王文博
- 作品数：18 被引量：18H指数：3
- 供职机构：第二军医大学更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- 丙型肝炎病毒F蛋白在病毒复制和致病中的作用被引量：6
- 2011年
- 丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus,HCV)属于黄病毒科,是有包膜的单正链RNA病毒。HCV基因组约有9 600个碱基,编码的单一开放读码框(Open reading frame,ORF)翻译出约3 000个氨基酸残基的多聚蛋白前体,在宿主细胞及病毒蛋白酶的作用下,剪切成至少10种结构蛋白和非结构蛋白。近年来,一种新的病毒蛋白在一些实验室相继被发现,称为读码框移位蛋白(Alternative reading frame protein,ARFP),或称为F蛋白(Frameshift protein),也有学者称之为Core+1蛋白。F蛋白是由核心基因读码框移位产生的,虽然从发现至今已有10余年,但其生物学功能仍不明确,对其在肝脏疾病和肝细胞癌的发生发展中的作用及其对HCV复制和感染的影响尚有争议。本文就F蛋白的发现、产生机制、抗原性、生化特性及生物学功能等作一综述。
- 王文博任浩
- 关键词：丙型肝炎病毒F蛋白病毒复制毒力
- 细胞膜胆固醇对于人肠道病毒71型细胞入侵的影响及其机制研究
- 朱勇喆吴达革任浩王文徐庆强曹明媚王文博赵平戚中田
- 丙型肝炎病毒高变区1中存在介导病毒入侵和免疫逃避的三个不同结构域
- 关默朱勇喆彭浩然Laure Aurelian赵平戚中田王文博刘小青童一民刘媛任浩朱诗应Jean DubuissonThomas F.Baumert
- 慢性HCV感染者血清中的包膜蛋白抗体主要针对于包膜E2蛋白中的构象表位
- <正>丙型肝炎病毒(HCV)感染是威胁人类健康的重要因素,美欧新上市的蛋白酶抑制剂、RNA聚合酶抑制剂等直接抗病毒(DAA)药物的疗效相比标准疗法有了显著提高,但价格昂贵,且在相当长时间内难以在发展中国家上市。与药物研究...
- 王文博彭浩然唐紫薇戚中田赵平
- 文献传递
- DNA免疫有效诱导H1N1中和抗体的产生
- 刘小青王跃赵平戚中田刘嫒方静罗源关默朱勇喆王文博陈炜徐庆强
- rpoB作为蜡样芽胞杆菌群快速检测的标志基因的实验研究被引量：4
- 2012年
- 目的探讨常规PCR和实时荧光定量PCR(Q-PCR)方法检测蜡样芽胞杆菌群rpoB基因的特异性和敏感性。方法提取蜡样芽胞杆菌群和其他各种对照细菌的基因组DNA,合成蜡样芽胞杆菌群rpoB基因扩增引物,采用常规PCR和SYBRgreen实时定量PCR两种方法扩增rpoB基因片段,并将PCR产物克隆到pMD18-T载体后进行DNA测序。结果常规PCR和Q-PCR均能扩增出蜡样芽胞杆菌群rpoB基因的174bpDNA片段,而各种对照菌株均未见扩增。序列比对发现蜡样芽胞杆菌群细菌在该片段中存在5处核苷酸的不同,差异率为2.88%。以炭疽芽胞杆菌基因组DNA系列稀释作为扩增模板显示常规PCR最小检出量为3.42pg,Q-PCR的敏感性达到171fg,3次重复实验显示Q-PCR检测rpoB基因的灵敏度为(3.32×101±7.45×100)拷贝。结论以rpoB基因为检测靶基因的Q-PCR方法具有高度的特异性和良好的敏感性,能实现对蜡样芽胞杆菌群快速而准确的检测。
- 朱诗应何胜菲王文博赵平任浩戚中田
- 关键词：RPOB基因实时定量PCR
- 丙型肝炎病毒F蛋白缺失对病毒复制及感染性的影响被引量：2
- 2012年
- 探索了F蛋白缺失及核心蛋白(Core)二级结构改变对丙型肝炎病毒(HCV)复制和感染性的影响.利用定点突变方法,将J6JFH1的核心基因引进5个终止密码子以中断F蛋白的表达,从而获得F蛋白缺失的病毒复制子J6JFH1/ΔF.体外制备RNA转录体,并电穿孔转染Huh7.5.1细胞,采用免疫荧光、实时荧光定量PCR方法以及病毒感染等方法,观察F蛋白缺失对病毒复制、蛋白质表达及转染细胞上清感染性病毒颗粒产生的影响.在此基础上,构建5个单一突变病毒体,对HCV核心蛋白进行二级结构分析,观察核心蛋白二级结构对HCV复制和翻译的影响.结果显示,转染48 h后,J6JFH1/ΔF与野生型J6JFH1相比,J6JFH1/ΔF转染阳性细胞数明显降低,细胞内HCV RNA水平降低约95%,J6JFH1/ΔF转染后不同时间点细胞上清中HCV RNA拷贝数和病毒颗粒也明显降低.5个单一突变体不影响核心基因二级结构,病毒在细胞内复制和感染性与野生型水平一致.J6JFH1/ΔF所产生的改变可能是由于5处突变导致核心基因二级结构改变而造成的.结果说明,HCV F蛋白缺失不影响病毒的复制翻译及病毒颗粒的包装释放,核心蛋白二级结构的改变对病毒复制和翻译则产生较大影响.
