袁青
- 作品数：51 被引量：165H指数：8
- 供职机构：西南医科大学药学院药理学教研室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金四川省青年科技基金四川省卫生厅科研基金更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学生物学文化科学更多>>
- 一种核糖体展示单链抗体文库的构建与鉴定
- 2009年
- 用柑桔溃疡病致病菌Xanthomonas axonopodis pv.citri(Xac)全菌免疫小鼠,提取小鼠脾细胞mRNA,RT-PCR扩增小鼠抗体重链可变区(VH)和轻链可变区(VL),采用linker(Gly4Ser)3连接VH和VL,构建用于核糖体展示方法筛选阳性单链抗体(scFvs)的文库。通过将scFv文库DNA转化大肠杆菌JM109,随机挑取克隆子测序以分析单链抗体文库的多样性。结果显示,用柑桔溃疡病菌免疫后的小鼠抗血清效价为2500倍左右,扩增的VH大小为350bp左右,VL的大小为650bp左右,linker连接后的单链抗体文库DNA大小为1200bp左右。测序结果显示,单链抗体文库多样性好。以Xac为靶,筛选到了抗Xac的特异性抗体,说明该抗体库可用于柑桔溃疡病菌单链抗体的筛选。
- 年四季袁青殷幼平王中康
- 关键词：单链抗体柑桔溃疡病菌核糖体展示
- 马铃薯病毒病分子检测技术研究进展被引量：12
- 2003年
- 快速、准确地定性或定量检测马铃薯植株中病毒、类病毒的种类和数量是有效地控制马铃薯病毒病害的需要 ,也是马铃薯种薯品质的重要保证。
- 袁青殷幼平王中康
- 关键词：病毒病分子检测技术马铃薯病毒RT-PCR聚合酶链式反应
- 抗柑桔溃疡病菌可溶性单链抗体的表达及鉴定被引量：3
- 2009年
- 前期采用核糖体展示技术筛选了抗柑桔溃疡病菌(Xanthomonas axonopodis pv. citri,Xac)高亲和力单链抗体(Single chain variable fragment,scFv)GX13、GX44和GX95,为高效表达具有生物活性的单链抗体,本研究将前期筛选的高亲和力单链抗体基因转入大肠杆菌HB2151中进行可溶性表达,点印迹和Western印迹检测可溶性单链抗体的表达水平,亲和层析纯化表达的单链抗体,酶联免疫吸附法(ELISA)检测纯化单链抗体的抗原结合活性.结果显示,3株抗柑桔溃疡病菌可溶性单链抗体在大肠杆菌HB2151中均获得成功表达,表达产物分子量(Mr)约为32.0×103,主要集中于细菌周质腔中.ELISA检测纯化的单链抗体都具备抗原结合活性,可进一步应用于柑桔溃疡病菌的免疫诊断和病害防治.
- 袁青年四季殷幼平李泮志王中康
- 关键词：柑桔溃疡病菌单链抗体可溶性表达
- 天然人源抗体文库构建及多种人源抗体的筛选
- <正>目的:构建天然人源抗体文库并筛选多种人源抗体。方法:提取健康人外周血单个核细胞(PBMC)mRNA,构建全长c DNA文库。从全长c DNA文库中扩增人抗体重链可变区(VH)和轻链可变区(VL,包括Vκ和Vλ),L...
- 年四季黄黎郭夕源邬于川袁青
- 文献传递
- 三重RT-PCR同步检测马铃薯多种病毒影响因素被引量：8
- 2004年
- 根据病毒外壳蛋白区序列设计PVX、PVS特异性引物对 ,根据P1基因区序列设计PVA特异性引物对 ,应用三重RT PCR同步检测马铃薯X病毒 ,马铃薯A病毒及马铃薯S病毒 ,分别得到 5 62bp、 2 5 5bp、 1 82bp大小的扩增片段。试验从反转录反应、PCR反应及循环条件 3方面讨论了试剂和循环条件对三重RT PCR同步检测 3种病毒的影响。结果表明反转录反应中dNTPs浓度、 3种病毒下游引物浓度比例对整个反应影响较大 ;其次是PCR反应中MgCl2 浓度和退火温度 ;反转录时间 ,循环条件对RT PCR影响较小。
- 袁青王中康殷幼平夏玉先
- 关键词：RT-PCR
- 抗TSLP全人源单链抗体筛选与鉴定
- <正>目的表达TSLP蛋白,从全人源单链抗体文库中筛选得到抗TSLP单链抗体。方法扩增TSLP cDNA,将目的基因与表达载体pET101/D-TOPO连接,转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达并对表达产物进行纯化鉴定...
- 朱建光年四季徐文峰叶迎春袁青
- 文献传递
- 抗金黄色葡萄球菌全人源单链抗体的筛选与鉴定
- 研究背景:金黄色葡萄球菌常引起败血症、肺炎和全身性感染等,特别是耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(meticillin-resistant staphylococcus aureus,MRSA)是临床上最常见的耐药菌之一,其治疗...
- 年四季吴桐徐文峰叶迎春袁青
- 关键词：金黄色葡萄球菌噬菌体展示
- 文献传递
- 金黄色葡萄球菌α-溶血素的基因克隆与蛋白表达纯化
- ＜正＞金黄色葡萄球菌α-溶血素（α-Hla）是一种外毒素,具有良好的抗原性,是金黄色葡萄球菌致人类疾病的主要因子,在金黄色葡萄球菌感染特别是医源性感染中,起到主要作用。金黄色葡萄球菌感染容易产生耐药性,后期抗感染治疗难度...
- 吴桐年四季徐文峰叶迎春袁青
- 文献传递
- IL-4、IL-13蛋白表达及抗IL-4、IL-13人源单链抗体的筛选被引量：3
- 2013年
- 目的:表达IL-4和IL-13蛋白,从人源单链抗体文库中分别筛选抗IL-4和抗IL-13单链抗体。方法:采用RT-PCR从健康志愿者外周血单核细胞(PBMC)mRNA中扩增IL-4和IL-13 cDNA;构建硫氧还蛋白融合表达载体,转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达并对表达产物进行纯化鉴定。以生物素化的IL-4和IL-13为抗原从前期构建的人源抗体文库中采用噬菌体展示技术分别筛选抗IL-4和抗IL-13人源单链抗体(scFv)。结果:扩增的IL-4 cDNA大小为280 bp,表达的融合蛋白大小为27 kD左右。扩增的IL-13 cDNA大小为252 bp,表达的融合蛋白大小为25 kD左右。分别以生物素化的IL-4和IL-13蛋白为抗原,采用噬菌体展示技术对人源抗体文库进行3轮富集后,分别有大约37%的scFvs与IL-4有结合特性,有约27%的scFvs与IL-13有结合特性。筛选了4株分别与IL-4和IL-13结合能力强的单链抗体进行了Western blot鉴定和测序。结论:成功筛选到抗IL-4和抗IL-13人源性单链抗体。
- 袁青黄黎郭夕源叶迎春年四季
- 关键词：IL-4IL-13人源单链抗体
- 松材线虫分子检测快速制样方法
- 本发明涉及一种松材线虫分子检测快速制样方法，是专门针对对林业影响巨大的松材线虫而建立起的快速制样的方法。利用该方法，不需要分离线虫，就可以直接提取疫木中松材线虫DNA用于分子检测。配合PCR技术，可以检测出1.5克木屑中...
- 殷幼平王中康刘裕兰袁青曹月青夏玉先彭国雄
- 文献传递
