许望琼
- 作品数：12 被引量：45H指数：6
- 供职机构：中南大学湘雅医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- HMGB1基因沉默对阿霉素诱导K562／A02细胞凋亡增敏作用的研究被引量：7
- 2008年
- 目的探讨高迁移率族蛋白1（HMGB1）基因沉默对白血病细胞耐药逆转的作用。方法将HMGB1基因特异性干扰RNA（HMGB1 siRNA）导入K562／A02细胞中，通过Western blot和RT—PCR方法检测HMGB1基因在转染前后的表达；WST8法检测阿霉素（ADM）对转染前后K562／A02细胞的半数抑制浓度（IC50）；流式细胞术检测凋亡细胞百分率；Western blot检测线粒体促凋亡蛋白Smac／DIABLO的释放：采用caspase活性定量检测试剂盒分析caspase-3的活性。结果①与未经处理的K562／A02细胞组相比，转染HMGB1 siRNA的K562／A02细胞组HMGB1 mRNA和蛋白水平分别下降86％和71％；②HMGB1基因沉默使K562／A02细胞对ADM的药物敏感性增强，其IC50值从转染前的（4．83±0.08）μg／ml降低到（1．33±0．10）μg／ml，并在ADM浓度为1μg／ml和5μg／ml时，细胞凋亡百分率分别增加27％、32％；③HMGB1基因沉默可促进ADM所致Smac／DIABLO从线粒体向胞浆释放。并增加caspase-3的活性。结论HMGB1基因沉默能明显增加K562／A02细胞对ADM的敏感性，逆转K562／A02细胞对ADM耐药。
- 谢岷康睿俞燕朱珊贺钰磊许望琼唐道林曹励之
- 关键词：细胞凋亡
- 儿童急性淋巴细胞白血病及阿霉素所致Jurkat细胞凋亡时WAVE1表达研究被引量：6
- 2008年
- 目的初步探讨WASP家族Verprolin同源蛋白1(WAVE1)在急性淋巴细胞白血病(ALL)发病中可能的作用及意义。方法运用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)半定量法和蛋白质印迹(Western blotting)分别检测40例ALL初治患儿、15例化疗完全缓解半年、4例复发、10例非白血病患儿BMMCs中WAVE1 mRNA和蛋白的表达水平。以不同浓度阿霉素处理Jurkat细胞:采用MTT法测细胞增殖;②采用流式细胞仪检测细胞凋亡率;③采用RT-PCR和Western blotting检测WAVE1表达。结果ALL初治和复发患儿BMMCs均有WAVE1 mRNA和蛋白的表达,对照和缓解组BMMCs中mRNA和蛋白低表达或无表达,初治和复发组的WAVE1 mRNA和蛋白的表达表达水平显著高于化疗后缓解组和对照组(P<0.01)。阿霉素明显抑制Jurkat细胞增殖,抑制作用呈剂量时间依赖效应(P<0.05);阿霉素作用24h后,细胞凋亡随药物浓度增增高而增加,与对照组相比,差异有显著性(P<0.05);细胞WAVE1 mRNA和蛋白表达水平随阿霉素处理浓度的增高而降低,与对照组比较,差异有显著性(P<0.05)。结论WAVE1在ALL患儿BMMCs中高表达;WAVE1可能与儿童ALL病程相关,它可能成为动态检测儿童ALL病情的一个新指标。
- 王卓胡婷曹励之康睿赵明一俞燕许望琼
- 关键词：急性淋巴细胞白血病WAVE1凋亡儿童
- 急性淋巴细胞白血病患儿WAVE1和p22phox的表达及WAVE1与氧化应激的关系被引量：5
- 2009年
- 目的研究儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)患者外周血单个核细胞(PBMCs)中WASP家族富含脯氨酸同源蛋白1(WAVE1)及NADPH氧化酶亚基p22phox的表达并探讨WAVE1表达与白血病病程及氧化应激的关系。方法实时定量PCR法测定41例ALL儿童及10例正常对照儿童PBMCs中WAVE1和p22phox的表达水平。黄嘌呤氧化酶法(羟胺法)和二硫代二硝基苯甲酸法(DTNB法)分别测定外周血血浆总超氧化物歧化酶(SOD)活性和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性。结果①儿童ALL活动期组(初治+复发)PBMCs中WAVE1,p22phox的表达水平与正常对照组和完全缓解组相比均显著增高(P<0.01);ALL完全缓解组中,WAVE1,p22phox表达高于正常对照组(P<0.05);②正常对照组、活动期组和缓解组血浆SOD活力分别为166.35±27.93,22.62±7.39,107.11±28.57U/mL;GSH-Px活力分别为490.94±39.38,91.73±28.88,267.56±82.64μmol/L。ALL活动期组外周血血浆总SOD,GSH-Px活性较完全缓解和正常儿童明显降低(P<0.01);③随着WAVE1和p22phox的高表达,血浆中SOD,GSH-Px活性呈现下降趋势。WAVE1的表达水平与p22phox表达水平呈正相关(r=0.34,P<0.05),与血浆SOD,GSH-Px活性呈负相关(r分别为-0.336和-0.408,P<0.05)。结论与正常对照组相比,WAVE1和p22phox在儿童ALLPBMCs中表达增高,而且其变化与ALL病程相关。ALL患儿氧化应激可能参与了WAVE1表达的调控。
- 贺钰磊曹励之杨静杨明华许望琼谢岷石壮
- 关键词：WAVE1P22PHOX氧化应激急性淋巴细胞白血病
- WAVE1和MMP-2在儿童急性淋巴细胞白血病骨髓细胞中的表达及与白血病髓外浸润的关系
- 目的：检测WAVE1和MMP-2基因在儿童急性淋巴细胞白血病中的表达，探讨WAVE1和MMP-2基因与白血病浸润的关系。
方法：用荧光定量PCR技术(real-time PCR)检测WAVE1和MMP-2在儿童...
