蔡昌芝
- 作品数：15 被引量：12H指数：2
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- 鲍曼不动杆菌外膜蛋白A1S_0115的克隆、表达及免疫保护性研究被引量：1
- 2015年
- 目的构建鲍曼不动杆菌外膜蛋白A1S_0115胞外区(A1S_0115A)与GST标签融合表达的原核表达载体,在大肠杆菌XL-1 blue中表达、纯化A1S_0115A蛋白后,进行抗原免疫保护性的初步研究。方法利用生物信息学技术分析A1S_0115蛋白结构,确定蛋白的胞外区片段,PCR扩增该基因片段后,构建重组表达载体p GEX-6P-2-A1S_0115A,将重组载体转化大肠杆菌XL-1blue,IPTG诱导表达GST-A1S_0115A融合蛋白,采用GST亲和层析填料纯化并酶切获得A1S_0115A蛋白。利用已建立的Balb/c小鼠鲍曼不动杆菌全身感染模型对该蛋白抗原的免疫保护性进行初步评价。结果重组质粒经过Bam HⅠ和NotⅠ双酶切鉴定、核酸序列测定和IPTG诱导表达及酶切后蛋白的SDS-PAGE分析表明,A1S_0115A蛋白胞外区相对分子质量大小约50 000,GST标签相对分子质量大小约26 000,与预期设想符合,目的蛋白纯度在95%以上。用A1S_0115A蛋白对小鼠进行2轮次免疫保护性实验及其抗体的被动免疫实验,免疫攻毒后小鼠的保护率分别为50%和55%,被动免疫保护率为45%和50%。结论成功构建重组表达载体p GEX-6P-2-A1S_0115A,利用大肠杆菌可溶表达系统、GST亲和层析和酶切方法获得了高纯度的A1S_0115A蛋白。动物免疫攻毒保护实验结果表明A1S_0115A蛋白具有较好的免疫保护性,为研制新型有效的鲍曼不动杆菌疫苗奠定实验基础。
- 魏振波蔡昌芝杨赟纪永军牟道华石云曾浩邹全明
- 关键词：GST融合蛋白免疫保护性
- 鲍曼不动杆菌假定外膜蛋白A1S1969的克隆表达及免疫保护机制研究
- 研究背景:目前鲍曼不动杆菌在院内革兰氏阴性菌中检出率高,由于其耐药性强、致病率高、能在环境中长期存活,并且能抵抗紫外线的杀伤作用,因此院内的ICU病房和神经外科成为鲍曼不动杆菌感染的高发区。随着泛耐药鲍曼不动杆菌(PDR...
- 蔡昌芝杨赟石云曾浩邹全明
- 关键词：鲍曼不动杆菌克隆表达
- 文献传递
- 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌IsdB蛋白活性片段的重组蛋白、及其制备方法和应用
- 本发明公开了一种耐甲氧西林金黄色葡萄球菌铁离子表面决定蛋白IsdB的活性片段IsdB2重组蛋白，其氨基酸序列为SEQ ID No：3或在SEQID NO：3的氨基端和/或羧基端添加或缺失若干个氨基酸后得到的与SEQID ...
- 曾浩蔡昌芝邹全明卢陆童文德冯强
- 文献传递
- 鲍曼不动杆菌1A1S_1969重组蛋白及其制备方法和应用
- 本发明涉及一种1A1S_1969的重组蛋白及其制备方法和应用，该重组蛋白包含A1S_1969的第46‑414位氨基酸序列，该重组蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.5所示。该重组蛋白表达量高，便于分离纯化，高效安全，可...
- 冯强蔡昌芝邹全明曾浩石云敬海明
- 文献传递
- 鲍曼不动杆菌假定蛋白A1S_1462蛋白及制备方法和应用
- 本发明涉及一种A1S_1462的重组蛋白及其制备方法和应用，该重组蛋白包含A1S_1462成熟肽，该重组蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。该重组蛋白表达量高，便于分离纯化，高效安全，可以直接与佐剂配合使用，用...
