陈中灿
- 作品数：25 被引量：91H指数：5
- 供职机构：北京军区总医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省名医工程研究项目广东省科技计划工业攻关项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 高危人乳头瘤病毒58型E6基因的克隆及表达
- 2004年
- 目的 :获得含人乳头瘤病毒 (HPV) 5 8型E6基因的克隆及表达重组体并体外表达E6蛋白 .方法 :聚合酶链方法从 1例宫颈腺癌患者癌组织DNA中获得HPV5 8E6基因 ,并将其与克隆载体pGEM TEasy连接 ,获得重组体HPV5 8 E6 pGEM T ,继之以双酶切将E6基因与同样双酶切的线性化的pRSET A表达载体连接 ,得到E6表达重组体pRSET 5 8E6 ,转化E .coliBL2 1 (DE3) ,用IPTG诱导表达 .结果 :从 1例宫颈癌患者中成功获得了少见HPV5 8型的E6基因并构建了其重组表达载体 .经IPTG诱导后可表达Mr2 4 0 0 0的 6HisHPV5 8E6融合蛋白 ,表达量占菌体蛋白的 1 0 % .结论 :成功获得了少见HPV5 8高危型的E6基因 ,并可在E .
- 张菊陈中灿白玉杰高艳娥何玉宪阎小君
- 关键词：宫颈肿瘤
- 宫颈癌与HLA等位基因DQB1＊03、DR15的相关性研究被引量：9
- 2004年
- 目的 :探讨我国陕西地区宫颈癌的发生与人类白细胞抗原 (HLA) DQB1 0 3、DR15等位基因的相关性 .方法 :采用序列特异性引物的聚合酶链式反应 (PCR SSP)方法 ,扩增HLA等位基因DQB1 0 3、DR15的目的DNA片段 (分别为 79、197bp) ,分析两对等位基因在陕西地区宫颈癌患者和正常人中分布频率的差异 .结果 :4 5名宫颈癌患者组中DQB1 0 3等位基因频率显著高于 5 0名健康对照组 ,DR15等位基因频率在两组中的分布无显著差异 .结论 :HLA等位基因DQB1 0 3可能与宫颈癌的发生具有相关性 ,DR15可能与宫颈癌的发生不存在关联 .
- 夏琳张菊陈中灿白玉杰罗进杨浩阎小君
- 关键词：宫颈肿瘤HLA抗原
- TAG-1对U251细胞活力的影响及相关基因调节机制研究
- 2010年
- 目的探讨TAG-1对U251细胞的生长活力和粉样前体蛋白胞内段（AICD）,p53和表皮生长因子受体（EGFR）~因表达变化的影响。方法以MTT法检测不同浓度TAG．1（0、5、10、20μg／mL）对U251细胞活力影响；免疫荧光细胞化学法观察U251细胞8淀粉样前体蛋白（APP）的表达；TUNEL法检测TAG-1对U251细胞凋亡形态学变化的影响：Real-time PCR检测TAG-1对U251细胞AICD,p53和EGFR基因表达的调控。结果TAG．1没有抑制U251细胞的生长．相反表现出一定的促生长效应；APP广泛表达于U251细胞膜；在TAG．1浓度为10μg/mL时，U251细胞形态学检测没有发现明显的凋亡细胞，但AICD,p53和EGFR基因表达增加。结论TAG-1在胶质瘤的增殖中发挥重要作用，但未发现其能通过TAG-1／APP／AICD／p53或TAG-1／APP，AJCD／EGFR信号途径促进U251细胞凋亡。
- 常海刚姜晓丹陈中灿杨璐军法志强杜谋选
- 关键词：神经胶质瘤细胞凋亡
- 外源性绿色荧光蛋白和蛋白酪氨酸激酶受体B基因在大鼠骨髓源性神经干细胞内稳定表达的检测特征
- 2007年
