樊春波
- 作品数：6 被引量：11H指数：2
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- 抗PeroxiredoxinⅠ肺腺癌噬菌体抗体的筛选及其在荷瘤裸鼠体内的分布
- 2010年
- 目的:通过对已构建的肺腺癌相关人源单链抗体库进行筛选,得到抗过氧化物酶PeroxiredoxinⅠ(PrxⅠ)肺腺癌单链抗体,评价抗体在动物模型体内分布及靶向显像作用。方法:PCR法检测大肠杆菌TG1中单链抗体single-chain variable fragment(scFv)基因插入率;凝胶电泳鉴定SfiⅠ和NotⅠ双酶切质粒结果;以肺腺癌细胞株A549和在肺癌中高表达的抗氧化蛋白PrxⅠ为靶抗原,对抗体库进行富集筛选。阳性克隆用IPTG诱导表达并检测。放射性核素131I标记纯化抗体,进行荷瘤裸鼠体内分布及SPECT放射免疫显像研究。结果:scFv基因插入率为77%(23/30),双酶切鉴定证实目的条带。通过亲和筛选,肺腺癌单链抗体得到富集,收获率逐轮提高,第6轮是第1轮的180倍。选取10个克隆经ELISA法检测,其中6个克隆与A549细胞呈阳性反应,阳性率60%(6/10)。SDS-PAGE及ELISA检测证实得到人源抗PrxⅠ肺腺癌单链抗体。竞争ELISA显示抗体能有效结合A549细胞。核素标记抗体的放射化学纯度为(95.6±3.7)%,比活度为(2.8±0.2)TBq·g-1。体内分布研究显示抗体与肺腺癌组织有效结合。尾静脉注射48h后,瘤/血和瘤/肌肉放射性比值均达最大值,分别为(4.06±0.13)和(5.17±0.97)%ID·g-1。SPECT示抗体与肿瘤有效结合。抗体注射后48h的T/NT值(3.73±0.20)明显高于12h(1.26±0.15)、24h(2.18±0.16)和72h(2.85±0.18)(均P<0.01)。结论:利用肺腺癌细胞A549和PrxⅠ为靶抗原,从噬菌体抗体库中筛选获得具有较高特异性的抗PrxⅠ肺腺癌单链抗体。在体内抗体能与肺腺癌组织特异性结合。
- 李淑杰罗弋庞华李少林樊春波王洁
- 关键词：PEROXIREDOXIN放射免疫显像腺瘤病
- 抗人肺癌单链抗体噬菌体库的构建及特异性单链抗体的鉴定被引量：2
- 2009年
- 目的构建人源噬菌体抗体库,并从中筛选出抗肺癌人源单链抗体。方法提取肺癌患者癌旁淋巴结组织,通过RT-PCR扩增出重链可变区基因(VH)和轻链可变区基因(VL),再经剪切-重叠-延伸PCR(SOE-PCR)将VH和VL连接得到单链抗体(ScFv)。将双酶切后的ScFv基因片段克隆入噬菌体表达载体pCANTAB5E,得到初级噬菌体抗体库。以肺腺癌细胞株A549为抗原对抗体库进行4轮筛选富集,鉴定抗体库性能。将得到的阳性克隆用IPTG诱导表达并进行检测。结果成功构建噬菌体单链抗体库。经筛选富集,噬菌体收获率得到增加,第4轮是第1轮的115倍。随机选取10个克隆,通过ELISA法检测到其中7个与A549细胞呈阳性反应,阳性率为70%。SDS-PAGE及ELISA检测证实得到人源抗肺癌单链抗体。结论成功构建人源单链抗体噬菌体库,从中获得具有较高特异性的抗人肺癌单链抗体。
- 罗弋庞华李少林曹辉李淑杰王树斌樊春波
- 关键词：单链抗体肺腺癌
- 抗CCR7单链抗体的筛选及初步鉴定被引量：1
- 2010年
- 目的从噬菌体抗体库中筛选抗CCR7单链融合抗体,并对其生物学特性进行初步检测。方法PCR检测大肠杆菌中ScFv基因插入率;琼脂糖凝胶电泳鉴定SfiI和NotI双酶切质粒的结果;分别以乳腺癌细胞及CCR7多肽片段为靶抗原对抗体库进行4轮和3轮筛选富集。将阳性克隆转化E.coliHB2151进行可溶表达。抗体亲和层析纯化后,经Western blot鉴定,通过ELISA法检测可溶性ScFv抗体的免疫活性。免疫细胞化学和放射免疫显像鉴定scFv抗体与乳腺癌细胞结合的特异性。结果ScFv基因插入率为90%(18/20),双酶切鉴定检测到目的条带。经4轮细胞筛选,3轮抗原筛选抗CCR7抗原的噬菌体抗体得到了明显富集,在E.coliHB2151中实现可溶表达。Western blot结果显示获得抗体相对分子质量为34ku左右。免疫细胞化学检测与放射免疫显像均证实单链抗体与表达CCR7的乳腺癌细胞MDA-MB-435s特异性结合。结论成功从噬菌体抗体库中筛选获得具有较高特异性的抗CCR7单链抗体。抗体在体内体外均与肿瘤细胞表达特异抗原结合。
