冯敏华
- 作品数：7 被引量：12H指数：3
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- 多药耐药基因、谷胱甘肽S-转移酶特异性siRNA逆转K562/A02细胞多药耐药
- 2007年
- 目的研究多药耐药基因（mdr1）、谷胱甘肽 S-转移酶（GSTπ）特异性 siRNA 逆转K562/A02细胞多药耐药性。方法以 mdr1 mRNA 第79～99和 GSTπmRNA 第308～327核苷酸为作用靶点,合成针对靶区域序列的 siRNA,克隆入 pSilence2.1-U6 neo,克隆产物为 pSilence-mdr1和pSilence-GSTπ,脂质体介导下转染 K562/A02细胞。用实时荧光定量 PCR 检测 K562/A02细胞 mdr1和 GSTπ mRNA 的表达;流式细胞仪检测细胞凋亡;MTT 法检测多柔比星的半数抑制浓度(IC50)。结果经酶切、测序分析表明,成功构建 siRNA 真核表达载体。经 pSilence-mdrl 转染后的 K562/A02细胞株 mdr1 mRNA 表达量下降了71.5%,从（2.8±1.65）×108拷贝/μg RNA 下降至（3.9±2.37）×107拷贝/μg RNA（P<0.01）;同时 pSilence-GSTπ作用后,K562/A02细胞 GSTπmRNA 表达量较显示空载体 pSilence2.1-U6转染组下降了39.8%,从（2.3±1.14）×105拷贝/μg RNA 下降至（5.4±2.45）×104拷贝/μg RNA（P<0.01）;流式细胞仪显示空载体 pSilence2.1-U6转染组细胞凋亡率为（11.65±4.06）%,pSilence-mdr1和 pSilence-GSTπ共转染组细胞凋亡率为（44.98±11.27）%（P<0.01）;空载体转染组耐药指数为23,pSilence-mdr1和 pSilence-GSTπ共转染组耐药指数降低为7,IC50值从转染前的（1.16±0.38）mmol/ml 下降为（0.33±0.04）mmol/ml（P<0.01）。结论 siRNA 真核表达载体pSilence-mdr1、pSilence-GSTπ对 K562/A02细胞株多药耐药性具有明显的下调作用。
- 冯敏华张弢顾静文林果为
- 全文增补中
- 血管平滑肌细胞的调控与PTCA术后再狭窄被引量：3
- 2004年
- 冯敏华施海民顾静文
- 关键词：血管平滑肌细胞PTCA再狭窄经皮腔内冠状动脉成形术冠心病
- MDR1、GSTπ特异性siRNA真核表达载体的构建及表达被引量：3
- 2006年
- 目的构建多药耐药基因(MDR1)、谷胱甘肽S-转移酶(GSTπ)特异性小干扰RNA(siRNA)真核表达载体并检测其表达。方法参照siRNA模板设计原则,设计并化学合成2条siRNA模板序列,退火后将其插入质粒pSilencer2.1-U6,限制性酶切和基因测序进行鉴定。脂质体介导下转染K562/Adr细胞,实时荧光定量PCR分析MDR1、GSTπmRNA的表达,荧光免疫组化检测Pgp、GSTπ蛋白的表达。结果重组质粒pSilenc-er2.1-MDR1、GSTπ经酶切、测序分析表明siRNA模板序列成功插入预计位点,并且序列正确。用pSilencer-mdr1、pSilencer2.1-GSTπ分别转染K562/Adr细胞株,mdr1mRNA表达量下降了71.5%,GSTπmRNA表达量下降了39.8%,荧光免疫组化显示Pgp、GSTπ表达均显著减少(P<0.01)。结论成功构建了MDR1、GSTπ特异性siRNA真核表达载体,该载体可不同程度逆转K562/Adr细胞的多药耐药。
- 冯敏华张弢顾静文林果为
- 关键词：多药耐药谷胱甘肽S-转移酶多药耐药基因
- RNA干扰及其在白血病多药耐药方面的研究进展被引量：5
- 2006年