- 许望琼
- 关键词：淋巴细胞白血病骨髓细胞WAVE1MMP-2髓外浸润
- 文献传递
- WAVE1对K562细胞侵袭能力的影响及其机制研究被引量：2
- 2009年
- 目的研究WASP家族富含脯氨酸同源蛋白1（WAVE1）对K562细胞侵袭的影响及其机制。方法免疫荧光观察WAVE1与基质金属蛋白-2（MMP-2）在细胞中的分布。利用pcDNA3．1-WAVE1重组真核表达质粒转染K562细胞，将WAVE1基因特异性小片段干扰RNA（WAVE1 siRNA）转染K562细胞，Transwell法检测细胞侵袭能力；实时PCR和Western blot检测转染前后WAVE1及MMP-2的表达。结果①WAVE1与MMP-2主要表达于K562细胞的细胞膜上且两者有共定位。②与对照组K562细胞相比，转染pcDNA3．1-WAVE1 24h及48h后K562细胞MMP-2 mRNA表达分别增加295％和198％，蛋白表达水平分别增加80％和23％；转染特异性WAVE1 siRNA 24h及48h后K562细胞MMP-2 mRNA表达分别下降81％和28％，蛋白表达分别下调36％和53％。③与对照组K562细胞相比转染pcDNA3．1-WAVE1后细胞侵袭能力增强，而干扰WAVE1表达后K562细胞侵袭能力减弱。结论WAVE1与MMP-2在K562细胞可能具有协同作用；WAVE1参与了K562细胞的侵袭转移过程，其机制可能与调控MMP-2的表达相关。
- 贺钰磊曹励之杨明华赵明一俞燕许望琼
- 关键词：K562细胞系白血病浸润
- HMGB1基因沉默对阿霉素诱导K562/A02细胞凋亡增敏作用的研究
- 目的探讨高迁移率族蛋白1(HMGB1)基因沉默对白血病细胞耐药逆转的作用。方法将HMGB1基因特异性干扰RNA(HMGB1 siRNA)导入K562/A02细胞中,通过Western blot和RT-PCR法检测HMGB...
- 谢岷俞燕朱珊贺钰磊许望琼曹励之
- 文献传递
- 荧光定量聚合酶链反应检测儿童白血病骨髓GRIK2基因的表达被引量：1
- 2008年
- 目的分析骨髓中GRIK2基因产物在白血病患儿、白血病细胞株及非血液病患儿中的表达差异。方法采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)和荧光定量PCR(FQ-PCR)方法分别检测100例白血病患儿、3个白血病细胞株(Jurkat、Raji和HL-60细胞株)及30例对照组骨髓中GRIK2的表达情况。结果RT-PCR和FQ-PCR检测标本的阳性率分别为4.51%(6/133例)和7.52%(7/133例),2种检测方法均显示GRIK2基因在白血病和正常造血细胞间的表达无统计学差异(P>0.05),但GRIK2mRNA在无6q缺失的T-急性淋巴细胞白血病(ALL)患儿中较B-ALL患儿表达高,在有6q缺失的T-ALL和B-ALL患儿中GRIK2表达为阴性,T细胞株Jurkat有阳性表达,B细胞株Raji和HL-60细胞株为阴性表达;30例对照组中3例有较高水平表达。结论GRIK2mRNA在骨髓中水平低或不表达,GRIK2基因是否为ALL的肿瘤抑制基因(TSG)有待进一步探讨。
- 胡婷王卓曹励之俞燕康睿许望琼
- 关键词：肿瘤抑制基因荧光定量聚合酶链反应儿童
- 高迁移率族蛋白1对阿霉素诱导的白血病K562细胞凋亡的影响被引量：9
- 2008年
