辛洪奎
- 作品数：35 被引量：47H指数：4
- 供职机构：中国人民解放军海军总医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金海军总医院攻关课题更多>>
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- 深低温保存温度及时间对椎间盘生物活性的影响被引量：2
- 2011年
- 目的:探讨深低温保存温度及保存时间对椎间盘生物活性的影响。方法:取1岁龄Beagle犬新鲜椎间盘72个,分为对照组(A组,n=8)、-80℃保存组(B组,n=32)和-196℃保存组(C组,n=32)。B和C组在冷冻保存液中分别保存于-80℃低温冰箱及-196℃液氮中,在保存2w、2m、6m及12m时每组每个时间点取8个椎间盘,通过溴化吡啶/二乙酸荧光素(EB/FDA)荧光染色法检测椎间盘组织中不同部位的细胞存活率,以二甲基亚甲蓝(DMMB)染色法检测髓核组织蛋白多糖(PG)含量,以羟脯氨酸检测法测定纤维环组织中的总胶原含量;对照组取标本后直接进行以上检测。结果:B和C组椎间盘在保存至2w时各部位细胞存活率较A组明显下降,2m^12m保存期间,B、C两组椎间盘各部位的细胞存活率均维持在相对恒定的水平,但均较2w时下降;B组及C组外层纤维环细胞存活率在保存2w和2m时无明显差别(P>0.05),在保存6m及12m时C组明显高于B组(P<0.05);C组内层纤维环及髓核组织细胞存活率在各检测时间点均明显高B组(P<0.05)。B、C两组在各检测时间点PG含量均较A组明显降低,在保存2m^12m期间,C组PG含量均高于B组(P<0.05)。B、C两组总胶原蛋白含量在保存期间随时间逐渐降低,但两组间未见明显差异(P>0.05)。结论:利用-196℃保存椎间盘组织,无论在细胞总的存活率及PG含量上均优于-80℃保存;-196℃保存12个月时椎间盘细胞存活率及PG含量均维持在相对稳定的水平,能满足同种异体椎间盘移植的要求。
- 王超锋阮狄克张超辛洪奎徐成
- 关键词：椎间盘深低温保存细胞活性细胞存活率
- 组织工程化同种异体椎间盘移植的动物实验研究
- :通过比格犬体内原位植入实验,探讨同种异体椎间盘移植的转归,并观察转hTERT基因髓核细胞介入椎间盘移植的生物学效应. 方法:常规分离犬髓核细胞,将PKH-26标记的传2代髓核细胞注射入冷冻保存的同种异体间盘内构建...
- 辛洪奎张超何勍阮狄克
- 关键词：生物学效应动物实验
- 颈椎间孔封闭治疗神经根型颈椎病的临床疗效观察
- 目的 探讨颈椎间孔封闭治疗神经根型颈椎病的可行性与疗效.方法 2012年7月至2014年7月11例神经根型颈椎病患者行椎间孔封闭治疗.男3例,女9例,年龄39-81岁,平均64.6±14.8岁.2例合并糖尿病、...
- 侯黎升何勍阮狄克陈春辛洪奎刘玥
- 关键词：神经根型颈椎病疗效并发症
- 慢病毒载体介导绿色荧光蛋白基因在椎间盘髓核细胞中的表达被引量：2
- 2009年
- 目的本研究构建含绿色荧光蛋白基因的重组慢病毒,并观察其在人椎间盘髓核细胞中的表达情况。方法应用分子克隆技术将绿色荧光蛋白(green fluorescent prote in,GFP)基因导入慢病毒载体质粒pLenti6/V5 TOPO,应用磷酸钙沉淀法将慢病毒载体三质粒系统(包括包装质粒、包膜蛋白质粒等)共转染入293细胞进行包装,48 h后在荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白表达情况,72 h收集病毒上清并感染髓核细胞,在荧光显微镜下感染情况。结果重组慢病毒滴度测定约为107U/mL。感染人椎间盘髓核细胞后,荧光显微镜下观察到GFP的表达。结论成功构建了含GFP的慢病毒载体,且能成功将目的基因转入椎间盘髓核细胞并表达。
- 王德利阮狄克辛洪奎周丽君王超峰李海峰何勍张超
- 关键词：椎间盘绿色荧光蛋白质类转染
