龙健儿 作品数:23 被引量:71 H指数:6 供职机构: 复旦大学 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 国家重点基础研究发展计划 艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治专项 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 更多>>
RNA编辑酶ADAR1对EV71感染及变异的影响 2017年 目的研究RNA编辑酶腺苷酸脱氨酶(adenosine deaminase acting on RNA,ADAR1)对新型肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)感染及变异的影响。方法运用RNAi技术筛选ADAR1基因沉默稳定细胞株,通过MTT分析病毒感染后细胞活力变化、噬斑形成分析病毒滴度及细胞对病毒的敏感性,以及Western blot测定病毒蛋白表达水平等,分析ADAR1对EV71感染的影响。由于ADAR1介导的RNA编辑可使基因形成A-G或T-C突变,为确定ADAR1影响EV71感染是否与其编辑EV71基因组导致病毒变异有关,对EV71流行区EV71的突变特征进行分析;并利用EV71感染ADAR1基因沉默细胞,通过对病毒基因组测序分析,研究ADAR1是否直接编辑EV71基因组。结果 ADAR1基因沉默后,与对照细胞相比,病毒感染细胞的存活率下降更快,并形成更多、更大的噬斑。病毒感染细胞中的VP1蛋白和细胞培养基上清中的病毒滴度均明显增加。EV71突变特征分析表明,虽然A-G和T-C之间的变异是病毒突变的主要类型,但EV71感染实验初步证明,ADAR1并不直接编辑EV71病毒基因组。结论 ADAR1可能具有抗EV71感染的作用,但ADAR1可能并不直接编辑EV71基因组。 刘晴晴 常章梅 白金金 王艳 龙健儿关键词:EV71 ADAR1 RNA编辑 病毒突变 双荧光标记法定量检测Igf-2r在克隆牛组织中的表达 2008年 目的建立克隆牛Igf-2rmRNA实时定量PCR的检测方法,并探讨Igf-2rmRNA的表达在克隆牛发育中的作用。方法用Trizol抽提正常及克隆牛的脑、肺、心、肝组织RNA,运用本研究建立的实时荧光定量PCR方法检测各组织中Igf-2rmRNA的表达情况。结果正常牛各组织中每μg总RNA中含Igf-2rmRNA拷贝数分别为107.39(脑)、108.04(肺)、107.25(心)、107.99(肝)。克隆牛中,每μg总RNA中含Igf-2rmRNA表达水平变化较大。与正常牛相比,克隆牛不同组织中Igf-2rmRNA的表达水平变化较大,在同一克隆牛的不同组织以及不同克隆牛的同一组织中Igf-2rmRNA的表达水平相差较大,提示在克隆牛不同组织中Igf-2rmRNA的表达水平不一。结论Igf-2rmRNA的表达水平与动物的生长发育有一定的关系,Igf-2r基因的表达异常可能与胎牛过度肥大和围产期死亡等现象有一定的关系。对克隆牛各组织中Igf-2rmRNA的表达的精确定量有助于进一步研究Igf-2r基因在动物生长发育中所起的作用。 蔡霞 龙健儿关键词:克隆牛 实时荧光定量PCR 应用生物信息学寻找山羊新的microRNA分子及其实验验证 被引量:7 2008年 microRNA(miRNA)是一类长约22个碱基的非编码RNA分子,在转录后水平调节基因的表达及其在细胞的增殖、分化、凋亡等过程中起着重要的调控作用。根据miRNA分子具有一定的保守性,文章将人、小鼠、牛、猪和狗5种哺乳动物已知的miRNA分子与NCBI公布的与山羊具有极高同源性的绵羊基因组序列对比,获得11条miRNA候选分子,然后通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)验证,发现在山羊脑组织中这11条分子均有表达,肝脏组织中有5条分子表达,初步确定为山羊新的miRNA分子,为寻找山羊miRNA提供了新的思路。 