窦金民
- 作品数：3 被引量：0H指数：0
- 供职机构：复旦大学更多>>
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- 人睫状神经营养因子基因的克隆、表达、纯化和生物活性鉴定
- 2005年
- 目的表达和纯化人睫状神经营养因子(CNTF)并观察其生物学活性。方法用PCR方法构建人CNTF的结构基因,并克隆于pLy4原核表达载体中。将重组表达质粒pLy4-CNTF转化大肠埃希菌JF1125,30℃培养至A600(nm)达到0.6时,迅速升温至42℃诱导目的蛋白的表达。细菌经超声破胞,包涵体经变性、复性、透析和阴离子交换层析,获得纯化的CNTF重组蛋白。然后,用鸡胚背根神经节神经元细胞存活实验观察其生物活性。结果42℃诱导后可以获得Mr≈22.9×103的目的蛋白,Western印迹结果进一步表明,其具有人CNTF的抗原性。表达蛋白主要以不溶形式存在,占菌体蛋白的35%以上,表达产物经变性、复性,纯化后可获得纯度90%以上的目的蛋白。该重组蛋白能够促进鸡胚背根神经节神经元细胞的存活。结论在大肠埃希菌JF1125中成功表达了人CNTF分子,经变性、复性,纯化后得到具有生物活性的蛋白。
- 窦金民郭莉莉刘宏磊陈接根黄海燕宋后燕汤其群
- 关键词：人睫状神经营养因子生物活性鉴定纯化WESTERN印迹背根神经节神经元CNTF
- 人睫状神经营养因子基因的克隆、表达与生物学活性鉴定和人骨形态发生蛋白基因的克隆、表达
- 神经退行性疾病，严重威胁人类的健康和寿命。睫状神经营养因子(CNTF)能促进多种神经元的存活，外源性CNTF能有效地改善受损神经的功能，因此CNTF用于治疗神经损伤和神经退行性疾病。此外，CNTF处理的病人出现脂肪储存减...
- 窦金民
- 关键词：CDNA克隆表达纯化营养因子生物学活性鉴定骨形态
- 文献传递
- 人睫状神经营养因子基因的克隆、表达与生物学活性鉴定和
- 窦金民
- 关键词：CDNA克隆表达纯化活性
