李竞
- 作品数：11 被引量：72H指数：6
- 供职机构：中国人民解放军海军总医院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 用抗原表位定向选择方法人源化抗TNF-α抗体Fab段被引量：12
- 1998年
- 目的用抗原表位定向选择（ｅｐｉｔｏｐｅｇｕｉｄｅｄｓｅｌｅｃｔｉｏｎ）方法，将鼠源性抗ＴＮＦ－α单抗Ｆａｂ段改造成完全人源性Ｆａｂ。方法首先用鼠单抗Ｆｄ段基因与人的κ链基因库相互配对，构建成人－鼠杂合噬菌体抗体库，筛选可与ＴＮＦ－α结合的克隆，所获得的人κ链基因再与人Ｆｄ基因库组合，建立人源噬菌体抗体库，再进行筛选；类似地以鼠κ链基因和人Ｆｄ库组合构建杂合抗体库，筛选人Ｆｄ基因，再和筛到的人κ链配对，选择与ＴＮＦ－α特异结合的克隆。结果以鼠抗体Ｆｄ段定向选择人κ链获得能与ＴＮＦ－α特异结合的杂合抗体Ｆａｂ片段，再以这些人κ链定向选择人Ｆｄ段获得能与ＴＮＦ－α结合的完全人源性的Ｆａｂ，但这些Ｆａｂ除与ＴＮＦ－α反应外，与一些无关蛋白有交叉反应。以鼠单抗κ链定向选择人Ｆｄ段获得能与ＴＮＦ－α特异结合的杂合Ｆａｂ，其中一个克隆显示很强的结合活性，以该克隆的Ｆｄ与筛到的人κ链配对，得到了能与ＴＮＦ－α特异结合的人源性Ｆａｂ片段。
- 王卓智王琰李竞刘群英刘群英陈宇萍化冰李振甫陈宇萍
- 关键词：基因库抗原决定簇
- 抗胃癌单抗3H11可变区氨基端序列对抗体活性的影响被引量：5
- 1999年
- 采用 Ｒ Ｔ Ｐ Ｃ Ｒ 方法， 利用第一骨架区通用引物扩增重链 Ｆｄ 段和κ链的基因， 克隆到 Ｆａｂ 表达载体中， 在大肠杆菌中获得了表达但未检测到抗原结合活性． 根据已克隆的３ Ｈ１１ Ｖ Ｌ、 Ｖ Ｈ 的真实序列， 重新设计κ链及 Ｆｄ 段５′端引物， 分别将骨架区引物在κ链及 Ｆｄ 段５′端所造成的氨基酸残基改变纠正为原始序列， 构建分别含有矫正后κ链或矫正后 Ｆｄ 以及二个链均得到矫正的 Ｆａｂ 表达载体， 这些载体在大肠杆菌中均获得类似水平的表达， 对任何一个链的矫正均可部分恢复 Ｆａｂ 段胃癌细胞的结合活性． 结果说明在构建小分子抗体时， Ｐ Ｃ Ｒ 引物引入的轻。
- 李竞王琰王卓智刘群英化冰陈宇萍朱迎春董志伟
- 关键词：免疫球蛋白可变区基因单克隆抗体
- 抗胃癌鼠单抗3H11 scFv的包含体表达及柱上在位复性被引量：5
- 1998年
- 目的：在大肠杆菌高效表达抗胃癌单抗３Ｈ１１的ｓｃＦｖ。方法：利用ＰＣＲ技术将３Ｈ１１ｓｃＦｖ基因从分泌型表达载体转移至高效表达载体，获得３Ｈ１１ｓｃＦｖ包含体的表达，经超声裂解、洗涤、变性后，尝试透析复性和凝胶过滤色谱柱上在位复性，结果：透析复性未能得到有活性的３Ｈ１１ｓｃＦｖ，而柱上在位复性效果良好，获得有功能性的３Ｈ１１ｓｃＦｖ。结论：成功进行了３Ｈ１１ｓｃＦｖ的柱上复性，不同ｓｃＦｖ在表达和复性中显示出明显差异，在基因工程抗体研制中值得注意。
