杨安萍
- 作品数：2 被引量：0H指数：0
- 供职机构：哈尔滨医科大学附属第二医院更多>>
- 发文基金：黑龙江省科技厅青年科学基金黑龙江省青年科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 大鼠海马CA1脑区慢病毒载体注射方法学改进
- 2009年
- 目的:采用电极埋管的改进方式进行大鼠海马CA1脑区慢病毒载体注射的方法,并检测此方法的有效性和安全性。方法:45只健康雄性SD大鼠随机分为假手术组(SH)、生理盐水组(NS)和eGFP慢病毒注射组(eGFP),每组15只。所有实验大鼠在脑立体定位仪下定位海马CA1组织,采用电极埋管的改进方式进行慢病毒注射。NS组给予生理盐水(2μL)、eGFP组给予慢病毒(2μL),SH组只实行手术操作。注射病毒7、14和30 d后,分别处死大鼠并进行全脑冰冻切片,荧光显微镜观察eGFP慢病毒注射组的GFP绿色荧光表达水平和脑区分布。同时取相邻冰冻切片进行Nissl染色,检测eGFP慢病毒注射组的海马CA1脑区的损伤程度。结果:eGFP慢病毒注射成年大鼠海马CA1脑区7、14和30 d后,均可以成功检测到GFP在海马CA1脑区的表达,且表达水平和脑区分布均保持稳定,不随注射后切片时间的变化而变化。Nissl染色结果显示,神经元存活数目在eGFP慢病毒注射组与假手术组、生理盐水组比较均无显著性差异(P>0.05)。结论:成功建立了电极埋管的方式向大鼠海马脑区注射慢病毒的方法,并可在海马CA1脑区高水平表达其所携带的目的基因,为进一步的在成年大鼠海马CA1脑区进行基因操作奠定了基础。
- 张惊宇杨安萍李金星刘路然赵虹杨子超
- 关键词：慢病毒载体海马绿色荧光蛋白
- 携带大鼠脑源性神经营养因子(BDNF)基因重组慢病毒载体的构建及体外表达检测
- 2009年
- 目的构建携带大鼠脑源性神经营养因子(BDNF)基因重组慢病毒载体,并检测其体外表达目的基因的能力。方法应用基因克隆技术将大鼠BDNF基因克隆入慢病毒载体pFUW中,经过PCR、酶切和测序鉴定后,与包装质粒共转染293T细胞,制备并收集携带BDNF基因的慢病毒,重组病毒感染体外培养Hela细胞,利用实时定量PCR、蛋白质免疫印迹方法检测BDNF的表达情况,观察病毒转染效果。结果PCR、酶切和测序鉴定,成功克隆了pFUW-BDNF重组子。所包装的重组慢病毒对Hela细胞的感染效率>90%,实时定量PCR、蛋白质免疫印迹方法可以检测到重组慢病毒感染Hela细胞后能高水平表达BDNF。结论成功构建了携带BDNF基因慢重组病毒载体,并可在体外高水平表达其所携带的目的基因,为将其进一步应用于神经系统损伤性疾病的治疗研究奠定了方法学基础。
- 张惊宇杨安萍李金星刘路然赵虹杨子超
- 关键词：BDNF慢病毒载体基因治疗