- 蔡昌芝曾浩邹全明冯强石云魏振波
- 文献传递
- 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌IsdB活性片段的克隆、表达及抗原免疫保护性初步研究被引量：1
- 2012年
- 目的探讨耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)抗原IsdB活性片段(IsdB2)免疫保护作用。方法利用生物信息学技术预测分析出IsdB活性片段(IsdB2),PCR扩增编码IsdB2的基因片段,亚克隆至GST标签融合表达的原核表达载体pGEX-6P-2中,将载体转化入大肠杆菌XL-1 blue,通过IPTG诱导表达IsdB2/GST融合蛋白,利用GST亲和层析初步纯化获取IsdB2蛋白。用IsdB2蛋白抗原辅以氢氧化铝佐剂对小鼠进行免疫实验,统计小鼠存活率对IsdB2抗原的免疫性进行初步研究。结果重组质粒经过BamHⅠ和NotⅠ双酶切鉴定、核酸序列测定和IPTG诱导表达IsdB2/GST及酶切获取IsdB2蛋白的SDS-PAGE分析表明,IsdB2蛋白相对分子质量大小约72 000,GST标签相对分子质量大小约26 000,与预期相符合。用IsdB2蛋白对小鼠进行3次疫苗免疫实验,IsdB2对小鼠的保护率分别为84.6%、50%和60%。结论成功构建重组表达载体pGEX-6P-2-IsdB2,利用大肠杆菌表达系统、GST亲和层析和酶切方法获得IsdB2蛋白抗原,通过3次动物疫苗免疫实验结果表明IsdB2具有免疫保护性,为研制新型有效的MRSA疫苗奠定实验基础。
- 蔡昌芝左钱飞冯强周维英吴翼董衍东解庆华邹全明曾浩
- 关键词：耐甲氧西林金黄色葡萄球菌GST融合蛋白免疫保护性
- 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)重组多亚单位基因工程疫苗及其制备方法
- 本发明公开了一种耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)重组多亚单位基因工程疫苗及其制备方法。该疫苗选用耐甲氧西林金黄色葡萄球菌ClfA和IsdB两个抗原分子的活性功能片段与MRSA较特异的肠毒素C突变体重组融合表达，构建获...
- 周维英邹全明周红石云陈晓红郭刚毛旭虎向云潘夕春李斌李军蔡昌芝
- 鲍曼不动杆菌外膜蛋白A1S1969的克隆表达及免疫保护机制初步研究被引量：3
- 2016年
- 目的制备鲍曼不动杆菌(Ab)A1S_1969重组蛋白,利用小鼠全身脓毒血症感染致死模型评价A1S_1969重组蛋白的免疫保护效果,探讨可能的免疫保护机制,为筛选Ab疫苗有效的保护性抗原奠定基础。方法基于反向疫苗学技术筛选出Ab外膜蛋白A1S_1969,利用p GEX-6P-2质粒构建GST融合表达载体,重组表达的A1S_1969蛋白经亲和层析高效纯化后与铝佐剂吸附制备而成重组A1S_1969免疫原;采用Balb/c小鼠全身感染模型评价A1S_1969重组蛋白的免疫保护效果,通过ELISA检测免疫小鼠Ig G抗体滴度和Ig G抗体亚型。制备A1S_1969重组蛋白抗血清进行体外调理吞噬杀菌实验。结果成功克隆、表达并纯化A1S_1969重组蛋白,纯度>90%。动物免疫保护结果显示A1S_1969重组蛋白组小鼠存活率为55.6%,对照组小鼠存活率为20.0%(P<0.05);末次免疫7 d后小鼠体内总Ig G抗体滴度为1∶64 000,以Ig G1亚型为主;体外调理吞噬杀菌实验结果显示A1S_1969特异性血清抗体可以增强中性粒细胞对Ab的杀菌作用,实验组杀菌率可达55%,对照组无杀菌活性。结论 A1S_1969重组蛋白可显著提高全身脓毒血症感染致死模型小鼠的存活率,具有良好的免疫保护效果。
- 蔡昌芝冯强杨赟魏振波纪永军牟道华敬海明邹全明曾浩
- 关键词：鲍曼不动杆菌基因工程疫苗克隆表达免疫保护
- 鲍曼不动杆菌1A1S_1969重组蛋白及其制备方法和应用
- 本发明涉及一种1A1S_1969的重组蛋白及其制备方法和应用，该重组蛋白包含A1S_1969的第46-414位氨基酸序列，该重组蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.5所示。该重组蛋白表达量高，便于分离纯化，高效安全，可...
- 冯强蔡昌芝邹全明曾浩石云敬海明
- 文献传递
- 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)重组亚单位疫苗FnBPA的免疫保护作用研究被引量：7
- 2012年
- 目的评价耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)候选疫苗抗原FnBPA活性片段的免疫原性以及其在抵抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌感染中的免疫保护作用。方法构建pGEX-6p-2-FnBPA表达载体,经可溶表达及亲和纯化后的重组蛋白免疫Balb/c小鼠。末次免疫后的第7天,分离免疫小鼠的血清ELISA检测IgG及其亚型抗体水平,同时测定体外抗体介导的调理吞噬作用。末次免疫后的第14天,经尾静脉感染ATCC国际标准株MRSA-252,统计分析感染后各组的小鼠的生存率以及检测脾脏,肾脏的细菌定植量。结果成功构建、表达及纯化了FnBPA活性片段,重组蛋白纯度可达90%;免疫后诱导小鼠机体产生了高效价的IgG抗体,并在体外能发挥抗体介导的调理吞噬作用;在感染保护评价实验中,与对照组相比,实验组的生存率显著提高(P<0.01),并显著降低了脾脏与肾脏的细菌定植量(P<0.05)。结论耐甲氧西林金黄色葡萄球菌重组亚单位疫苗FnBPA具有良好的免疫原性和免疫保护作用,可以作为MRSA疫苗研究的重要候选抗原。
- 左钱飞吴翼董衍东蔡昌芝冯强解庆华曾浩邹全明
- 关键词：耐甲氧西林金黄色葡萄球菌免疫保护性