- 背景与目的:高迁移率族蛋白1(high mobility group box1,HMGB1)作为核DNA结合蛋白参与稳定染色质结构与功能和基因转录调控。近年研究发现,细胞内外HMGB1与多种肿瘤(例如,乳腺癌、结肠癌、黑素瘤)增殖和转移有密切关系,在多种实体瘤组织和未成熟细胞中表达丰富。本研究的目的是探讨转染HMGB1基因对阿霉素(adriamycin,ADM)诱导的白血病K562细胞凋亡的影响,旨在进一步阐明HMGB1在儿童白血病中的分子作用机制。方法:将HMGB1基因真核表达载体pcDNA3.1-HMGB1转染至K562细胞,构建HMGB1基因高表达的K562细胞。Western blot和RT-PCR(reverse transcription-polymerase chain raction)法检测基因转染前后K562细胞中HMGB1蛋白及mRNA的表达水平;WST8法检测ADM对转染前后细胞的半数抑制浓度(IC50);流式细胞仪检测和计算凋亡细胞百分率;Western blot检测抗凋亡蛋白Bcl-2的蛋白表达;采用Caspase活性定量检测试剂盒分析Caspase-3和Caspase-9的活性。结果:与转染空载体的K562细胞相比,转染HMGB1基因的K562细胞HMGB1 mRNA表达水平增加85%,蛋白表达水平增加56%。HMGB1基因过表达降低了K562细胞对ADM的药物敏感性,使ADM的IC50从转染前的(0.06±0.00)μg/mL增加到(3.46±0.06)μg/mL,并在ADM浓度为1μg/mL时凋亡细胞百分率下降31%。HMGB1基因过表达抑制了ADM所致K562细胞Bcl-2蛋白表达水平下降。ADM处理细胞12h和24h后,转染HMGB1基因的K562细胞的Caspase-3和Caspase-9活化明显受到抑制(1.55±0.06vs.2.55±0.06,1.86±0.10vs.2.85±0.06;1.40±0.08vs.2.03±0.05,1.55±0.06vs.2.22±0.05,P值均≤0.05)。结论:HMGB1高表达可通过调节Bcl-2蛋白水平和Caspase-3及Caspase-9活性来抑制阿霉素诱导的白血病K562细胞凋亡。
- 俞燕谢岷贺钰磊许望琼朱珊曹励之
- 关键词：HMGB1白血病K562细胞阿霉素基因重组
- 188例急性淋巴细胞性白血病患儿的疗效及预后分析被引量：6
- 2008年
- 目的对中南大学湘雅医院、广西医科大学第一附属医院急性淋巴细胞白血病（ALL）患儿的治疗结果及影响无事件生存率（EFS）的因素进行分析。方法所有病例均采用中华医学会儿科学分会血液学组1998年第二次修正的小儿ALL诊疗建议（简称荣成方案）化疗，采用Kaplan-Meier方法评估依从治疗的188例患儿EFS，组间患儿EFS差异用Log-rank检验，用COX比例风险模型分析独立因素对EFS的影响。结果374例接受诱导治疗儿童的完全缓解（CR）率为93．6％（354例），全程依从治疗的188例ALL的5年EFS为（68．1±5．6）％，标危、高危组5年EFS分别为（75．2±6．0）％、（47．6±11．6）％；总复发率为10．6％，复发的中位时间为13个月；188例患儿中共有29例死亡，死亡率15．4％；化疗相关死亡13例（7．0％）。危险度分组、t（9；22）／bcr-abl融合基因和白细胞计数为独立的不良预后因素。结论两家医院通过荣成方案治疗儿童ALL的总EFS接近70％，需要进行更加详细的危险因素评估和分组，降低治疗相关死亡率，提高儿童ALL治疗的依从性，以进一步提高EFS。
- 杨明华贾文广曹励之贺钰磊廖宁陈国力罗建明许望琼杨静
- 关键词：无病生存
- 小儿白血病危险因素调查被引量：6
- 2008年
- 目的研究儿童白血病的可能危险因素。方法自行设计白血病危险因素调查表,对2005年1月至2007年1月中南大学湘雅医院儿科住院的136例白血病患儿进行1∶1配对对照研究,对所得资料进行单因素分析,选择其中有意义的进行多因素条件Logistic回归分析。结果88项指标单因素分析中有15项有统计学意义;其中出生体重、家族肿瘤病史、母亲生育年龄、房屋附近有高压线、家中进行装修、患儿既往频繁感染6项指标在多因素条件Logistic逐步回归分析中有统计学意义。结论本次调查提示出生体重、家族肿瘤病史、母亲生育年龄、房屋附近有高压线、家中进行装修、患儿既往频繁感染病史,可能为较显著的儿童白血病危险因子。
- 俞燕陈可可康睿王卓胡婷黄琼许望琼曹励之
- 关键词：儿童白血病LOGISTIC回归分析