- 目的:利用本实验室构建的携带蛋白酪氨酸激酶受体B基因的荧光真核表达质粒-pEGFP-C2-蛋白酪氨酸激酶受体B,转染大鼠骨髓基质细胞源性的神经干细胞,观察其在神经干细胞中的表达情况。方法:实验于2005-06/2006-06在南方医科大学珠江医院神经医学研究所完成。实验选用SD大鼠进行骨髓的采集及骨髓基质细胞的获取,培养1周后得到较纯化的骨髓基质细胞,进行细胞传代培养,传代培养的细胞加入10%胎牛血清及维甲酸以诱导骨髓基质细胞向神经干细胞分化。细胞培养2周后,pEGFP-C2-蛋白酪氨酸激酶受体B经LIPOEECTAMINE.2000脂质体转染培养的大鼠骨髓基质细胞源性的神经干细胞,24h后观察绿色荧光蛋白的瞬时表达情况,以酶切和测序鉴定质粒的正确性,凝胶电泳鉴定PCR产物大小,应用免疫组化定量分析法检测转染该质粒的细胞中蛋白酪氨酸激酶受体B的含量,并与正常细胞作比较。结果:①细胞转染24h后,荧光显微镜下可观察到绿色荧光蛋白的表达,表达率约18.1%,随着培养时间的延长,表达绿色荧光蛋白的细胞数量逐渐增多,于1周左右达到高峰,表达率约42.8%,继续观察1个月未发现荧光表达减弱。②酶切、PCR和DNA序列鉴定均证实插入片段的正确性,扩增的PCR产物凝胶电泳结果与设计引物间的片段大小1461bp完全一致,转染细胞电泳未见目的条带。③免疫组化结果表明,所有细胞均含有蛋白酪氨酸激酶受体B抗原成分,转染pEGFP-C2-蛋白酪氨酸激酶受体B的细胞该抗原成分较未转染细胞明显增加(19.76±3.98,32.17±6.29,P<0.05)。结论:LIPOEECTAMINE.2000是一种简单而高效的转染大鼠骨髓基质细胞源性神经干细胞的方法,转染的pEGFP-C2-蛋白酪氨酸激酶受体B基因在细胞内可以稳定表达,增强型绿色荧光蛋白可以作为该基因表达的标记。
- 代广辉陈中灿修俊刚徐如祥姜晓丹黄涛杜谋选
- 关键词：绿色荧光蛋白骨髓基质细胞基因转染
- 超顺磁性氧化铁对大鼠神经干细胞生物学活性的影响被引量：16
- 2007年
- 目的初步研究利用超顺磁性氧化铁标记大鼠骨髓基质细胞来源的神经干细胞及其对细胞活力、增殖等生物学活性的影响,并确定最佳标记浓度。方法无菌条件下取大鼠股骨骨髓,梯度密度离心法分离得到骨髓基质细胞。体外培养、诱导成神经干细胞,使用不同终浓度的(6.25、12.5、25、37.5、50μg/ml)Ferumoxides(超顺磁性氧化铁)标记神经干细胞,采用普鲁士蓝染色、MTT法、流式细胞仪、透射电镜等方法鉴定Ferumoxides标记神经干细胞的效率及对细胞活力、增殖等生物学特性的影响。结果Ferumoxides可以高效率标记神经干细胞,标记效率在90%以上。普鲁士蓝染色显示标记的神经干细胞胞质内存在细小蓝色铁颗粒,细胞呈淡蓝至深蓝色,颜色的深浅与所加Ferumoxides的剂量成正相关。电镜结果显示标记的神经干细胞胞质内含有许多包裹铁颗粒的囊泡,主要集中在胞体上。当Ferumoxides终浓度高于25μg/ml时,Ferumoxides颗粒在细胞内聚集成团块状,量较多,在一定程度上影响了细胞超微结构的观察;低于25μg/ml时,Ferumoxides颗粒散布于细胞胞质内,并随着浓度的降低,Ferumoxides颗粒在胞质内分布越分散,量越少。MTT及流式细胞仪结果显示Ferumoxides终浓度大于25μg/ml时则对细胞活力、增殖、凋亡有一定影响,小于等于25μg/ml时对细胞活力、增殖无明显影响。结论利用Ferumoxides在体外标记神经干细胞是一种可行的实验方案,其最佳终浓度为25μg/ml。
- 代广辉修俊刚周振军陈中灿徐如祥姜晓丹杜谋选
- 关键词：骨髓基质细胞神经干细胞超顺磁性氧化铁
- 荧光偏振方法快速检测HPV16 E7第29位密码子点突变被引量：4
- 2004年
- 目的 :通过TDI FP方法检测宫颈病变组织中HPV1 6E7基因第 2 9位密码子突变 (A→G)并探讨其与宫颈癌的相关性 ,同时建立一种HPV点突变检测的新方法 .方法 :以 5 3例HPV1 6阳性宫颈组织为研究对象 .首先PCR扩增含待检测位点的靶基因片段 ,然后用TDI FP方法检测荧光素碱基的掺入情况 ,判断所研究位点的基因型 .结果 :宫颈浸润癌组织中HPV1 6E7第 2 9位密码子的突变率为 4 3.4 8%(1 0 / 2 3) ,对照组为 1 0 .0 0 % (2 / 2 0 ) ,病例组为 39.39% (1 3/33) ,组间突变率差异有显著性 (P <0 .0 5 ) .该法与随机抽查标本测序结果一致率为 1 0 0 % .结论 :本研究中HPV1 6病毒发生E7第 2 9位密码子突变的情况与其他地区相比存在差异 ;HPV点突变TDI FP检测方法是一种快速简便。