- 椎间盘退行性疾病的生物学治疗进展被引量：1
- 2008年
- 随着人类平均寿命的延长．椎间盘退变性疾病（DDD）的发病率逐步上升。椎间盘退变的原因复杂，归结起来主要有以下四大类因素：（1）年龄因素；（2）机械因素；（3）细胞营养及炎性介质的作用：（4）基因因素。不论是何种原因引起的椎间盘退变，其最终结果都是使椎间盘细胞外基质如蛋白多糖及胶原的含量减少从而引发退变。生物学治疗正是着眼于促进细胞外基质合成这一核心环节，
- 辛洪奎阮狄克张超
- 关键词：椎间盘退行性疾病生物学治疗椎间盘退变性疾病细胞外基质合成年龄因素基因因素
- 犬同种异体椎间盘复合髓核细胞移植初探被引量：1
- 2012年
- 目的：探讨同种异体椎间盘复合髓核细胞移植的转归，观察转人端粒酶逆转录酶human telomerase reverse transcriptase，hTERT）基因髓核细胞介入椎间盘移植的生物学效应。方法：常规分离8周龄比格犬髓核细胞，将PKH-26标记的传2代髓核细胞（NPc）和转hTERT基因髓核细胞（hTERT—NPc）分别注射入冷冻保存的同种异体椎间盘内构建组织工程化同种异体椎间盘。选择12月龄同种犬18只随机分为3组，分别植入hTERT—NPc组织工程化的同种异体椎间盘（A组）、NPc组织工程化的同种异体椎间盘（B组）以及未组织工程化的同种异体椎间盘（C组）。每只犬于术后4、8、12周行正侧位X线片及MRI检查，观察移植椎间盘同宿主椎体愈合情况、移植椎间盘高度和信号变化情况：手术后12周麻醉状态下处死实验动物取L1～L7段脊柱标本进行生物力学测试，取移植椎间盘进行组织学观察。结果：X线及MRI检查结果显示3组移植椎间盘与宿主椎体均实现了良好的骨性融合，其中C组椎间盘术后出现了呈进展趋势的退行性改变，至移植后12周，其椎间盘高度及髓核信号比灰度值明显低于A、B两组（P〈0．05）。生物力学显示术后12周时，C组移植椎间盘在屈伸和旋转方向的活动度显著性大于A、B两组（P〈0．05），A组与B组无显著性差异（P〉0．05）。激光共聚焦显微镜观察到A、B组移植椎间盘髓核区域内有红色荧光细胞；光学显微镜下观察A、B两组移植椎间盘结构保持较好，外形类似软骨细胞的髓核细胞数量较多，排列较为规则；C组髓核形态保持欠佳，结构较为紊乱，髓核细胞数量明显减少，细胞形态欠饱满，退行性改变明显。RT—PCR分析显示术后12周时A组髓核内可检测到hTERTmRNA的阳性表达。结论：犬同种异体椎间盘移植后可在宿主体内存活，通过复合NPc可延缓椎间盘移植后的退行性改�
- 辛洪奎张超王德利吴剑宏王超峰何勍阮狄克
- 关键词：椎间盘退变椎间盘移植同种异体人端粒酶逆转录酶髓核细胞
- 重组腺相关病毒介导人端粒酶逆转录酶基因转染对人髓核细胞功能的影响被引量：2
- 2012年
- 目的:研究重组腺相关病毒介导人端粒酶逆转录酶基因(recombinant adenoassociated virus vector-me-diated human telomerase reverse transcriptase,rAAV-hTERT)转染对体外培养人髓核细胞功能的影响。方法:利用机械与酶消化的方法获得均一性的人椎间盘髓核细胞,将构建好的rAAV-hTERT转染P2代体外单层培养的髓核细胞。用重组腺相关病毒-增强型绿色荧光蛋白(recombinant adenoassociated virus vector-mediatedenhanced green fluorescent protein,rAAV-EGFP)作为标记基因观察细胞转染效率,按感染复数(multiplicity ofinfection,MOI)103、104、105病毒基因组拷贝数/细胞(vector genomes/cell,v.g/cell)设组,流式细胞仪检测,筛选病毒转染的最佳MOI;设立rAAV-hTERT转染组、AAV空病毒转染组及空白细胞对照组,用反转录聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chain reareaction,RT-PCR)及免疫印迹(Western-blot)方法检测rAAV-hTERT转染后hTERT基因在髓核细胞内的表达,实时定量聚合酶链反应(real-time quantitative PCR)及酶联免疫法(enzyme linked immunosorbent,ELISA)检测髓核细胞合成Ⅱ型胶原及蛋白多糖能力的变化。