陈海漩 严忠海 龙健儿 颜景斌 黄英关键词:MIRNA 山羊 生物信息学 MicroRNA对基因表达调控的研究进展 被引量:3 2007年 MicroRNA(miRNA)是一类长约21~25nt的内源性单链小分子RNA(small RNA),可调节与其序列互补mRNA的表达,普遍存在于高等生物界,在不同物种间具有高度的保守性,表达具有细胞特异性或组织特异性。通过与mRNAs特异性的碱基配对,引导靶序列进入降解或(和)翻译抑制,以此参与个体发育、细胞分化、细胞增殖、物种进化以及疾病发生过程中的基因表达调控。该文简述了近年对miRNA的形成、功能、作用机制等研究的新进展,并对其在基因沉默中的作用作了重点概述。 严忠海 龙健儿关键词:MIRNA 基因调控 基因沉默 重组鸭IFN-γ基因的克隆表达及在细胞与动物体内的功能研究 乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus,HBV)是引起人类乙型肝炎的病原体.Schultz等在鸭乙型肝炎病毒(duck hepatitis B virus,DHBV)感染鸭原代肝细胞的模型中,证明重组鸭IFN-... 龙健儿关键词:鸭乙型肝炎病毒 DNA免疫 文献传递 基于杂交链反应的新一代RNA-FISH技术检测EV-A71 RNA及其与病毒3D聚合酶的相互作用 2023年 RNA荧光原位杂交(RNA-fluorescence in situ hybridization,RNA-FISH)技术利用荧光标记的核苷酸探针,通过互补链杂交,对细胞或组织中特定的RNA序列进行检测和定位。由于RNA-FISH产生的阳性信号较弱,需要结合特异性信号放大,提高信噪比。但传统信号放大技术的背景难以消除,无法定量且分辨率低,是RNA-FISH技术应用的巨大障碍。本文基于第3代杂交链反应(hybridization chain reaction version 3.0,HCR v3.0),利用一对分裂式探针消除非特异杂交背景,并引发荧光信号放大反应,建立了针对肠道病毒A71(enterovirus-A71,EV-A71)RNA的敏感、特异的FISH检测方法,并将该技术与蛋白免疫荧光(immunofluorescence,IF)检测结合,通过高分辨率激光共聚焦成像,成功地在单个细胞水平上检测了EV-A71感染细胞后病毒RNA与其聚合酶3D蛋白的分布变化和相互作用情况,并对细胞中病毒RNA和3D蛋白进行定量。发现相较于传统定量方法,如逆转录定量聚合酶链反应和免疫印迹,新一代RNA-FISH技术在单个细胞水平上病毒RNA和3D聚合酶的表达情况与群体细胞检测的结果在趋势上有明显差异。这说明,基于杂交链反应的新一代RNA-FISH技术,可以克服群体细胞数量增减掩盖病毒组分变化的缺点,从而真实反映病毒在单个细胞中的变化。 邢一凡 傅美贤 龙健儿STAT3在新型肠道病毒71型(EV71)感染和复制中的作用初步研究 被引量:2 2015年 目的研究STAT3(signal transducer and activator of transcription 3)对新型肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)感染及复制的影响。方法观察EV71感染横纹肌肉瘤细胞后STAT3的动态表达;利用慢病毒载体下调或过表达STAT3技术,观察细胞在改变STAT3表达后,对EV71感染细胞后病毒VP1表达、形成蚀斑和病毒滴度的影响,研究STAT3对EV71感染和复制的影响。结果 EV71感染可明显下调细胞STAT3-Tyr705磷酸化(p-STAT3)水平。