王园园
- 作品数：4 被引量：12H指数：3
- 供职机构：中国疾病预防控制中心传染病预防控制所更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治专项更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 恙虫病东方体Karp株56-kDa外膜抗原基因片段的原核表达及免疫原性研究被引量：1
- 2012年
- 目的探讨恙虫病东方体56-kDa蛋白在大肠埃希菌中的表达及作为诊断性抗原的可行性。方法用PCR扩增恙虫病东方体Karp菌株编码56-kDa蛋白长约1 100bp的DNA,克隆至表达载体pET30a(+)。表达产物经SDS-PAGE、质谱分析及western blot鉴定分析。重组蛋白质纯化后作为包被抗原,用方阵实验确定最佳浓度包被,ELISA法检测其与立克次体目16种成员及10种致病菌阳性血清的反应性。用此重组蛋白质免疫小鼠后制备抗血清,分别用ELISA及间接免疫荧光法(IFA)检测抗血清的效价。结果重组质粒经PCR及测序分析证明,56-kDa外膜抗原的基因片段以正确的读码框连入到pET30a(+)质粒载体中,SDS-PAGE结果表明重组蛋白质在约46-kDa处有表达的目的条带,western blot分析显示该条带可与1∶1 600稀释的兔抗Karp血清反应,证实其具有免疫活性。质谱分析鉴定该蛋白质为恙虫病东方体56-kDa蛋白;方阵滴定确定选择抗原的最佳稀释度为1∶1 600,特异性分析结果表明,重组蛋白质除与查菲埃立克体、嗜吞噬细胞无形体及五日热巴尔通体存在弱交叉反应外,与其他细菌均无交叉反应。IFA及ELISA检测表明抗血清效价可达1∶1 600。结论构建的重组蛋白质可以作为恙虫病东方体快速诊断的抗原。
- 王园园陈强于强张丽娟
- 关键词：恙虫病东方体原核表达免疫原性
- 人粒细胞无形体致病机制研究进展被引量：3
- 2010年
- 人粒细胞无形体（Anaplasma phagocytophilum）是新发蜱传病原体,主要引起人无形体病.人粒细胞无形体感染以中性粒细胞为主,其次为嗜酸性粒细胞,急性期90%的粒细胞受到感染.病原体在宿主细胞内聚集,被囊膜包裹成小体,称为包涵体[1].该病主要表现发热、头痛、精神萎靡、肌痛等感冒样症状,部分患者有关节痛、胃肠道（恶心、呕吐和腹泻）、呼吸道、肝脏、中枢神经等症状,很少出现皮疹.实验室检测结果显示血小板和白细胞减少、贫血、肝转氨酶升高[1].
- 王园园张丽娟
- 关键词：无形体致病机制
- 斑疹伤寒群立克次体groEL基因荧光定量聚合酶链反应方法的建立及临床病例检测分析被引量：4
- 2011年
- 目的基于斑疹伤寒群立克次体热休克蛋白gro EL基因,建立一种敏感、特异、快速检测斑疹伤寒群立克次体荧光定量PCR技术。方法通过GenBank分析比较斑疹伤寒群立克次体与其他立克次体成员groEL基因,选择斑疹伤寒群立克次体两个种即普氏立克次体及莫氏立克次体保守序列设计MGB探针及引物并进行方法学评估。同时用本法及普通PCR技术对临床收集的26例可疑斑疹伤寒患者急性期血液DNA进行检测分析。结果本研究建立的方法,除普氏立克次体及莫氏立克次体检出阳性外,其他立克次体成员检测阴性。该方法最小检出浓度为102copies/μl。标准曲线各浓度点Ct值批内、批间平均变异系数-CV%分别为1.41%和2.66%。26例可疑病例标本2例检测阳性,血液标本groEL基因分别定量为103和102copies/μl,并得到血清学结果证实。结论建立的斑疹伤寒群立克次体荧光定量PCR法具有快速、敏感和特异的优点,可用于斑疹伤寒患者标本的检测及疾病监测工作中。
- 王园园梁长威赫兢王誓闻禹惠兰张丽娟
- 关键词：立克次体斑疹伤寒荧光定量PCR
- 普通TaqMan探针及raqMan MGB探针real-time PCR检测无形体msp-2基因方法的建立与比较被引量：4
- 2011年
- 目的建立敏感、特异、定量real-time PCR方法,用于无形体病早期诊断及立克次体病鉴别诊断。方法通过GenBank Blast比较分析,选择世界各地39株无形体,以msp-2特异基因保守区设计普通TaqMan探针及TaqManMGB探针并比较分析。结果普通TaqMan探针及TaqMan MGB探针2种方法均具有良好的特异性,除无形体外,遗传亲缘关系较近的其他立克次体目成员(17种)均扩增阴性。临床上其他8种常见致病菌呈阴性扩增。灵敏性评估结果发现普通TaqMan探针及TaqMan MGB探针最低检出浓度分别为102copies/μl及10copies/μl。两种探针方法均具有较好的重复性。结论本研究建立了敏感、特异的无形体早期诊断及立克次体鉴别诊断的荧光定量PCR技术,TaqMan MGB探针灵敏性高于普通TaqMan探针。
- 王誓闻张丽娟王园园禹惠兰梁长威陈强于强
- 关键词：无形体荧光定量PCRTAQMAN