- 陈中灿张菊高艳娥夏琳白玉杰阎小君
- 关键词：人乳头瘤病毒突变宫颈癌荧光偏振
- 宫颈癌组织HPV58的检测及其E7基因的克隆和表达被引量：3
- 2004年
- 目的 检测宫颈癌组织中人乳头瘤病毒 5 8型 (HPV5 8)并克隆表达其E7基因。方法采用GP5 +/GP6 +引物系统扩增 5 8例宫颈癌组织 ,将荧光偏振 (FP)检测技术与模板指导的末端延伸反应 (TDI FP)结合 ,检测HPV5 8,确定HPV5 8感染阳性宫颈癌组织。用特异引物从HPV5 8阳性标本中扩增HPV5 8早期表达蛋白E7基因 ,将其连入pGEM TEasy载体 ,获得克隆重组体HPV5 8E7 pGEM T ,并测序验证。将E7基因与pRSET A融合表达载体连接 ,获得E7表达重组体pRSET 5 8E7,转化大肠杆菌BL2 1(DE3) ,并用IPTG诱导表达。结果 5 8例宫颈癌标本中 ,HPV5 8阳性 10例 ,占 5 2例HPV阳性标本的 19.2 %。从其中扩增到了HPV5 8E7基因并构建了其克隆和表达重组体。其表达重组体经IPTG诱导后 ,可表达Mr16× 10 3 的HPV5 8E7His6融合蛋白 ,表达量占菌体蛋白的 30 %。结论 欧美国家少见的高危HPV5 8在中国陕西人宫颈癌组织中并不少见。HPV5 8E7重组表达体可在大肠杆菌中高效表达 ,为HPV5
- 高艳娥张菊陈中灿宋天保赵艳张格林阎小君
- 关键词：E7基因宫颈癌组织阳性标本重组体克隆表达
- 高危人乳头瘤病毒基因变异与宫颈癌的关系
- 2004年
- 近年来 ,高危人乳头瘤病毒 (HPV)基因变异和宫颈癌进展的关系日益受到重视。已经发现了一些可能对诊断和治疗有参考意义的基因变异。本文对高危HPV的重要变异与表达调控、细胞转化及永生化。
- 陈中灿张菊白玉杰阎小君
- 关键词：人乳头瘤病毒基因变异宫颈癌
- 线栓法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型的改进被引量：32
- 2007年
- 目的研究一种稳定、简便的大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型制作方法。方法采用健康SD雄性大鼠,线栓法制作局灶性脑缺血再灌注损伤模型,结扎颈总动脉(CCA)及颈外动脉(ECA),不结扎翼腭动脉,用5-0头皮针于CCA结扎的远端刺一小口捅入栓塞线造成缺血,拔出线栓形成再灌注。通过神经功能缺损评分、红四氮唑(TTC)染色和病理学检查等方法评价该模型的可靠性。结果动物麻醉后一般只需15 min左右即可完成手术,术后大鼠神经功能缺损明显,TTC染色示脑梗塞区苍白,病理学检查显示典型病理表现。结论该方法缺血效果明确可靠,术式简便,手术时间短,不需具备显微手术操作技巧,是一种理想的制作局灶性脑缺血再灌注损伤模型的方法。
- 谢惠芳徐如祥陈中灿
- 关键词：缺血再灌注动物模型
- USPIO标记大鼠骨髓源性神经干细胞移植脑皮层影像及形态学初步研究被引量：3
- 2007年
- 目的将超小超顺磁性氧化铁（USPIO）Sinerem标记的大鼠骨髓源性神经干细胞移植鼠脑后，初步观察其在大脑中的活性、迁移和整合情况，确定MRI成像示踪Sinerem标记神经干细胞的可行性。方法分离SD大鼠骨髓基质细胞，体外培养诱导成骨髓源性神经干细胞。将Sinerem氧化铁和神经干细胞共孵育培养过夜。采用普鲁士蓝染色和透射电镜确定细胞内铁的摄取、定位情况。将标记细胞立体定向移植微注射到大鼠脑皮层。在不同时间点以SE序列T2WI行4．7T磁共振干细胞成像示踪，然后用组织学方法观察标记细胞在脑内的转归情况。结果Sinerem标记神经干细胞效率为98％～100％，普鲁士蓝染色显示铁颗粒存在胞质中，电镜显示铁颗粒集中于内涵体／溶酶体中；移植细胞体内的T2WI信号强度明显降低．可在4周时检测到细胞沿胼胝体迁移；组织学检测结果表明标记后的细胞可在脑内存活，并能沿神经纤维迁移。结论USPIO能有效地标记骨髓源性神经干细胞，利用磁共振成像可进行大脑中活体示踪监测。
- 陈中灿徐如祥杨志军姜晓丹樊娟修俊刚代广辉魏丽雷皓
- 关键词：神经干细胞
