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他克莫司工程菌的构建及初步发酵工艺优化被引量：1: 2016年; 基于他克莫司的生物合成途径和机制,根据生物合成基因簇序列设计引物,通过PCR扩增天蓝色链霉菌(Streptomyces coelicolor)乙酰CoA羧化酶和游动放线菌(Actinoplanes sp.)N902-109赖氨酸环化脱氨酶/非核糖体肽合成酶(rapL/rapP)基因,将其整合到筑波链霉菌(Streptomyces tsukubaensis)No.9993基因组上,成功构建了分别过表达乙酰CoA羧化酶基因和rapL/rapP基因的重组工程菌,分别命名为SIPI-F002和SIPI-F003。试验结果显示,添加0.1%丙酸钠和0.01%油酸甲酯均可以促进工程菌SIPI-F002合成他克莫司,相应摇瓶产量为392和383mg/ml。调整发酵培养基复合碳源为4%糊精和2%可溶性淀粉,可以促进SIPI-F003发酵生产他克莫司,摇瓶产量达到694mg/ml。; 王亚黄鹤边佳昕周斌胡海峰; 关键词：他克莫司基因工程菌 PCR扩增

乳酸菌报告系统的建立: 伴随着很多乳酸菌全基因序列的测序完成,利用最新的分子生物学技术可以从多方面对乳酸菌进行修饰和改造,优化其功能特性,启动子在基因改造中有着及其重要的作用,在表达载体中,表达量的多少往往与启动子的强弱有很大关系。本文旨在构建...; 宋馨黄鹤熊智强夏永军艾连中杨晟; 关键词：乳酸菌启动子 GFP; 文献传递

Actinoplanes sp.N902-109全基因组序列测定及分析被引量：3: 2015年; Actinoplanes sp.N902-109是继吸水链霉菌ATCC292953后分离的第二株能够产生雷帕霉素的放线菌。采用Roche 454GS FLX测序技术和Sanger法PCR测序技术,我们首次完成了Actinoplanes sp.N902-109全基因组序列测定。Actinoplanes sp.N902-109基因组为环状,长度为9228054bp,GC含量71.3%,编码8212个蛋白,其中5460个编码蛋白被注释有明确的生物学功能。应用Anti SMASH和NRPS predictor软件预测基因组中存在22个次级代谢生物合成基因簇,包含首次鉴定的完整的游动放线菌来源雷帕霉素生物合成基因簇。利用Mummer和Mauve软件对N902-109和已公布的游动放线菌属Actinoplanes SE50/11 0和Actinoplanes missouriensis 431两株菌株全基因组进行比较分析。通过Actinoplanes sp.N902-109基因注释和比较基因组学分析,在全基因组水平上了解Actinoplanes sp.N902-109的遗传物质基础,为开展Actinoplanes sp.N902-109的代谢调控研究和遗传重组改造奠定基础。; 黄鹤芦现杰胡海峰; 关键词：ACTINOPLANES 基因组测序雷帕霉素生物合成基因簇

热葡糖苷酶芽孢杆菌D型海因酶基因的克隆与表达: D-海因酶（EC3.5.2.2,简称DHase）是海因法制备D-氨基酸的关键酶,在生产上,需要高比活和高稳定性的D-海因酶,以降低D-氨基酸生产中的酶成本。来源于热葡糖苷芽孢杆菌的D-海因酶具有高比活和耐高温的性质,我们...; 唐玮黄鹤陶荣盛蒋宇姜卫红杨晟; 文献传递

子囊霉素工程菌的构建及初步发酵工艺优化被引量：1: 2021年; 基于子囊霉素的生物合成途径和机制,根据生物合成基因簇序列设计引物,应用PCR扩增游动放线菌(Antinoplanes sp.)N902-109赖氨酸合成途径关键基因——天冬氨酸激酶/天冬氨酸半醛脱氢酶/磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(lysC/asd/ppc)基因,整合至子囊霉素产生菌株吸水链霉菌(Streptomyces hygroscopicus)中,成功构建了过表达lysC/asd/ppc基因的重组工程菌,命名为AS-07。将AS-07工程菌进行摇瓶发酵研究,结果表明,与野生菌相比,子囊霉素的产量提高了25%。通过初步优化摇瓶发酵工艺,AS-07工程菌与野生菌相比,子囊霉素的产量提高了85%。; 王志娟黄鹤田勋马宁胡海峰; 关键词：基因工程菌发酵工艺优化

游动放线菌产雷帕霉素的发酵工艺改进被引量：4: 2014年; 以游动放线菌Actinoplanes sp.SIPI-8011为出发菌株,通过优化其发酵培养基组分及含量,促进雷帕霉素的合成。结果显示,培养基中添加甘油作为碳源,并分阶段控制pH值,能够提高雷帕霉素产量,而添加甜菜碱能够减少副产物27-O-去甲基雷帕霉素的生成。于50 L发酵罐上进行放大培养,结果显示,在优化工艺下,50 L发酵罐中雷帕霉素的产量为920ug/ml,比原工艺提高了38.8%,27-O-去甲基雷帕霉素含量较优化前减少了83.5%。; 陈昌发黄鹤张长清胡海峰; 关键词：免疫抑制剂雷帕霉素发酵

代谢工程策略促进游动放线菌N902-109雷帕霉素的合成: 雷帕霉素(Rapamycin)是由放线菌合成的大环内酯类化合物,具有卓越的免疫抑制,抗肿瘤等药用活性,不仅是目前临床应用广泛的重要免疫抑制剂,其多种衍生物已被FDA批准用于癌症的治疗.目前报道的两种天然合成雷帕霉素的微生...; 黄鹤高苹胡海峰; 关键词：雷帕霉素代谢工程

微生物药物合成基因簇的进化与结构多样性被引量：2: 2016年; 微生物产生的次级代谢产物为微生物药物的重要来源,大多由生物合成基因簇编码的酶蛋白催化合成。研究微生物药物生物合成基因簇的进化有助于了解微生物药物结构多样性的遗传基础以及其生理生态学意义,对新化合物挖掘和新药发现具有指导作用。本文以代表性的聚酮类化合物为切入点,以负责合成聚酮化合物骨架的聚酮合酶(PKS)为例,综述Ⅰ型PKS的进化起源,基因簇在不同微生物之间的传递及同一种微生物内部的基因簇进化机制。; 黄鹤胡海峰; 关键词：微生物药物生物合成基因簇进化

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黄鹤