- 白血病化疗失败的主要原因是白血病细胞的多药耐药,这是困扰临床肿瘤化疗的难题之一。RNAi是新近发展起来的一种全新的基因治疗手段。与常用的反义RNA技术等其他基因方法相比,具有经济、高效、高度特异性、操作简便、快速等优点。该技术为白血病多药耐药的基础和临床研究开辟了新思路,也为新的分子诊断和分子治疗提供可能。
- 冯敏华顾静文
- 关键词：RNA干扰白血病多药耐药
- siRNA诱发K562/Adr细胞凋亡的机制研究
- 2006年
- 目的研究siRNA引起K562/Adr细胞凋亡的机制。方法siRNA重组质粒pS ilence MDR-1和pS ilence neo-GSTπ转染K562/Adr细胞,透射电镜观察K562/Adr细胞超微结构变化;W estern b lot检测凋亡相关蛋白Bc l-2的改变。结果透射电镜下,pS ilence MDR-1和pS ilence neo-GSTπ转染组细胞胞浆浓缩、线粒体出现肿胀空泡样变、胞核内染色质浓集、染色质形成新月体样改变并有凋亡小体形成等典型的凋亡改变;W estern b lot结果表明pS ilence MDR-1和pS ilence neo-GSTπ转染组发生凋亡的K562/Adr细胞中,Bc l-2含量明显减少,与mock相比差异具有显著性意义(P<;0.05)。结论siRNA重组质粒pS ilence MDR-1和pS ilence neo-GSTπ通过抑制Bc l-2表达诱导K562/Adr细胞发生凋亡,逆转其多药耐药的发生,从而为siRNA逆转白血病多药耐药提供坚实的理论依据。
- 冯敏华张弢顾静文林果为
- 关键词：SIRNA细胞凋亡基因BCL-2白血病
- siRNA真核表达载体对白血病K562/ADR细胞凋亡的实验研究被引量：1
- 2006年
- 目的特异性siRNA真核表达载体pSilenceneoMDR1和pSilenceneoGSTπ对白血病多药耐药细胞K562/ADR凋亡的影响。方法特异性siRNA真核表达载体pSilenceneoMDR1、pSilenceneoGSTπ共转染K562/ADR细胞,同时以空载体pSilencer2.1U6转染K562/ADR细胞(mock)作为对照。流式细胞仪检测细胞凋亡;MTT法检测阿霉素的半数抑制浓度(IC50)。结果流式细胞仪显示空载体pSilencer2.1U6转染细胞凋亡率为(11.65±4.06)%,pSilenceneoMDR1和pSilenceneoGSTπ共转染组细胞凋亡率(44.98±11.27)%,重组质粒转染组与空质粒转染组比较,差异有统计学意义,P<0.01。K562/ADR细胞对阿霉素的耐药指数为24,空载体转染后耐药指数为23,pSilenceMDR1、pSilenceGST共转染后耐药指数降低为7,半数抑制浓度(IC50)值分别从转染前(1.16±0.38)mol/ml下降为(0.33±0.04)mol/ml,重组质粒转染组与空质粒转染组比较,差异有统计学意义,P<0.01。结论siRNA真核表达载体pSilenceMDR1和pSilenceneoGSTπ可以诱导K562/ADR细胞发生凋亡,并且可有效逆转K562/Adr细胞株的多药耐药。
- 冯敏华张弢顾静文林果为
- 关键词：SIRNA凋亡K562/ADR逆转多药耐药
- 稳定表达DLC-1的淋巴瘤细胞株模型的建立
- 2013年
- 目的建立稳定表达肝癌缺失基因-1(DLC-1)的淋巴瘤细胞株。方法将DLC-1真核表达质粒转染人淋巴瘤细胞株Raji,G418筛选,对获得的Raji细胞株进行Western blot鉴定。结果酶切和测序鉴定DLC-1的cDNA片段正确插入pcDNA3.1质粒,Western blot鉴定转染后Raji细胞株DLC-1高表达。结论成功建立了稳定高表达DLC-1的淋巴瘤细胞株。
- 黄波冯敏华张弢冷海燕陈字
- 关键词：肝癌缺失基因-1淋巴瘤
