林俊堂
- 作品数：154 被引量：122H指数：5
- 供职机构：新乡医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金河南省教育厅科学技术研究重点项目河南省科技攻关计划更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生文化科学农业科学更多>>
- 鸡胚发育早期Sonic Hedgehog在脊髓中的异位表达对形态结构及相关蛋白表达的影响
- 2014年
- 该文主要分析音猬因子（Sonic Hedgehog,Shh）在鸡胚发育过程中对脊髓形态结构的形成和相关蛋白表达的影响。实验过程采用鸡胚带壳开窗培养技术,待胚胎发育至第3 d,将2μg/μL pCAGGS-Shh和0.25μg/μL pCAGGS-GFP质粒以1：8浓度混合,将0.1~0.5μL混合液准确地注射到神经管,在电压18 V、每次脉冲60 ms、间隔100 ms、电脉冲6次的条件下进行定时定位活体电转基因,电转后6 h开始到5 d分别收集胚胎,冰冻切片,采用荧光免疫组化和DAPI染色观察组织形态结构及相关蛋白的变化。结果表明,电转后6 h便可以观察到GFP的表达,24 h时Shh在脊髓中的异位表达能够诱导转录因子Nkx2.2（NK2 homeobox 2）的表达,并且能够抑制Pax7（paired-type homeobox 7）的表达,而Shh异位表达时脊髓的结构发生了明显的改变;说明Shh作为脊髓发育过程重要的信号分子,其异位表达能够诱导和抑制相关蛋白的表达,影响脊髓正常发育。
- 李小英杨慈清王聪睿付苏雷李晗林俊堂
- 关键词：鸡胚脊髓
- 大鼠热激因子结合蛋白1全长cDNA克隆与分析被引量：3
- 2004年
- 热激因子结合蛋白1(heatshockfactorbindingprotein1,HSBP1)是一种新发现的高保守、低分子质量、定位于核中的一种转录因子,它可抑制HSF1的转录域活性,并协同HSP70负调控热激反应。在哺乳动物中仅有人与小鼠的HSBP1cDNA序列被克隆,大鼠中的HSBP1尚未有人报道,我们根据人与小鼠的HSBP1氨基酸的N端和C端保守序列设计了简并引物,采用RT PCR方法从大鼠神经胶质瘤细胞株中克隆大鼠HSBP1的片段,然后采用Southern印迹方法从建立的神经胶质瘤细胞的cDNA文库中调取了它的cDNA全长序列,递交给GenBank,获登陆号为AF522937。并借助于大鼠基因组测序成果,将大鼠HSBP1基因定位于19q12,发现HSBP1基因有3个内含子和4个外显子,其中外显子1和外显子4之间距离5829bp。且对HSBP1的Unigene检索显示HSBP1广泛存在于大鼠各组织、器官中,揭示HSBP1在生理活动中起着非常重要的作用。根据已发表的其他物种的HSBP1的氨基酸序列用DNAman软件做了它的同源关系分析,结果显示进化关系较近的物种中,HSBP1氨基酸序列的相似性与其从形态解剖所得的系统进化关系是一致的。
- 张会勇李玉昌林俊堂徐存拴
- 关键词：RT-PCRCDNA文库
- 用精神分裂症患者皮肤成纤维细胞构建诱导性多潜能干细胞模型被引量：1
- 2016年
- 目的将精神分裂症患者来源的人皮肤成纤维细胞(HDF)重编程为诱导性多潜能干细胞(i PSCs),为精神分裂症患者建立i PSCs模型。方法采用聚合酶链反应技术从p EP4EO2SEM2K质粒上扩增2条目的片段:OCT4-IRES2-SOX2和C-MYC-IRES2-KLF4,将其连接到慢病毒载体p LVX-IRES-m Cherry上。构建成功的质粒通过磷酸钙转染法转染293T细胞包装病毒,检测病毒活力后侵染患者皮肤成纤维细胞,将其去分化为诱导性多潜能干细胞,并检测其多能性。结果测序表明重组慢病毒载体构建成功,并制备了具有良好侵染活力的重组慢病毒。将含4种重编程因子的慢病毒颗粒侵染1例精神分裂症患者的HDF后,HDF的形态逐步发生变化,最终形成典型的i PSCs克隆。结论成功将1例精神分裂症患者成纤维细胞重编程为iPSCs,为以后建立更多精神分裂症疾病模型奠定基础。
- 任佩佩樊晋宇郭鑫鑫原志庆林俊堂丰慧根
- 关键词：诱导性多潜能干细胞精神分裂症人皮肤成纤维细胞细胞模型
- 常氏肝癌细胞cDNA文库的构建及ADAMs相关基因的免疫筛选与序列分析被引量：4
- 2004年
- 抽提常氏肝癌细胞的总RNA ,以oligo(dT)为引物 ,通过两次转换模板 ,采用LD PCR合成全长cDNA ,在cDNA两端引入SfiⅠ的酶切位点。以λTriplEX2为载体经过包装后构建了常氏肝癌细胞cDNA表达文库。以ADAMs通用抗体 ,用免疫筛选技术从常氏肝癌cDNA文库中筛选出 2 2个阳性克隆 ,经测序分析和BLAST检索 ,证实其中一个为新基因 ,部分区域具有蛋白酶的功能 ,对该基因进行了GenBank登录 ,获注册号为AY0 780 70。
- 林俊堂李玉昌张会勇徐存拴
- 关键词：CDNA文库免疫筛选基因克隆
- 一种小鼠灌注固定装置及其灌注固定方法
- 本发明公开了一种小鼠灌注固定装置及其灌注固定方法。本发明所述的小鼠灌注固定装置，包括一固定装置和一输液装置；所述的固定装置为有机玻璃制成的透明长方状盒体，并设有操作台、器械盒和收集盒；所述的输液装置设有输液瓶、输液泵、输...
