系从经FGF - 4和HGF初步诱导的胚胎干细胞中有效筛选出了具有功能的肝细胞 ,细胞有较好的均质性 ,为临床肝细胞替代治疗、获取丰富供体细胞来源提供了新思路。
- 邓小耿方天翎曹铭辉杨勇志邵静魏菁陈积圣闵军
- 关键词：干细胞肝细胞
- 胚胎干细胞源性肝干细胞在治疗性肝再生中的应用被引量：4
- 2007年
- 目的:应用治疗性肝再生模型进行胚胎干细胞(ESC)源性肝干细胞肝内移植,观察其在肝组织替代、体内的生长分化及成瘤性等情况,为ESC移植在难治性肝病治疗中的临床应用提供实验依据。方法:倒千里光碱+70%肝部分切除建立BALB/c小鼠的治疗性肝再生模型。用荧光示踪剂CFDASE标记移植细胞,将经淤胆血清"病理微环境"筛选体系筛选出的ESC源性肝干细胞经门静脉移植入治疗性肝再生模型小鼠肝内。然后荧光显微镜下观察,检测移植细胞体内分布、整合与肝细胞替代、体内生长分化等情况。2周后行白蛋白荧光免疫组化(双荧光染色)、血清白蛋白水平检测其功能状况。并通过观察其体内成瘤性对筛选出的ESC源性肝干细胞的安全性进行评估。结果:CFDASE标记的ESC源性肝干细胞肝内移植1周,受体小鼠肝实质内可见散在绿色荧光分布。2周后,肝实质内绿色荧光分布区域明显扩大,且可见类似肝索样结构排列。共焦白蛋白荧光免疫组化(双荧光染色)结果表明,受体小鼠肝组织内可见标记细胞表达白蛋白阳性信号(呈黄色荧光),血清白蛋白水平则无明显差异(P>0.05)。6周内未见畸胎瘤形成,而将未分化的ESC移植入小鼠腋区皮下6周后则可见畸胎瘤形成。结论:经淤胆血清"病理微环境"筛选体系筛选出的ESC源性肝干细胞移植入治疗性肝再生模型小鼠肝内后可有效整合入宿主肝板、在肝内能进一步生长分化并部分表达肝细胞功能。其安全性较好,6周内未见畸胎瘤形成。
- 邓小耿宋尔卫闵军张杰陈伦曾炳胜方天翎陈积圣
- 关键词：胚胎干细胞肝细胞移植细胞分化肝再生
- 门静脉高压的外科治疗进展被引量：1
- 2003年
- 陈积圣方天翎
- 关键词：门静脉高压外科治疗脾保留性手术断流术分流术