结果:rAAV-EGFP转染细胞后第7天时,MOI为105v.g/cell组转染效率可达73.9%,明显高于MOI 103、104v.g/cell组(P<0.05);rAAV-hTERT转染组在转染后的第7、60、90、120天均可检测到hTERT基因的表达,而其他两组则无表达;转染rAAV-hTERT后120d之前,rAAV-hTERT转染组分泌蛋白多糖及Ⅱ型胶原较其他两组均明显增高(P<0.05),而两对照组之间则始终无明显差异(P>0.05)。结论:rAAV-hTERT能成功转染人椎间盘髓核细胞并正确表达,rAAV-hTERT转染能有效延长髓核细胞分泌Ⅱ型胶原及蛋白多糖功能。
- 吴剑宏阮狄克王德利张超何勍王超锋张燕辛洪奎顾韬徐成刘玥
- 关键词：髓核细胞腺相关病毒
- 组织工程复合物腰椎间盘原位植入生物力学稳定性初步研究
- 2011年
- 目的 观察组织工程复合物于犬腰椎间盘原位植入后的生物力学稳定性变化.方法 以犬髓核（NP）细胞-聚乳酸-聚羟基乙酸共聚物（PLGA）支架构建组织工程复合物.将24只12个月龄Beagle犬随机分为4组,A组为非手术对照组,B组行腰椎4～5（L4-5）NP摘除,C组行L4-5 NP摘除＋空白支架植入,D组行L4-5NP摘除＋NP细胞-PLGA支架复合物植入.于手术后第4、8、12周处死实验动物取L1～7节段脊柱,使用MTS-858 Mini Ⅱ型生物力学实验机测量标本L4～5节段在纯力偶距下屈伸及旋转动度,行各组间L4～5节段生物力学稳定性比较.结果 B、C、D组L4～5节段生物力学稳定性较A组均有不同程度降低;B组与C组牛物力学特性差异无明显统计学意义（P＞0.05）;而D组与前两组相比稳定性有明显提高（P＜0.05）.结论 NP细胞-PLGA支架复合物腰椎间盘原位植入能够恢复失稳节段的生物力学稳定性.
- 徐成阮狄克辛洪奎李超王超锋张超
- 关键词：髓核
- 组织工程化同种异体椎间盘移植的动物实验研究被引量：1
- 2013年
- 目的观察组织工程技术的运用能否延缓椎间盘移植后的退行性改变。方法将髓核细胞复合至同种异体椎间盘,体外培养后植入犬L4/L5椎间隙作为实验组(A组),对照组(B组)行同种异体椎间盘移植。使用影像学、生物力学及组织学分析评估植入椎间盘的转归并行组间比较。结果移植椎间盘可与宿主椎体实现骨性融合。对照组椎间盘术后退变明显,12周时其椎间盘高度及髓核信号比灰度值明显低于实验组,稳定性丧失明显;组织学观察发现实验组移植椎间盘结构保持较好,髓核细胞数量较多,排列规则;对照组髓核形态保持欠佳,结构紊乱,髓核细胞数量减少,退行性改变明显。结论通过复合种子细胞实现异体椎间盘的组织工程化可有效延缓椎间盘移植后的退行性改变。
- 辛洪奎张超王德利吴剑宏王超峰何勍阮狄克
- 关键词：椎间盘犬科
- 骨形态发生蛋白-7及其对椎间盘退变修复作用的研究进展被引量：5
- 2011年
- 椎间盘退行性疾病（degenerative disc disease,DDD）是临床常见病。近年来,应用生长因子、细胞及基因等生物技术和手段治疗DDD引起了广泛关注。其中,骨形态发生蛋白-7（bone morphogenefic proteins,BMP-7）由于其对软骨细胞、纤维环细胞及髓核细胞合成代谢具有显著促进作用,已成为国内外众多学者的研究热点。笔者就BMP-7及其对椎间盘退变修复作用的研究进展做一综述。
- 辛洪奎张超阮狄克
- 关键词：骨形态发生蛋白-7椎间盘退变椎间盘退行性疾病纤维环细胞BMP-7DISC