在STAT3表达稳定下调的细胞中,p-STAT3水平也下调,这有利于EV71病毒感染和复制。而过表达STAT3的细胞内,p-STAT3水平也上调,对EV71感染和复制的效应与上述STAT3下调的结果相反。免疫共聚焦和蚀斑分析发现高表达p-STAT3的细胞不易被EV71感染。结论EV71感染可明显下调p-STAT3水平,并促进病毒的复制。STAT3影响EV71的感染和复制,可能主要通过STAT3的磷酸化水平影响细胞对病毒的易感性。 王艳 卞良 刘晴晴 熊鹰 李泽阳 龙健儿关键词:EV71 STAT3 横纹肌肉瘤细胞 复方药物ZL-1在鸭乙型肝炎病毒实验感染模型中抗病毒作用的研究 被引量:11 2003年 目的 研究中药复方ZL 1在鸭乙型肝炎病毒 (DHBV)持续性感染模型中抗嗜肝DNA病毒的作用。方法应用中药复方ZL 1治疗实验感染鸭 ,口服给药 ,剂量 5 0 0mg·kg-1·d-1,分 2次服用 ,连续 4周。采用斑点分子杂交和Southern印迹杂交检测治疗后感染鸭血清和肝脏中病毒的动态变化。同时以拉米夫定及安慰剂作为对照组。结果 复方药物ZL 1治疗后血清中DHBVDNA均数从 3 .6× 10 10 拷贝 /ml下降至 0 .9× 10 10 拷贝 /ml(P <0 .0 1) ,抑制病毒率为 75 % ,但尚不能清除病毒血症 ,肝组织中总DHBVDNA和DHBV超螺旋型DNA量无明显减少 ,停药观察 2周 ,病毒复制反弹不明显。拉米夫定治疗后可显著降低病毒血症 (P <0 .0 1) ,抑制病毒率达 99% ,同时肝组织中总DHBVDNA和DHBV超螺旋型DNA量减少 ,但停药观察 2周 ,病毒复制反弹明显。安慰剂组 (口服生理盐水 )治疗前后病毒水平的差异无显著性 (P >0 .0 5 )。结论 复方药物ZL 1治疗4周可使感染鸭病毒血症降低 ,但不能清除病毒血症 。 牛巍 张继明 王文逸 龙健儿 曾毅 李泽琳 瞿涤关键词:乙型肝炎病毒 抗病毒 外周血单个核细胞IFN-γ mRNA的测定及应用 被引量:1 2003年 目的 研究鸭IFN γ(DuIFN γ)在感染及控制病毒过程中的作用和机制。方法 基于β actin的高度保守序列设计引物 ,通过RT PCR方法获得了 β actin的部分cDNA为看家基因 ,然后构建DuIFN γ靶片段的竞争性内参照 ,建立检测DuIFN γ基因转录的半定量竞争性RT PCR方法。结果 建立了检测DuIFN γ基因转录的半定量竞争性RT PCR方法 ,并检测了在PHA刺激下鸭外周血单核细胞IFN γmRNA动态变化 ,结果表明PHA刺激 2 4~ 36h ,DuIFN γmRNA转录量最高。以此方法对用DHBVpreSDNA或与IFN γDNA共免疫DHBV感染鸭进行了测定 ,结果表明IFN γ表达质粒作为DNA免疫佐剂 ,可以增强宿主IFN γ的应答。结论 IFN γ表达质粒为DNA疫苗的有效佐剂。DuIFN γ基因转录的半定量竞争性RT PCR方法为研究鸭IFN γ在DHBV感染及清除中的作用和机制奠定了基础。 龙健儿 黄莉娜 秦智强 王文逸 陈敏婕 瞿涤关键词:外周血 单个核细胞 MRNA 乙型肝炎病毒 MiRNAs在干扰素抗病毒中的作用 2013年 干扰素(interferons,IFNs)是一种抗病毒免疫反应的重要细胞因子,深入研究干扰素抗病毒的作用机制具有重要意义。由于IFNs是哺乳动物抗病毒固有免疫的主要部分,而microRNAs(miRNAs)在一系列生物学过程如细胞增殖、分化、凋亡及免疫系统发育与应答反应中发挥重要调节作用,因此细胞或病毒编码的miRNAs与IFNs相互调控可作用于细胞的抗病毒反应。研究证明miRNAs可调控IFNs,IFNs亦可调控miRNAs。试图对miRNAs在IFNs抗病毒中的作用作一概述。 卞良 龙健儿关键词:MIRNAS 干扰素 抗病毒