- 李竞王琰王卓智朱迎春董志伟
- 关键词：胃肿瘤基因转移
- 抗胃癌鼠单抗3H11 Fab段载体的构建、表达及抗体活性检测被引量：6
- 1999年
- 目的构建和表达抗胃癌鼠单抗３Ｈ１１的Ｆａｂ段小分子抗体。方法采用ＲＴ－ＰＣＲ方法，利用第一骨架区通用引物扩增重链Ｆｄ段和κ链的基因，克隆到Ｆａｂ表达载体中。并根据已克隆的３Ｈ１１ＶＬ的真实序列，重新设计κ链５’端引物，将骨架区引物在κ链５’端所造成的氨基酸残基改变纠正为原始序列，再次构建Ｆａｂ表达载体。结果利用第一骨架区通用引物构建的Ｆａｂ在大肠杆菌中获得了表达但未检测到抗原结合活性，将骨架区引物在κ链５’端所造成的氨基酸残基改变纠正为原始序列后，在大肠杆菌中表达出了可与抗原ＭＧＣ８０３细胞结合的Ｆａｂ段。结论在构建小分子抗体时，ＰＣＲ引物引入的氨基酸残基的改变可影响所表达抗体的活性。
- 李竞王琰王卓智董志伟
- 关键词：单克隆抗体肿瘤抗体免疫球蛋白胃癌
- 人源化和人源抗体制备的研究
- 王琰陈晓穗周丽君王刚王卓智李竞乔媛媛刘晓琳王欲晓张海荣白银朱迎春
- 该研究旨在建立人源或人源化抗体的制备技术。克隆了多种鼠单抗的可变区基因，并在大肠杆菌获得功能性表达；构建了以上相应的多种人-鼠嵌合抗体并在真核细胞成功表达；建立了抗原表位定向选择法对鼠单抗进行人源化的技术，并进一步建立了...
- 关键词：
- 关键词：人源化人源抗体单克隆基因文库
- 抗原表位定向选择的人源抗TNF-α Fab的鉴定被引量：4
- 1999年
- 目的对通过抗原表位定向选择技术（ＥＧＳ）所筛选到的２株人源化ＴＮＦ－α抗体Ｆａｂ段进行分析鉴定。方法测定可变区基因的序列，用亲本鼠单抗Ｚ８进行竞争ＥＬＩＳＡ，用Ｌ９２９细胞检测其体外中和ＴＮＦ－α的活性，并用硫氰酸铵洗脱法比较与亲本鼠单抗的亲和力。结果基因测序表明２株抗体ＶＨ相同，属人ＶＨⅠ亚群；Ｖκ分别属人ＶκⅠ、ＶκⅢ亚群；竞争抑制实验表明所获人源抗体片段与亲本鼠源抗体是针对ＴＮＦ－α的同一抗原表位；体外中和实验证明此抗体片段能中和ＴＮＦ－α对Ｌ９２９细胞的毒性；该抗体片段的亲和力略低于原鼠单抗Ｚ８。
- 王卓智王琰李竞刘群英化冰陈宇萍朱迎春李振甫董志伟
- 关键词：肿瘤坏死因子EGS
- 抗人胃癌3H11人-鼠嵌合抗体的构建及表达被引量：7
- 1998年
- 为了降低抗人胃癌鼠单抗3H11的免疫原性,以利于该单抗在临床中的应用。我们构建并表达了3H11的人-鼠嵌合抗体,将3H11的轻、重链可变区基因分别插入到含有人k链及IgGl重链恒定区基因的真核细胞表达载体中,构建了3H11人-鼠嵌合抗体轻、重链表达载体。应用Lipofectin方法先将嵌合轻链表达载体转染到Sp2/0细胞中,经用含霉酚酸的选择培养基筛选及克隆化培养,获得稳定分泌3H11人-鼠嵌合轻链的转染细胞株。