高军
- 作品数：2 被引量：5H指数：1
- 供职机构：中国人民解放军324医院更多>>
- 发文基金：重庆市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 负载hTERT调控相关miR-138慢病毒的包装及鉴定
- 2011年
- 目的:构建hTERT(人端粒酶逆转录酶)调控相关miR-138慢病毒表达载体。方法:化学合成miR-138前体序列,连接到包含U6启动子及GFP(绿色荧光蛋白)报告基因的慢病毒载体pGCL-GFP中,获得重组质粒,经双酶切和测序鉴定后,与慢病毒包装质粒pHelper 1.0及pHelper 2.0共转染至HEK 293T细胞包装病毒,并对病毒进行鉴定。结果:双酶切和测序结果证实miR-138前体核苷酸链序列插入正确,包装的慢病毒滴度达7×107TU/ml;包装成功的慢病毒可有效增加感染细胞内miR-138的表达丰度,并可下调hTERT表达水平。结论:成功包装并鉴定人miR-138慢病毒表达载体。
- 陈陵熊晓峰高军邹利全张方征王洪斌
- 关键词：微RNAS慢病毒属人端粒酶逆转录酶转录后调控
- 负载人miR-29a复制缺陷型腺病毒的包装及鉴定被引量：5
- 2011年
- 目的包装负载人miR-29a前体全长cDNA(pre-miR-29a)的复制缺陷型腺病毒载体(Ad-miR29a)。方法将pre-miR-29a全基因合成后,插入腺病毒穿梭质粒pDC315,与腺病毒包装质粒pBHGloxDeltaE13、Cre共转染人胚肾293细胞(HEK293),包装重组慢病毒Ad-miR29a,扩增、收集并纯化。对纯化后的Ad-miR29a进行滴度测定、感染性鉴定及PCR鉴定。结果包装成功的腺病毒载体具有良好的感染性,纯化浓缩后的病毒滴度可达5×109 pfu/ml。PCR鉴定Ad-miR29a可扩增出pre-miR-29a特异片段,而对照Ad-LacZ不能扩增出pre-miR-29a特异片段。Ad-miR29a感染人胃癌SGC-7901细胞后,可明显提高miR-29a的表达丰度。结论成功包装了负载miR-29a的复制缺陷型腺病毒载体,为进一步研究microRNAs在肿瘤发生发展中的作用,以及miR-29a在肿瘤治疗中的价值奠定了基础。
- 高军范亚川王军熊晓峰吴友良刘志鹏陈陵李学成
- 关键词：微小RNAS人胚肾293细胞