- 樊春波李少林彭志平罗弋曹辉王洁
- 关键词：噬菌体抗体库单链抗体CCR7淋巴结转移抗体筛选
- 人源噬菌体抗体对Peroxiredoxin Ⅰ高表达肺腺癌细胞增殖的抑制作用被引量：5
- 2009年
- 背景与目的:研究表明过氧化物酶Peroxiredoxin Ⅰ(Prx Ⅰ)与癌症的发展有密切关系。我们已通过噬菌体展示技术构建了肺腺癌相关的人源单链抗体库。本研究对该库进行筛选,得到抗Prx Ⅰ肺腺癌单链抗体,并检测其对肺腺癌细胞A549增殖的抑制作用。方法:PCR法检测TG1中scFv基因插入率,1%琼脂糖凝胶电泳鉴定Sfi Ⅰ和Not Ⅰ双酶切质粒的结果,以A549细胞及在肺癌中高表达的抗氧化蛋白Prx Ⅰ为靶抗原分别对抗体库进行3轮筛选富集。将阳性克隆用IPTG诱导表达并进行检测。放射性核素计数法测定细胞单链抗体内摄水平,MTT法及流式细胞术检测单链抗体对A549细胞的增殖抑制和凋亡情况,免疫印迹法检测抗体作用A549细胞后Prx Ⅰ的表达水平。结果:scFv基因插入率为77%,双酶切鉴定检测到目的条带。在亲和筛选过程中,肺腺癌单链抗体得到富集,收获率逐轮提高,第6轮为第1轮的180倍。ELISA法检测到在随机选取的10个克隆中,有6个与A549细胞呈阳性反应,阳性率60%。SDS-PAGE及ELISA检测证实得到人源抗PrxI肺腺癌单链抗体。被A549细胞内摄的单链抗体介导了细胞的凋亡以及细胞内Prx Ⅰ蛋白表达水平的下降。结论:从噬菌体抗体库中筛选获得具有较高特异性的抗Prx Ⅰ肺腺癌单链抗体。单链抗体与肺腺癌细胞有特异性亲和力,并能有效抑制其增殖。
- 罗弋庞华李淑杰曹辉李少林樊春波
- 关键词：肺腺癌噬菌体抗体库单链抗体PEROXIREDOXINI增殖抑制
- 全人源抗CCR7噬菌体单链抗体的筛选及初步鉴定
- 目的:从噬菌体抗体库中筛选抗CCR7单链融合抗体,并对其性能进行初步检测。
方法:PCR检测大肠杆菌中ScFv基因插入率;1/%琼脂糖凝胶电泳鉴定Sfi I和Not I双酶切质粒的结果;分别以乳腺癌细胞MDA...
- 樊春波
- 关键词：噬菌体抗体库单链抗体CCR7
- 文献传递
- 人源抗PeroxiredoxinⅠ肺腺癌噬菌体抗体的制备及鉴定被引量：3
- 2010年
- 目的构建人源噬菌体抗体库,从中筛选出抗PeroxiredoxinⅠ(PrxⅠ)肺腺癌人源单链抗体。方法提取肺癌患者癌旁淋巴结组织,通过RT-PCR扩增出重链可变区基因(VH)和轻链可变区基因(VL),再经剪切-重叠-延伸PCR(SOE-PCR)将VH和VL连接得到单链抗体(ScFv);将双酶切后的ScFv基因片段克隆入噬菌体表达载体pCANTAB5E,得到初级噬菌体抗体库。PCR检测TG1中ScFv基因插入率;1%琼脂糖凝胶电泳鉴定SfiI和NotI双酶切质粒的结果;以肺腺癌细胞株D549及在肺癌中高表达的抗氧化蛋白PrxI为靶抗原对抗体库进行筛选富集。将阳性克隆用IPTG诱导表达。用SDS-PAGE及Westernblotting鉴定该抗体;用ELISA法、免疫细胞化学法鉴定该抗体与人肺腺癌细胞的结合特异性。结果成功构建噬菌体单链抗体库。ScFv基因插入率为77%,双酶切鉴定检测到目的条带。在亲和筛选过程中,肺癌单链抗体得到富集,收获率逐轮提高,第6轮为第1轮的180倍。随机选取10个克隆,通过ELISA法检测到其中6个与A549细胞呈阳性反应,阳性率为60%。SDS-PAGE及Westernblotting证实抗体得到可溶表达。ELISA及免疫细胞化学检测表明抗体能相对特异地与肺腺癌细胞结合。结论成功构建肺腺癌人源噬菌体抗体库,并从中筛选得到能相对特异地与高表达PrxI的肺腺癌细胞D549结合的单链抗体。
- 罗弋庞华李淑杰曹辉李少林樊春波王洁
- 关键词：噬菌体抗体库单链抗体肺腺癌
