- pMD18-T作为A组轮状病毒VP7基因克隆载体的研究
- 2010年
- 目的:利用RT-PCR法从A组轮状病毒扩增基因片段VP7,再将产物重组于大肠杆菌pMD18-T载体,探讨pMD18-T作为A组轮状病毒VP7基因克隆载体的应用。方法:提取A组轮状病毒总RNA,通过RT-PCR扩增,获得目的基因片段VP7,进行分离纯化和回收,最后把纯化的VP7基因与pMD18-T载体进行连接,进行质粒抽提与鉴定。结果:成功将VP7基因连接到pMD18-T载体,转化感受态菌(DH5α),通过蓝白斑筛选得到DNA阳性重组子(载体+VP7基因片段),经DNA测序鉴定正确。结论:成构建功A组轮状病毒外壳蛋白VP7基因克隆载体,为进一步获得大量VP7基因以及研究和开发轮状病毒基因工程疫苗奠定基础。
- 吴景华王海欣
- 关键词：A组轮状病毒VP7RT-PCR
- 头孢他啶联合左旋氧氟沙星对铜绿假单胞菌耐药基因突变时间研究
- 2008年
- 目的 了解头孢他啶联合左旋氧氟沙星对铜绿假单胞菌耐药基因突变时间的变化，为临床经验性治疗和合理使用抗生素提供依据。方法 铜绿假单胞菌感染小鼠腹腔，采用琼脂稀释法测定单独应用头孢他啶和与左旋氧氟沙星联合使用对铜绿假单胞菌对头胞他啶的最低抑菌浓度（MIC）的变化，以此监测铜绿假单胞菌耐药突变时间，并通过分子生物学技术测定耐药基因产生情况。结果 单独应用头胞他啶对感染小鼠的铜绿假单胞菌耐药突变时间为120h，而头孢他啶联合左旋氧氟沙星对铜绿假单胞菌耐头胞他啶突变时间为168h，比头孢他啶单用延长了48h。结论联合用药可使耐药突变时间延长，有效地减少耐药菌产生。
- 吴景华刘丽娜崔秀凤王海欣
- 关键词：铜绿假单胞菌联合用药基因突变
- 唐山地区A组轮状病毒VP7基因差异分析
- 2010年
- 目的调查唐山地区A组轮状病毒感染现况。方法 RT-PCR鉴定唐山地区A组轮状病毒流行株型别,提取病毒总RNA,扩增目的基因片段VP7,分离纯化和回收,连接pMD18-T载体,转化质粒进行抽提与鉴定,同时进行基因测序。结果与标准病毒株进行基因差异分析。结果成功连接VP7基因与pMD18-T载体。基因测序分析结果 :唐山地区A组轮状病毒VP7基因与标准病毒株VP7基因序列符合率(同源性)为98.5%,其关键基因没有发生变异。结论唐山地区A组轮状病毒VP7基因的关键基因没有发生变异。
- 吴景华王海欣
- 关键词：A组轮状病毒VP7基因基因差异
- NF-κB信号通路在口腔鳞癌中的作用机制研究
- 李玉华王海欣陈继科张爱君张文茹
- 该研究主要通过临床收集病例标本无菌留取外周血后，分离淋巴细胞进行实时定量PCR及蛋白检测，同时应用免疫组化及免疫荧光临床肿瘤标本。传代细胞进行培养后检测相关基因及蛋白表达。构建动物模型，进行检测相关指标。结果显示，口腔癌...
- 关键词：
- 关键词：口腔鳞癌蛋白检测
- JSH-23对人舌鳞癌细胞Tca8113增殖和凋亡的影响被引量：1
- 2014年
- 目的探讨JSH-23阻断NF-κB信号通路后人舌鳞癌细胞Tca8113增殖和凋亡的情况及NF-κB信号通路相关凋亡抑制基因Bcl-2的表达变化,进而为临床舌鳞癌的干预和治疗寻找新的药物提供实验依据。方法采用体外培养人舌癌Tca8113细胞的方法,经不同浓度JSH-23作用不同时间后,用MTT法、RT-PCR及Western blot等方法检测JSH-23对Tca8113细胞增殖、凋亡的影响。采用SPSS13.0统计软件对数据进行方差分析及t检验。结果 Tca8113细胞经JSH-23作用后,增殖受到明显抑制,20μmol/L JSH-23作用48 h时,抑制作用最为显著,细胞生长抑制率达到60.45%。同时,Bcl-2凋亡抑制基因表达减少,与对照组相比,JSH-23作用48 h后,Bcl-2表达显著减少47.85%,差异有统计学意义(P<0.05);Bcl-2蛋白含量也明显减少,作用48 h后,Bcl-2蛋白表达相对光密度值分别下降50.93%(P<0.01)。结论 JSH-23作为NF-κB信号通路抑制剂,可以明显抑制人舌鳞癌细胞的增殖,同时显著下调Bcl-2基因及蛋白的表达。
- 李玉华王海欣吴景华陈继科
- 关键词：舌鳞癌TCA8113细胞NF-KAPPABCL-2
- 重组乳酸杆菌中A组轮状病毒VP7基因表达
- 2009年