- 王文博许刚王岩陶清源任浩戚中田
- 关键词：丙型肝炎病毒F蛋白核心蛋白病毒复制
- 献血者HCV RNA实时荧光定量PCR方法的建立被引量：4
- 2012年
- 目的建立快速检测献血者中丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)感染的方法。方法利用体外转录制备的HCV RNA转录体进行病毒RNA抽提方法及抽提效率的比较;将RNA转录体与正常血清进行不同数目的混合,对最佳混合标本数进行了摸索;建立HCV荧光定量PCR方法(fluorescence quantitative PCR,FQ-PCR),并对献血者进行混合标本HCV核酸检测。结果确定了比较理想的病毒RNA抽提方法;用于HCV核酸检测的混合标本数为24例;建立的荧光定量PCR方法能最低检测出10个copies/ml;采取24例混合血标本方法,FQ-PCR检测HCV RNA,576例ELISA检测HCV阴性的献血者未检测出HCV RNA。结论初步建立了献血者HCV感染的混合标本荧光定量PCR检测方法。
- 王文博许刚查占山孙博钱宝华任浩戚中田
- 关键词：荧光定量PCR献血者HCV输血安全
- 聚集性丙型肝炎病毒感染者外周血病毒载量与肝功能以及病毒包膜蛋白抗体水平关系的研究
- 2017年
- HCV为黄病毒科成员，是有包膜的单股正链RNA病毒，主要经血液传播，引起人类肝炎、肝硬化和肝细胞癌等疾病。HCV感染是严重的全球性公共卫生问题，目前全球HCV感染者达1．7亿，每年新发丙型肝炎患者30万～40万。我国HCV感染者约有1000万，近10年来呈逐年上升趋势。
- 王世杰冯悦彭浩然夏雪山王文博张龙严戚中田赵平
- 关键词：病毒包膜蛋白病毒感染者抗体水平病毒载量肝功能聚集性
- 丙型肝炎病毒核心基因置换对病毒复制和感染影响的初步研究
- 2010年
- 本文旨在探讨丙型肝炎病毒(HCV)核心(core)蛋白在病毒复制和感染中的作用,采取基因置换的方法,用HCV1b型J4株的核心基因平行置换2a型J6JFH1株的核心区,构建了FL-J6JFH/J4core嵌合复制子。体外制备RNA转录体,以脂质体介导转染Huh7.5.1肝癌细胞。转染后第5天,用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测细胞内HCVRNA水平。第8天,以丙型肝炎患者血清为一抗,免疫荧光法(IFA)检测转染细胞内HCV蛋白表达。同时收集转染后第8天的细胞上清液,感染naveHuh7.5.1肝癌细胞,72h后IFA检测HCV蛋白表达。结果显示,FL-J6JFH/J4core转染组第5天细胞内RNA水平与野生型FL-J6JFH1接近,无显著差异(n=4,P>0.05)。免疫荧光检测显示,FL-J6JFH/J4core转染细胞后第8天及其上清液感染的naveHuh7.5.1细胞的HCV阳性细胞数都低于野生型。本研究结果初步表明,HCV各株间核心基因的替换会影响HCV的蛋白翻译和感染性病毒颗粒的产生与释放。
- 黎刚曹明媚王文博任浩戚中田
- 关键词：丙型肝炎病毒核心基因
