李伟
- 作品数：36 被引量：92H指数：5
- 供职机构：扬州大学动物科学与技术学院更多>>
- 发文基金：扬州大学校科研和教改项目国家科技重大专项国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学自动化与计算机技术医药卫生更多>>
- 一种酶免疫传感器的制备和性能测试被引量：3
- 2002年
- 这种酶免疫传感器是采用丝素蛋白溶液将待测抗原(兔IgG)固定在基础电极表面,选用抗体(山羊抗兔IgG-HRP)与其识别结合.利用H2O2将抗原抗体结合的电位响应信号放大而检测抗原的浓度.该传感器测定抗原的最低检测浓度1.0×10-10mol/L,线性范围1.0×10-8～1.0×10-10mol/L,响应时间为10 s.通过电泳的方法加速抗原抗体的识别结合,反应时间由原来的90 min缩短到30 min,这在国内外鲜有报道.这种以固定化抗原结合酶标抗体量的多少作为检测抗原标准的新型酶免疫传感器,在临床检测、生物医学研究等领域将会有广阔的应用前景.
- 刘印林李伟潘宁李幼荣
- 关键词：生物敏电极再生丝素IGG
- 稀土元素对生物体CaM水平调节的剂量效应的研究被引量：2
- 2002年
- 从 Ca2 + 、 Ca M、 Ca2 + ATP酶 3个层次综述了稀土元素对生物体 Ca M水平调节的剂量效应及其作用机理。
- 李伟梁建生潘志明李幼荣邱关明
- 关键词：生物体稀土元素生物体
- 再生丝素固定的酶免疫传感器及其应用前景的研究被引量：1
- 2002年
- 酶免疫传感器是采用再生丝素将待测抗原 (免IgG)固定在石墨电极表面 ,选用抗体 (山羊抗兔IgG-HRP)与其识别结合。利用H2 O2 将抗原抗体结合的电位响应信号放大 ,采用直接电位法检测IgG的浓度。该传感器测定IgG的最低检测浓度可达 1.2× 10 -10 mol/L ,标准曲线的线性范围在 4.1× 10 -7～ 1.2× 10 -10 mol/L ,响应时间为 15s。通过电泳的方法加速抗原抗体的识别结合 ,反应时间由原来的 90min缩短到 30min ,这在国内外鲜有报道。以固定化抗原结合酶标抗体量的多少作为检测抗原标准的新型酶免疫传感器 ,不仅在临床检测、生物医学研究领域中 ,而且在动植物疾病检测、环境监测、HLA个人身份鉴定、PC安全、物理访问 (门禁 )、军事等领域都有着广阔的应用前景。
- 李伟李幼荣潘宁
- 关键词：再生丝素IGG电泳固定化酶
- 山羊iPS细胞诱导及培养体系的优化
- 2014年
- 为了高效、持续的诱导获得并培养山羊诱导性多能干细胞(Induced pluripotent stem cells,iPS),本研究从饲养层和培养液方面进行优化。将分离获得3代以内的小鼠胎儿成纤维细胞(Mouse embryonic fibroblast,MEF)、山羊胎儿成纤维细胞(Goat embryonic fibroblast,GEF)用丝裂霉素C处理后,分别按1×105 mL-1 MEF、1×105mL-1 GEF、5×104 mL-1 MEF+5×104 mL-1 GEF的密度接种,以高糖DMEM+20%胎牛血清(FBS)和KnockoutDMEM+20%血清替代物(KSR)为培养液,研究不同饲养层种类和培养液对山羊iPS细胞获得和培养的影响。结果显示,山羊iPS细胞在接种密度为5×104 mL-1 MEF+5×104 mL-1 GEF的饲养层上,使用KnockoutDMEM+20%KSR组合的培养液,山羊iPS细胞的诱导效率以及消化传代后的克隆形成率均极显著高于其他5组(P<0.01)。对该组培养的山羊iPS细胞进行碱性磷酸酶(AKP)染色呈阳性;Oct4、SSEA-1、Tra-1-60、Tra-1-81免疫荧光检测呈阳性;RT-PCR检测有Oct4、Sox2、Klf4和Nanog基因的表达;体外能分化形成类胚体。结果表明,将细胞接种在密度为5×104 mL-1 MEF+5×104 mL-1 GEF的饲养层上,使用KnockoutDMEM+20%KSR的培养液更适合山羊iPS细胞的获得和培养。本试验为山羊iPS细胞的体外研究、临床试验、动物基因组修饰和山羊胚胎干细胞(Embryonic stem cells,ES)的建系奠定基础。