- 林俊堂乔梁宋莹杨记超刘彦礼管丽红李小英杨慈清仝曼李高举李岩岩
- 文献传递
- C1型尼曼-匹克氏症小鼠的肾脏功能及病理变化被引量：1
- 2016年
- 目的:探讨Npc1基因突变小鼠肾脏功能及病理生理的变化,为C1型尼曼-匹克氏症(NPC1)患者临床上药物的使用及肾功能的维持提供理论依据。方法:用PCR法确定小鼠基因型;选取出生后第60天(P60)的野生型NCPC1(Npc1^(+/+))和突变型NCPC1(Npc1^(-/-))小鼠,检测血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)和乳酸脱氢酶(LDH)的活性及尿素(Urea)、尿酸(UA)和肌酐(Cr)的含量来评价Npc1-/-小鼠的肝肾功能变化;进一步常规冷冻切片后通过β-半乳糖苷酶染色及Masson染色来分别评价Npc1^(-/-)小鼠肾脏衰老及纤维化情况。结果:与P60的Npc1^(+/+)小鼠相比,Npc1^(-/-)小鼠的体重和肾脏重量显著降低(P<0.01);肝肾功能明显减退:ALT、AST及LDH活性显著升高(P<0.05),Urea、UA及Cr的含量显著增加(P<0.05);冷冻切片染色结果表明肾脏组织衰老明显(P<0.01),纤维化程度显著增强(P<0.01)。结论:Npc1基因突变导致的脂质异常代谢可加速肾间质纤维化,促使肾脏衰老,最终导致肾功能减退。
- 刘彦礼乔梁张金珠杨芬闫岩闫欣林俊堂
- 关键词：肾脏纤维化
- 短间隔连续部分肝切除(SISPH)中ADAMs基因表达差异分析被引量：2
- 2001年
- 用ADAMs通用引物进行RT PCR ,以检测短间隔连续部分肝切除 ( 4 3 6 3 6 3 6SPH)中不同恢复时间ADAMs基因转录情况。结果表明 :( 1)ADAMs基因转录无个体和性别差异 ,也无肝再生恢复期依赖性 ;( 2 )PCR产物克隆、测序证实 ,肝脏中有MDC9同源序列存在 ;( 3 )用MDC9特异性引物PCR检测表明 ,MDC9在正常和不同恢复时期肝脏中均有一定水平转录 。
- 梁卫红林俊堂李玉昌徐存拴
- 关键词：肝再生RTPCRADAMS
- IL-2和MART-1双基因共表达重组载体及其制备方法和应用
- 本发明公开了一种IL-2和MART-1双基因共表达重组载体，其沿载体转录方向依次连接有IL-2基因、IRES序列和MART-1基因，或者沿载体转录方向依次连接有MART-1基因、IRES序列和IL-2基因；所述IL-2基...
- 栗炳南丰慧根左百乐林俊堂曹毓林
- 文献传递
- C1型尼曼-匹克症小鼠嗅球细胞的病理变化被引量：1
- 2016年
- 目的通过观察NPC1基因突变型小鼠嗅球的形态学变化,探讨C1型尼曼-匹克症对嗅觉系统的影响。方法提取小鼠尾部组织DNA进行聚合酶链反应检测种系基因型;选取出生后第30天的野生型和突变型小鼠,采用免疫组织化学方法观察对比嗅球系统中神经元轴突的形态结构和髓鞘形成,以及神经丝蛋白(SMI31)和髓鞘碱性蛋白(MBP)的表达情况;TUNEL方法检测嗅球神经细胞的凋亡情况。结果 NPC1基因突变型小鼠嗅球中NPC1蛋白表达明显降低,神经细胞凋亡增加;SMI31免疫荧光显示嗅球内SMI31发生变性聚集,导致神经纤维缠结;同时,MBP蛋白表达量明显降低,髓鞘形成受到抑制。结论 NPC1基因突变能够引起嗅球神经细胞发生病理性变化,影响嗅觉系统的正常功能。
- 闫欣乔梁杨恩慧林俊堂
- 关键词：嗅觉障碍小鼠
- 一种提高UCMSC肺部输送效率的方法
- 本发明属于间充质干细胞的输送技术领域，具体涉及一种提高UCMSC细胞肺部输送效率的方法。具体技术方案为：采用气管滴注和静脉注射联合输送的方法向肺部输送UCMSC细胞。该提高UCMSC细胞肺部输送效率的方法用于非疾病的诊断...
- 林俊堂朱鑫星连杰曹毓琳刘彦礼