- 目的扩增A组轮状病毒VP7基因,构建pEDM27/5-VP7重组质粒,转化乳酸杆菌并分析VP7蛋白的表达及活性。方法通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)获得目的基因VP7,纯化后与pEDM27/5载体进行连接,转化乳酸杆菌,乳糖进行诱导表达,分别于4,8,12 h后,采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白印迹技术(Western blot)对产物进行分析测定。结果A组轮状病毒经RT-PCR扩增后,1%琼脂糖电泳检测可见一条约1.0 kb的特异性条带,与预期目的基因(VP7基因)大小相符;SDS-PAGE和Western-blot杂交分析发现,经乳糖诱导4,8,12 h后分别可见一条分子量约为28 kD蛋白带表达,经扫描分析,诱导后表达蛋白分别约占菌体总蛋白的2.30%,5.12%,5.38%,且随着时间变化而持续表达增加,并能与抗A组轮状病毒VP7蛋白特异结合。结论重组乳酸杆菌持续表达免疫活性A组轮状病毒VP7蛋白,为进一步研究乳酸杆菌作为轮状病毒基因工程疫苗的表达载体提供了基础依据。
- 吴景华王海欣赵杰刘丽娜
- 关键词：A组轮状病毒乳酸杆菌基因转化
- 婴幼儿轮状病毒VP7基因表达产物生物学活性研究
- 2009年
- 目的诱导并分析克隆婴幼儿轮状病毒VP7基因表达及其生物学活性,为进一步构建轮状病毒基因工程疫苗奠定基础。方法扩增与纯化VP7基因,并与pEDM27/5载体进行连接,转化乳酸杆菌,乳糖进行诱导表达,用鼠抗Vp7蛋白单克隆抗体特异性结合表达的Vp7蛋白,并测定其生物学活性。结果成功扩增婴幼儿轮状病毒VP7基因,并转化pEDM27/5载体,通过蓝白斑筛选DNA阳性重组子,转化感受态乳酸杆菌,SDS-PAGE电泳可见乳糖诱导后一条分子量约为28kD的蛋白带高效表达,并能与抗婴幼儿轮状病毒VP7蛋白特异结合。结论重组乳酸杆菌表达的VP7蛋白具有良好的生物学活性;可用于研制开发轮状病毒基因工程疫苗。
- 吴景华王海欣赵杰董爱英
- 关键词：婴幼儿轮状病毒乳酸杆菌基因转化
- 甲胎蛋白下调肝癌细胞对奥沙利铂化疗敏感性的作用被引量：1
- 2016年
- 目的探讨甲胎蛋白（AFP）下调对肝癌细胞化疗敏感性的研究。方法选取2012-012014-12华北理工大学附属医院收治的经病理诊断确诊的HCC患者56例,采用电化学发光分析法检测肝癌患者化疗前血清中AFP水平;培养正常肝脏细胞L02细胞及肝癌细胞Hep G2细胞,提取细胞蛋白后Western blot检测L02细胞及Hep G2细胞中AFP的表达情况;siRNA技术敲低Hep G2细胞AFP的表达,Western blot检测奥沙利铂诱导敲低AFP表达肝癌细胞的凋亡情况;MTT法测定AFP对Hep G2细胞增殖的影响。结果肝癌患者经奥沙利铂介入化疗未缓解组血清中AFP的水平[（603.60±237.39）ng/ml]明显高于部分缓解组[（482.21±198.99）ng/ml]及完全缓解组[（358.25±143.22）ng/ml]（P〈0.05）。Western blot检测显示在正常肝脏细胞L02中AFP没有表达,而在Hep G2细胞中AFP明显高表达。肝癌细胞Hep G2成功阻断AFP表达后,加入奥沙利铂作用24 h后,Bcl-2的表达量较之Hep G2明显降低,Caspase-3的表达量显著升高;MTT检测显示干扰AFP表达的Hep G2细胞经奥沙利铂作用后的细胞增殖抑制率明显高于奥沙利铂作用后的Hep G2细胞[（71.06±11.22）%vs（50.56±9.98）%,P〈0.05]。结论 AFP可以显著下调肝癌细胞对奥沙利铂化疗的凋亡敏感性和增殖抑制率。
- 郭彬吴景华王海欣王志刚
- 关键词：甲胎蛋白肝癌化疗敏感性
- Toll样受体2在口腔癌中的表达机制研究
- 王海欣吴景华陈继科郭谊时建华
- 课题通过以TLR2为研究对象，检测在临床正常口腔粘膜组织及口腔癌患者口腔粘膜组织中的表达差异,初步确立其在口腔癌中的高表达；通过采集正常对照组及口腔癌组外周血，并分离单个核细胞,RT-PCR检测正面其TLR2基因的表达情...
- 关键词：
- 关键词：口腔癌基因表达激动剂
- 核转录因子-κB/p65在口腔鳞癌患者中的表达研究
- 2013年
- 目的通过对NF-κB/p65在口腔鳞癌中表达进行研究,初步探讨它们在口腔鳞癌中的作用,为临床治疗提供一种新的思路。方法无菌提取口腔癌患者及其对照外周血单核细胞,利用实时定量PCR检测p65的基因表达,通过Western blot检测单核细胞中的p65的磷酸化水平,并通过免疫组化技术检测癌组织中的p65的表达水平的差异。结果口腔癌患者外周单核细胞p65的基因表达明显增加,p65磷酸化水平也明显增强。口腔癌组织中p65的磷酸化水平较正常组织明显明显增加。结论核转录因子-κB/p65在口腔癌的发生发展过程中被大量表达并大量被激活,可能在其侵袭和转移中发挥重要作用,以此将为口腔癌的发病机理及治疗提供分子生物学基础。
- 李玉华王海欣张爱军
- 关键词：口腔鳞癌NF-ΚBP65