- 邱峰龙左其生李东李伟陈庭锋韦光辉李碧春
- 关键词：饲养层培养液IPS细胞山羊
- 徐淮山羊H-FABP基因克隆、表达产物亚细胞定位的研究及转基因小鼠的制备被引量：7
- 2012年
- 旨在克隆徐淮山羊心脏型脂肪酸结合蛋白(H-FABP)基因的cDNA,探讨其生物信息学功能。通过EGFP融合蛋白对该基因亚细胞水平的表达定位,探究该基因在异种生物体内表达情况,探索制备异种转基因动物的可能性。采用反转录PCR(RT-PCR)方法克隆徐淮山羊H-FABP基因cDNA,进行生物信息学分析,构建其融合表达载体pEGFP-H-FABP。脂质体(LTX)介导基因转染山羊成纤维细胞(GEF),48h后进行荧光检测,RT-PCR检测mRNA在细胞内的表达。利用睾丸注射将目的基因转入小鼠体内,在DNA和蛋白水平上检测目的基因的表达情况。结果,徐淮山羊H-FABP基因完整编码区(CDS)大小为402bp,编码133个氨基酸,GenBank登录号为AY466498.1。徐淮山羊H-FABP序列与人、鸡、褐家鼠、奶牛、野猪、驴及斑马鱼相应编码区同源性为89%、76%、85%、84%、93%、91%、70%,氨基酸序列同源性为90%、79%、88%、97%、95%、94%、72%。成功构建融合表达载体pEGFP-H-FABP,目的基因在mRNA水平上成功表达。目的蛋白定位于细胞质中,与在线预测结果相同(无信号肽,定位于细胞质中)。通过尾静脉注射和睾丸注射,该基因可以在小鼠体内实现暂态表达和持续性表达。本研究成功克隆了徐淮山羊H-FABP基因cDNA,而且H-FABP基因在进化过程中是保守的。该蛋白无信号肽,在单细胞水平上可表达于细胞质中,在小鼠体内也可以成功表达。
- 阴彦辉韦光辉李伟朱才业张亚妮杜立新曹文广李碧春
- 关键词：徐淮山羊心脏型脂肪酸结合蛋白荧光蛋白转基因鼠
- T-DNA插入突变体导致甘蓝型油菜种子脂肪酸含量的变化
- 本文通过农杆菌介导方法将双元载体pCambia2031转化快速生长型甘蓝型油菜,收获的T0代种子及T1代植株经PCR鉴定和遗传分析,获得单拷贝的纯合的T-DNA插入突变体51株。对T-DNA插入突变体T2代种子进行了脂肪...
- 吴磊刘银李伟Eicke Rudloff王幼平
- 关键词：甘蓝型油菜T-DNA插入突变体脂肪酸含量
- 文献传递
- 徐淮山羊多能性转录因子mRNA制备及在成纤维细胞中的表达
- 2014年
- 【目的】克隆徐淮山羊多能性转录因子0ct4、Sox2、K1f4和c—Myc的CDS片段,构建pMD19-T—oct4、pMD19-T—sox2、pMD19-T—k1f4和pMD19-T—c—myc重组质粒,随后构建含T7启动子的pcDNA3-oct4、pcDNA3-sox2、pcDNA3-k1f4和pcDNA3-c—myc重组质粒,通过体外转录,获得该4种多能性转录因子的mRNA,并使其在徐淮山羊成纤维细胞中稳定表达。【方法】应用RT—PCR方法分别从徐淮山羊睾丸组织、皮肤组织、小肠组织中扩增多能性转录因子Oct4、Sox2、K1f4和c—Myc基因编码全序列,将该4种基因分别克隆到pMD19-T载体,构建pMD19-T—oct4、pMD19-T—sox2、pMD19-T-k1f4和pMD19-T—c—myc重组质粒。然后将pcDNA3.0载体和pMD19-T重组载体双酶切后用T4连接酶连接,构建含有T7启动子的真核表达载体pcDNA3-oct4、pcDNA3-sox2、pcDNA3-k1f4和pcDNA3-c—myc重组质粒。各重组质粒分别用限制性内切酶XhoI、XbaI单酶切,酶切后质粒模版按照体外转录试剂盒说明体外转录获得各多能性转录因子的mRNA,并对获得的mRNA进行检测,确定其稳定性和浓度。按照脂质体(体积):mRNA(质量)为1:1的比例用脂质体2000转染。