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氨基树脂固定化S-腺苷蛋氨酸（SAM）合成酶制备sAM及光亲和标记探针: S-腺苷蛋氨酸（SAM）是生物体内核酸和蛋白质甲基化的甲基供体,被广泛地用于肝炎、抑郁症以及关节炎等疾病的治疗。酵母发酵法是目前工业化生产SAM的主要途径,但存在底物转化率低、生产周期长、纯化工艺复杂等问题;体外酶促转化...; 牛卫宁曹珊珊羊梦林许乐钦传光; 关键词：氨基树脂重组大肠杆菌; 文献传递

氨基树脂固定化重组S-腺苷蛋氨酸(SAM)合成酶催化制备SAM: S-腺苷蛋氨酸(SAM)被广泛地用于肝炎、抑郁症以及关节炎等疾病的治疗。酵母发酵法是目前工业化生产SAM的主要途径，但存在底物转化率低、生产周期长、纯化工艺复杂等问题；与发酵法相比，酶促转化法具有底物转化率高、分离提纯容...; 牛卫宁曹珊珊羊梦林钦传光; 关键词：固定化酶氨基树脂重组大肠杆菌生物催化

人胱硫醚β合酶I278T突变体的表达、纯化及鉴定: 2014年; 目的探讨在大肠埃希菌中重组表达和纯化人胱硫醚β合酶CBS（I278T）突变体。方法采用重叠延伸聚合酶链反应（PCR）定点突变技术构建突变质粒pGEX4T-1-CBS（I278T）,在含有3%乙醇的培养基中诱导表达,亲和层析纯化得到突变CBS（I278T）蛋白,测定纯化蛋白的活性、紫外可见吸收光谱、蛋白粒径及Zeta电位。结果成功构建了质粒pGEX4T-1-CBS（I278T）。CBS（I278T）蛋白产率、比活性及酶活性回收率分别为2.3mg/L、21.4U/mg、22.6%。终浓度为1mmol/L的S-腺苷甲硫氨酸（AdoMet）对突变CBS（I278T）蛋白没有激活作用。紫外可见吸收光谱分析显示纯化的突变CBS（I278T）存在429nm和550nm的血红素结合蛋白特征吸收峰。蛋白平均粒径为7.5～10.1nm,主要以四聚体形式存在,Zeta电位为-16.3mV。结论成功建立了在大肠埃希菌中表达、纯化及鉴定突变CBS（I278T）的方法。; 牛卫宁许乐羊梦林曹珊珊; 关键词：胱硫醚Β合酶突变粒径 ZETA电位

人胱硫醚β-合酶及其截短型片段的表达、纯化和活性测定被引量：2: 2011年; 将人胱硫醚β-合酶(CBS)基因克隆至质粒pGEX-4T-1中,获得的重组质粒pGEX-4T-1-CBS转入大肠杆菌E.coli Rosetta(DE3)菌株,构建了高效表达CBS的重组菌E.coli Rosetta(pGEX4T-1-CBS)。重组菌在0.1mmol/L的IPTG于30℃诱导16h,可溶性CBS表达量达到28mg/L培养基。将重组菌破碎后上清液经GSTrap Fast Flow亲和层析一步纯化得到CBS融合蛋白,在凝血酶柱上切割缓冲液中加入3%甘油和0.1%CHAPS可以有效抑制酶切后CBS聚沉,酶活性回收率为54.8%,蛋白质产率为15.2mg/L培养基,纯度达到95%,单位酶活为143U/mg,终浓度为1mmol/L的S-腺苷甲硫氨酸(AdoMet)可使CBS单位酶活提高5.1倍,达到735U/mg。同时构建了表达CBS1-413(删除了CBS羧基端调控域138个氨基酸残基)的重组菌E.coli Rosetta(pETDuet-1-CBS1-413),经过一步HisTrap Fast Flow亲和层析,酶活性回收率为74.3%,蛋白质产率为12.8mg/L培养基,纯度达到95%,单位酶活为965U/mg;还表达和纯化了胱硫醚β-裂解酶(CBL),并在此基础上建立了一种新的CBL偶联的CBS酶活性测定方法。; 牛卫宁羊梦林曹珊珊许乐钦传光; 关键词：表达纯化酶活性测定

胱硫醚β-裂解酶的表达纯化及性质研究被引量：5: 2011年; 通过PCR从大肠杆菌(E.coliK12)基因组DNA中扩增出胱硫醚β-裂解酶(Cystathionineβ-lyase,CBL)基因,构建了能高效表达CBL的重组菌E.coliBL21(pETDuet-1-CBL)。重组菌在30℃、0.5 mmol.L-1IPTG存在条件下诱导9 h,可溶性CBL的表达量达18 mg.L-1,占到菌体可溶性总蛋白的23%。将重组菌超声破碎后上清液经His-Trap Fast Flow亲和层析一步纯化得到CBL,回收率为71%,纯度达到94%,纯化后的CBL单位酶活为134.6 U.mg-1。为防止CBL溶液冻融后发生聚沉,向纯化后的酶液中加入5%甘油,-20℃保存。重组酶的最适反应温度为35℃,酶活性稳定的温度范围为20～35℃。重组酶的最适反应pH值为8.0,4℃下在pH值8.0的缓冲溶液中保温10 h酶稳定性最高。重组酶的KmL-cystathionine值为3.78 mmol.L-1,VmaxL-cystathionine值为0.928 mmol.L-1.h-1。本研究建立了基于CBL催化反应产物丙酮酸与2,4-二硝基苯肼显色原理测定CBL酶活性的新方法。; 曹珊珊牛卫宁羊梦林钦传光; 关键词：大肠杆菌表达纯化酶活性测定同型半胱氨酸

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羊梦林