杜鹏 作品数:10 被引量:50 H指数:5 供职机构: 中国科学院上海生命科学研究院生物化学研究所 更多>> 发文基金: 教育部科学技术研究重点项目 上海市教育委员会重点学科基金 国家自然科学基金 更多>> 相关领域: 化学工程 生物学 轻工技术与工程 医药卫生 更多>>
Mut^s型基因重组巴斯德毕赤酵母高密度发酵过程中甲醇流加的控制 被引量:8 2003年 在采用Muts 表型基因重组巴斯德毕赤酵母 (Pichiapastoris)发酵生产血管生长抑制因子(angiostatin)的过程中 ,诱导表达阶段甲醇的质量浓度对血管生长抑制因子的表达至关重要 .因重组Muts 型巴斯德毕赤酵母利用甲醇极慢 ,按文献方法流加甲醇时 ,甲醇逐渐积累达 30 g/L ,血管生长抑制素表达水平仅为 4mg/L .采用甲醇检测与控制系统对甲醇流加进行反馈控制后 ,甲醇质量浓度可稳定控制在设定范围 .采用此系统控制诱导阶段的甲醇流加 ,同时手动流加适量甘油以促进细胞生长 ,血管生长抑制因子表达水平量最高可达 89mg/L . 谢静莉 张励 叶勤 周庆玮 辛利 杜鹏 甘人宝关键词:巴斯德毕赤酵母 血管生长抑制因子 反馈控制 发酵生产 氨离子浓度对重组毕赤酵母的生长和血管生长抑制素表达的影响 被引量:7 2002年 本研究采用流加补料培养方式培养重组巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris),表达血管生长抑制素(Angiostatin)。整个培养过程分为以甘油为碳源的生长阶段和以甲醇为碳源的诱导阶段。全过程用氨水调节pH时,诱导阶段菌体生长受到抑制,蛋白的最大表达量为9.08mg/L。进行不同氨离子浓度的摇瓶培养,证实在以甲醇为碳源时,氨离子浓度对菌体的生长有明显的影响。高密度培养中改用 2 mol/L的 KOH溶液调节 pH,诱导阶段菌体有缓慢的生长,蛋白最大表达量增为20mg/L。 张励 叶勤 辛利 杜鹏 甘人宝关键词:重组毕赤酵母 发酵 重组人表皮生长因子、其制备方法和药物组合物 本发明提供工程菌株EE-8和用其制备重组人表皮生长因子的方法,包括:用大肠杆菌偏爱的密码子构建和克隆合成的hEGF基因;构建和克隆碱性磷酸酯酶启动基因和信号肽序列基因片段phoA-P+sig;构建表达质粒pAE-8;用表... 甘人宝 李载平 钱悦 黄培勇 张倩 杜鹏 冯宝山 丁红珍 高翔 丁晨 周庆玮 范晋江 张爱宝文献传递 表达血管生长抑制素的重组毕赤酵母在诱导阶段混合碳源的流加 被引量:9 2003年 为进行高密度发酵并实现外源基因的高表达 ,在表型为MutS 的重组毕赤酵母 (Pichiapastoris)表达人血管生长抑制素的诱导阶段 ,采用了甘油 甲醇混合补料的培养方式。以溶氧水平作为甘油代谢指针来控制甘油限制性流加既可维持一定菌体生长 ,又不会发生发酵液中残余甘油及有害代谢产物 (乙醇 )阻遏蛋白表达。当表达阶段的菌体平均比生长速率控制于 0 0 12h- 1 ,菌体浓度达 15 0g L ,血管生长抑制素浓度最高达到 10 8mg L ,血管生长抑制素的平均比生产速率为 0 0 2mg (g·h) ,菌体关于甘油的表观得率为 0 69g g ,菌体关于甲醇的表观得率为 0 93g g。 谢静莉 周庆玮 张励 叶勤 辛利 杜鹏 甘人宝关键词:重组毕赤酵母 混合碳源 溶氧 发酵罐 重组人表皮生长因子、其制备方法和药物组合物 本发明提供工程菌株EE-8和用其制备重组人表皮生长因子的方法,包括:用大肠杆菌偏爱的密码子构建和克隆合成的hEGF基因;构建和克隆碱性磷酸酯酶启动基因和信号肽序列基因片段phoA-P+sig;构建表达质粒pAE-8;用表... 