转染24 h后,利用Western blot技术、间接免疫荧光实验检测徐淮山羊多能性转录因子Oct4、Sox2、K1f4和c—Myc基因的mRNA在成纤维细胞中的表达。【结果】①克隆得到的徐淮山羊0ct4、Sox2、K1f4和c—Myc基因编码序列全长分别为1 083、962、1 434和1 320 bp,并经TA克隆测序验证,其CDS序列与绵羊、人、牛和猪等的序列相似性在89%以上;②体外转录获得的4种多能性转录因子的mRNA经脂质体转染徐淮山羊成纤维细胞,在成纤维细胞中均定位于细胞核;③4种多能性转录因子的mRNA在徐淮山羊成纤维细胞中表达的蛋白与预期大小一致,分别为38、34、50和48 kd。【结论】成功克隆了徐淮山羊Oct4、Sox2、K1f4和c—Myc基因,该4种多能性转录因子的mRNA能够在徐淮山羊成纤维细胞中稳定
- 邱峰龙张亚妮倪蓉李伟陈庭锋韦光辉李碧春
- 关键词：徐淮山羊体外转录MRNA
- 非编码RNA基因的鉴定与分析
- 生物体内存在着大量的不以蛋白质为终产物，而是以RNA为终产物的基因，这种基因我们称之为非编码RNA(Noncoding RNA)基因。本文主要对两种非编码RNA，即snoRA和microRNA的鉴定和分析进行了研究。
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- 李伟
- 关键词：水稻非编码RNA基因基因鉴定甲基化表达谱
- 文献传递
- 一种新型酶免疫传感器的制备及其性能被引量：1
- 2001年
- 本文研究的酶免疫传感器是采用再生丝素将待测抗原（兔IgG）固定在石墨电极表面,选用抗体（山羊抗兔IgG-HRP）与其识别结合。利用H2O2将抗原体结合的电位响应信号放大,采用直接电位法检测IgG的浓度。该传感器测定IgG的最低检测浓度可达1.2×10-10mol/L,标准曲线的线性范围在4.1×10-7～1.2×10-10mol/L,响应时间为15s。通过电泳的方法加速抗原抗体的识别结合,反应时间由原来的90min缩短到30min,这在国内外鲜有报道。这种以固定化抗原结合酶标抗体量的多少作为检测抗原标准的新型酶免疫传感器,不仅在临床检测、生物医学研究领域中,而且在动植物疾病检测、环境监测等领域都有着广阔的应用前景。
- 李幼荣周兰香李伟潘宁
- 关键词：再生丝素IGG抗原石墨电极
- 徐淮山羊SCD1基因的克隆和亚细胞定位研究及转基因小鼠的制备被引量：1
- 2013年
- 【目的】克隆徐淮山羊硬脂酰辅酶A脱氢酶1(SCD1)基因的cDNA并分析该基因生物信息学功能。通过EGFP融合蛋白在亚细胞水平定位该基因表达产物,研究该基因在异种动物体内表达情况,探索制备异种转基因动物的可能性及外源基因能否稳定遗传。【方法】采用RT-PCR方法从徐淮山羊脂肪组织中克隆SCD1基因cDNA,进行生物信息学分析,并构建含有增强型绿色荧光蛋白(EGFP)报告基因的融合表达载体pEGFP-C1-SCD1,脂质体(LTX)介导基因转染NHI-3T3细胞,48 h后荧光倒置显微镜下观察基因表达产物的分布,RT-PCR检测mRNA在体外水平的表达。利用睾丸注射法制备转基因小鼠,在F1代和F2代个体DNA水平和蛋白水平上检测目的基因的表达情况。【结果】成功克隆出徐淮山羊SCD1基因的全序列cDNA,大小为1 074 bp,编码357个氨基酸,GenBank登录号为JX854036,徐淮山羊SCD1序列与人、褐家鼠、小家鼠、绵羊、牛和野猪相应编码区的同源性分别为86%、83%、82%、98%、95%、90%,氨基酸序列同源性分别为84%、79%、79%、96%、92%、95%;成功构建了融合表达载体pEGFP-C1-SCD1;RT-PCR检测mRNA表达明显;EGFP-SCD1融合蛋白定位在NIT-3T3细胞质中,与在线软件预测一致;通过尾静脉注射和睾丸注射,该基因可以在小鼠体内暂态表达和持续性表达,且可以稳定遗传。【结论】体外克隆的徐淮山羊SCD1基因cDNA在单细胞水平上表达于细胞质中,在小鼠体内也可以表达。
- 朱才业韦光辉李伟王丹郑蒙蒙刘志永张亚妮李碧春
- 关键词：徐淮山羊荧光蛋白转基因鼠