再将嵌合重链表达载体转染该细胞系,用含有组氨醇的选择培养基筛选,获得组氨醇抗性细胞株,经亚克隆后得到可稳定分泌人k链和人IgGl的转染细胞系,经ELISA检测该细胞系所分泌的上清含有可与人胃癌细胞系803结合的人IgG抗体活性,RT-PCR结果显示该细胞株有人-鼠嵌合抗体mRNA的转录,证明已获得分泌3H11人-鼠嵌合抗体的细胞系。
- 李竞王卓智王琰刘群英化冰陈宇萍朱迎春董志伟
- 关键词：人-鼠嵌合抗体胃肿瘤真核基因
- 从噬菌体抗体库克隆抗人RBC单链抗体基因被引量：11
- 1998年
- 目的用噬菌体抗体库技术克隆抗人红细胞（ＲＢＣ）的单链抗体（ＳｃＦｖ）基因。方法以人ＲＢＣ免疫小鼠，取脾细胞，ＲＴ－ＰＣＲ法扩增ＶＨ和Ｖκ基因，组装到ＳｃＦｖ－噬菌体抗体表达载体中，构建了噬菌体抗体库，以人ＲＢＣ为固相抗原，对该库进行了四轮“吸附－洗脱－扩增”筛选，获得了抗人ＲＢＣ的ＳｃＦｖ基因。结果ＤＮＡ序列分析表明其可变区基因分别属于小鼠ＶＨⅢ亚群和ＶκⅤ亚群。结论所表达的ＳｃＦｖ可与不同人ＲＢＣ结合，与ＡＢＯ血型抗原无关。
- 王琰王雅明刘群英徐建军李全喜陈宇萍王力民李竞
- 关键词：噬菌体抗体库单链抗体基因人红细胞
- 从噬菌体短肽库中筛选单克隆抗体识别的抗原表位被引量：12
- 1997年
- 将随机合成的寡聚核苷酸重组到噬菌体表面单价表达载体，构建了噬菌体随机八肽库。以抗原识别性明确的单克隆抗体９Ｅ１０固相化，对噬菌体短肽库进行了４～５轮“吸附－洗脱－扩增”的筛选，任选多个所获克隆进行ＥＬＩＳＡ检测。发现第４轮后６／２２个克隆可与９Ｅ１０结合，第５轮后１０／１０可与９Ｅ１０结合，此结合反应可被９Ｅ１０所针对的十肽抗原以及游离的９Ｅ１０特异性抑制。对所获阳性克隆进行ＤＮＡ序列测定发现，它们的序列可分为两种，其中一种序列与ｃ－ｍｙｃ十肽具有同源序列ＩＳＥｘｘＬ，而另一种的序列则完全不同。证实噬菌体表面单价表达体系用于构建噬菌体短肽库的有效性，为进一步筛选其它的具有高亲和力的特异性短肽打下了基础。
- 李全喜王琰李竞李竞徐建军王雅明董志伟
- 关键词：噬菌体单克隆抗体抗原表位
- 抗胃癌鼠单抗 3H11V 区基因的克隆及人-鼠嵌合轻链的表达被引量：12
- 1997年
- 利用前导肽序列设计引物，采用ＲＴ－ＰＣＲ技术从分泌抗人胃癌的单抗杂交瘤细胞系３Ｈ１１分离克隆了抗体的轻重链可变区基因序列。经ＤＮＡ序列分析表明所获基因含有全部前导序列，其成熟蛋白编码部分与从第一骨架区引物所克隆的序列相符。将轻链基因组建到人－鼠嵌合轻链表达载体中，转染至小鼠骨髓瘤细胞Ｓｐ２／０中，可获得人鼠嵌合轻链的表达，证明所克隆的基因具有表达活性，为人－鼠嵌合抗体的构建奠定了基础。
- 李竞王琰李全喜王雅明徐建军王力民董志伟
- 关键词：基因克隆基因表达胃肿瘤抗体单克隆抗体