甘人宝 李载平 钱悦 黄培勇 张倩 杜鹏 冯宝山 丁红珍 高翔 丁晨 周庆玮 范晋江 张爱宝文献传递 重组巴斯德毕赤酵母高密度培养中铵离子浓度的影响 被引量:4 2004年 采用MutS表型的重组毕赤酵母生产血管生长抑制素,表达阶段流加甘油-甲醇混合碳源以提高菌体密度和血管生长抑制素的表达水平,菌体密度可达174g/L,约是表达阶段采用甲醇为单一碳源的发酵过程的3倍。菌体密度的提高导致表达阶段发酵液中铵离子浓度下降很快,当发酵液中的铵离子浓度低至40mmol/L时,影响了血管生长抑制素的表达。改变pH调节方式并在发酵后期添加25mmol/L(NH4)2SO4使发酵液中铵离子浓度维持在150mmol/L以上,血管生长抑制素的表达产量达到108mg/L。 谢静莉 周庆玮 杜鹏 甘人宝 叶勤关键词:巴斯德毕赤酵母 发酵 制备重组人类胰高血糖素肽-1(7-37)的方法 本发明提供工程菌株EGT-8、其构建方法和用其制备重组人类胰高血糖素肽-1(7~37){rhGLP-1(7~37))的方法,具体包括:用大肠杆菌偏爱的密码子化学合成两个片段并克隆hGLP-1(7~37)全长基因;构建分泌... 甘人宝 钱悦 杜鹏 冯宝山 丁红珍 范晋江 张倩 周庆玮 李载平文献传递 胰高血糖素在大肠杆菌中的分泌表达 被引量:7 2001年 报道了用基因工程方法构建含phoA(碱性磷酸酯酶)启动子、phoA信号肽与胰高血糖素基因的表达载体pAGluT. 实验证明, 转化了pAGluT的大肠杆菌(E.coli YK537)可高水平地分泌表达胰高血糖素, 其表达量为80 mg/L. phoA表达系统分泌表达的胰高血糖素的物化性质与天然胰高血糖素相同, 并具有相同的生物活性. 这一结果不仅为基因工程生产胰高血糖素打下基础, 亦为研制胰高血糖素的拮抗剂以及其他多肽的基因工程研究提供了新的思路. 闻崇炜 王佐仁 杜鹏 甘人宝 朱尚权关键词:胰高血糖素 分泌表达 大肠杆菌 多肽激素 大肠杆菌耦合乙酸分离的过滤培养 被引量:16 2000年 A fed batch fermentation integrated with filtration process was proceeded in a synthetic medium with the use of a hollow fibre membrane filter.The activity of α A interferon reached 1.4×10 9u/L,which was increased 320% over that of a control process.The integrated process was then proceeded in the synthetic medium supplemented with yeast extract during the earlier stage.The addition of yeast extract not only reduced the accumulation of acetate,but also promoted the production of α A interferon.The maximum activity achieved 1.9×10 9 u/L during the fermentation,which was increased 480% over that of a normal process. 杜鹏 叶勤 俞俊棠关键词:乙酸 干扰素 大肠杆菌 E.COLI 制备重组人类胰高血糖素肽-1的方法 甘人宝 李载平 钱悦 杜鹏 冯宝山 丁红珍 范晋江 糖尿病是一种常见的内分泌、代谢紊乱导致全身症状的慢性疾病,对人类健康危害极大,因此研制副反应低,给药方便,效果显著和价格低廉的糖尿病药物已显得刻不容缓。人类胰高血糖素肽-1(human glucagon like pep...关键词: