刘家有 作品数:14 被引量:31 H指数:4 供职机构: 川北医学院 更多>> 发文基金: 四川省教育厅资助科研项目 国家自然科学基金 四川省教育厅科学研究项目 更多>> 相关领域: 医药卫生 文化科学 更多>>
乳腺癌中泛素蛋白连接酶E3A与泛素特异性蛋白酶25的表达及其临床意义 被引量:5 2020年 目的探讨泛素蛋白连接酶E3A(ubiquitin protein ligase E3A,UBE3A)与泛素特异性蛋白酶25(ubiquitin specific protease 25,USP25)在乳腺癌组织中的表达及与临床病理特征的相关性,并分析UBE3A与USP25在乳腺癌泛素蛋白酶体系统中的关系。方法采用免疫组织化学染色检测50例乳腺癌组织及癌旁相对正常组织石蜡标本中UBE3A与USP25的表达情况,并分析它们与乳腺癌患者临床病理特征的关系;shRNA-UBE3A慢病毒转染乳腺癌MCF-7细胞,通过荧光定量PCR与Western Blot检测UBE3A基因及蛋白的敲减水平,然后观察敲减UBE3A后USP25的表达水平。结果UBE3A与USP25在乳腺癌组织中的阳性表达率分别为64%、72%,而在邻近相对正常组织中的表达均为阴性,两者在乳腺癌组织与相对正常组织中的表达差异具有统计学意义(P<0.001);UBE3A的表达与淋巴结转移(P=0.001)、Ki-67的表达(P<0.001)相关,USP25的表达与组织学分级(P=0.046)、淋巴结转移(P=0.041)、Ki-67的表达(P=0.029)相关;shRNA-UBE3A慢病毒转染乳腺癌MCF-7细胞后,UBE3A蛋白及mRNA的表达均明显降低(P<0.001),且敲减UBE3A后USP25的蛋白及mRNA的表达明显降低(P<0.001)。结论UBE3A与USP25和乳腺癌细胞的增殖、转移等生物学行为相关,在乳腺癌泛素蛋白酶体系统中UBE3A与USP25功能作用明显增强且保持动态平衡,它们可能共同作用促进乳腺癌的的发生发展。 荣欣欣 黄红梅 李静佳 侯令密 刘家有 李金穗 谢少利 杨懿 邓世山关键词:乳腺癌 增殖 乳腺癌组织中USP20与Ezrin表达的相关性及临床意义 被引量:6 2023年 目的:通过观察乳腺癌组织中泛素特异性蛋白酶20(USP20)、Ezrin表达变化及其与临床病理特征之间的关系,探讨乳腺癌组织中USP20与Ezrin表达的相关性及临床意义。方法:免疫组织化学及免疫荧光方法用于检测USP20与Ezrin阳性细胞的表达变化以及细胞定位,并分析它们与乳腺癌患者临床病理特征的关系;shRNA-USP20慢病毒转染乳腺癌MDA-MB-231细胞,通过荧光定量PCR与Western Blot检测USP20基因及蛋白的过表达水平,然后观察过表达USP20后Ezrin基因和蛋白的表达变化。结果:USP20与Ezrin在乳腺癌组织中的阳性表达率分别为69.6%和78.5%,而在邻近相对正常组织中的表达均为阴性,与邻近相对正常组织相比,乳腺癌组织中USP20与Ezrin阳性表达均显著增加,差异均具有统计学意义(P<0.01);USP20与Ezrin阳性表达均主要在乳腺癌组织细胞质中,少量在细胞核。两者在乳腺癌组织中的阳性表达与患者的年龄、性别、WHO分级、分子分型和有无淋巴结转移均无关;shRNA-USP20慢病毒转染乳腺癌MDA-MB-231细胞后,USP20蛋白及mRNA的表达均明显增加(P<0.01),过表达USP20后Ezrin的mRNA表达不变,蛋白表达显著增加(P<0.01)。结论:乳腺癌组织中USP20和Ezrin表达呈正相关关系,且过表达USP20后Ezrin蛋白表达显著增加,USP20和Ezrin可能共同促进乳腺癌发生发展,其机制可能与USP20去泛素化作用有密切关系,这为临床治疗、预后及进一步研究提供重要的实验依据。 方玲玉 侯令密 陈艳茹 张振杨 胡璟骅 李金穗 谢少利 李静佳 刘家有 荣欣欣 荣欣欣 徐明飞 邓世山 周方方关键词:乳腺癌 EZRIN 敲减USP25对乳腺癌细胞生物学行为的影响 被引量:3 2020年 目的:探讨乳腺癌细胞中敲减泛素特异性蛋白酶25(USP25)后细胞生物学行为的改变。方法:采用慢病毒载体构建6条shRNA-USP25干扰序列(LV-shRNA-USP25-1~LV-shRNA-USP25-6),分别转染乳腺癌MCF-7细胞以干扰USP25的表达,并检测敲减效率,筛选出最佳干扰序列用于实验。采用CCK8试剂盒法、Transwell侵袭实验、流式细胞术检测敲减USP25后乳腺癌细胞增殖、侵袭能力及凋亡的变化。结果:KD1组(转染LV-shRNA-USP25-1组)为干扰效率最高的序列,USP25蛋白和mRNA的敲减率分别为57.8%、58.3%(P<0.001);敲减USP25后乳腺癌MCF-7细胞增殖、侵袭能力受到抑制,且出现明显凋亡(P<0.001)。结论:USP25可能与乳腺癌细胞的增殖、侵袭及凋亡有密切关系,其可能在乳腺癌的恶性进展中扮演着重要角色。 荣欣欣 侯令密 刘家有 李金穗 谢少利 杨懿 黄红梅 李静佳 邓世山关键词:乳腺癌 细胞增殖 凋亡 免疫组化法和qPCR技术检测FBP1在结直肠腺癌中的表达及临床意义 被引量:1 2017年 目的:探讨果糖-1,6-二磷酸酶1(fructose-1,6-bisphosphatase 1,FBP1)基因在结直肠腺癌的表达水平及其与临床病理特征的联系。方法:q PCR技术检测川北医学院附属医院2014年9月至2016年2月新鲜结直肠腺癌组织及癌旁正常组织46例中FBP1基因的表达水平。免疫组化方法检测川北医学院附属医院2015年7月至2016年6月结直肠腺癌及癌旁对照组织的蜡块标本30例中FBP1的表达及分布情况。结果:q PCR技术检测结果表明,FBP1基因在结直肠腺癌组织中的表达水平低于在癌旁正常组织中的表达水平(t=2.934,P=0.006);FBP1基因在结直肠腺癌组织中的表达水平随着结直肠腺癌肿瘤的恶性程度的增加(F=13.267,P=0.000)、Duke’s分期的增加(F=15.864,P=0.000)、远处淋巴结的转移(t=14.285,P=0.000)而降低;FBP1基因在男性患者的结直肠腺癌组织中的表达水平高于其在女性患者的表达水平,但差异无统计学意义(t=1.294,P=0.165)。免疫组化结果显示FBP1在结直肠腺癌组织中低表达甚至缺失,而在癌旁正常组织中高表达,二者差异具有统计学意义(χ~2=19.461,P=0.000)。结论:FBP1基因及蛋白质的低表达可能在结直肠腺癌的发生发展中有着重要的作用,是其潜在的治疗靶标。 刘家有 邓世山 朱剑军 侯令密 谢少利 黄波关键词:结直肠腺癌 免疫组化法 沉默CDC37抑制结肠癌细胞Lovo和Ls174T侵袭迁移 被引量:2 2017年 前期研究发现周期分裂蛋白37(cell division cycle 37,CDC37)的异常表达可能与结直肠腺癌的转移有关,但是其作用机制尚不清楚。本研究通过实时定量PCR和免疫印迹实检测CDC37在不同肠癌细胞中的m NRA和蛋白质表达水平,结果发现CDC37在结肠癌Lovo和Ls174T细胞中表达较高。siRNA靶向沉默CDC37表达后,细胞侧向迁移能力、垂直迁移能力、侵袭活性均显著降低。实时定量PCR和免疫印迹实验结果发现,敲除CDC37后,MMP9和MMP2的m NRA和蛋白质表达水平均显著下调。以上研究结果表明,CDC37通过调节MMP9和MMP2等侵袭转移关键分子的表达在结肠癌细胞侵袭转移过程中发挥关键作用。 朱剑军 燕芳 陶佳 朱晓华 刘家有 邓世山关键词:结肠癌 肿瘤转移 Delta/Notch样表皮生长因子相关受体在三阴性乳腺癌中的表达及临床意义 被引量:1 2019年 目的探讨Delta/Notch样表皮生长因子相关受体(DNER)在三阴性乳腺癌(TNBC)中的表达情况,并分析其与患者的临床病理特征之间的关系。方法收集2017年3月至2018年3月川北医学院附属医院收治的39例TNBC患者的癌组织及癌旁正常组织标本进行回顾性研究,运用组织切片免疫组织化学法检测DNER蛋白表达水平,用RT-PCR检测组织中DNER mRNA表达水平。用配对χ^2检验(McNemar检验)比较乳腺癌组织及癌旁正常组织中DNER阳性率的差异,用χ^2检验或Fisher精确概率法分析DNER蛋白表达与患者临床病理特征之间的关系。用配对t检验比较DNER mRNA在乳腺癌组织与癌旁正常组织中的表达水平,用方差分析和独立样本t检验分析DNER mRNA表达与乳腺癌患者临床病理特征的关系,两两比较用LSD法。结果DNER蛋白在TNBC组织中的阳性表达率为82.1%(32/39),高于在癌旁正常组织中的阳性表达率(23.1%,9/39)(P<0.001)。DNER蛋白在TNBC组织中的阳性表达率与肿瘤直径(χ^2=6.121,P=0.026)、淋巴结转移(P=0.005)及TNM分期(P=0.030)有关。RT-PCR检验结果显示,DNER mRNA在TNBC组织中的相对表达量高于其癌旁正常组织(0.768±0.067比0.487±0.041,t=4.793,P<0.001);DNER mRNA在TNBC组织中的表达与肿瘤直径、TNM分期及淋巴结转移有关(F=8.392,P=0.001;t=5.178,P<0.001;t=4.925,P<0.001)。结论DNER蛋白及mRNA的高表达与TNBC的发生、发展及转移密切相关,可能是乳腺癌诊断和治疗的潜在靶标。 黄红梅 荣欣欣 李静佳 谢少利 杨懿 周方方 李金穗 侯令密 邓世山 刘家有关键词:淋巴转移 肿瘤分期 泛素特异蛋白酶20在乳腺癌组织中的表达及其临床意义 被引量:5 2017年 目的:通过分析乳腺癌的临床病理特征及观察乳腺癌组织细胞中泛素特异蛋白酶20(ubiquitin-specific proteases20,USP20)的表达情况,探讨二者间的关系及USP20的临床意义。方法:收集经临床病理确诊为浸润性导管癌的乳腺癌组织标本42例,同时选取癌旁相对正常组织作为对照;采用免疫组织化学方法检测USP20在乳腺癌和癌旁组织中的表达情况。结果:42例乳腺癌组织中,27例(64.29%)USP20呈阳性表达,与癌旁组织阳性表达(21.43%)相比显著增加(χ~2=15.75,P<0.01);病理分型中,低分化与高、中分化的总和比较,USP20阳性表达率明显增加(P<0.05);临床分期越晚,USP20阳性表达率越高(χ~2=8.571,P<0.05)。结论:乳腺癌组织中USP20阳性表达与肿瘤分化程度、临床分期有密切关系,提示USP20与乳腺癌恶性程度成正相关,这为临床治疗、预后及进一步研究提供重要的实验依据。 周方方 朱晓华 荣欣欣 刘家有 杨懿 候令密 谢少利 邓世山关键词:乳腺癌 分化程度 Cdc37在结直肠腺癌中的表达及临床意义的研究 被引量:4 2014年 目的研究Cdc37基因的表达水平与结直肠腺癌发生、发展的相关性。方法收集26例结直肠腺癌组织及对照癌旁正常组织,用半定量RT-PCR技术检测Cdc37基因的表达水平并进行分析。结果 Cdc37基因在结直肠腺癌组织中的表达水平低于其在对照癌旁结直肠组织中的表达水平(P=0.012);Cdc37基因在有远处淋巴结转移的结直肠腺癌组织中的表达水平低于其在无远处淋巴结转移的结直肠腺癌组织中的表达水平(P=0.010);随着结直肠腺癌的恶性程度的增加,其表达水平有下降的趋势,但差异无统计学意义(P=0.562)。≥60岁患者的结直肠癌组织中Cdc37的表达水平高于<60岁患者,但差异无统计学意义(P=0.619);Cdc37基因表达水平差异与结直肠腺癌患者的性别无相关性(P=0.054)。结论 Cdc37基因在结直肠腺癌中的表达水平显著降低,可能与结直肠腺癌的发生、发展有关。 刘家有 熊东 王卓娜 荣欣欣 朱剑军关键词:基因 基因表达 聚合酶链反应 UBE3A影响乳腺癌浸袭能力的机制及其与ANXA2关系的研究 第一部分ANXA2单核苷酸多态性(SNPs)与乳腺癌发病机制的研究目的:通过PCR-SSCP及双向测序检测人体乳腺癌组织中ANXA2基因单核甘酸多态性(SNPs),探讨其与乳腺癌发病机制的关系。方法:收集川北医学院附属医... 刘家有关键词:乳腺癌 SNPS PCR-SSCP 碱基突变 激光扫描共聚焦显微镜 亚细胞定位 文献传递 下调泛素蛋白连接酶E3A表达对三阴性乳腺癌细胞生物学行为的影响 被引量:2 2018年 目的:探讨降低泛素蛋白连接酶E3A(UBE3A)的表达对三阴性乳腺癌细胞生物学行为的影响。方法:采用慢病毒载体分别将构建的3条UBE3A shRNA序列转染人三阴性乳腺癌细胞株MDAMB-231,检测干扰效率后,筛选出干扰效率最高的序列用于实验。分别采用CCK8法、Transwell小室实验、流式细胞术观察MDA-MB-231细胞经所选用的UBE3A shRNA序列转染后侵袭能力、增殖能力与细胞周期的变化,以转染阴性对照组序列和无处理的MDA-MB-231细胞作为阴性对照及空白对照。结果:成功构建UBE3A shRNA慢病毒表达载体并筛选出干扰率最高的UBE3A shRNA序列(UBE3A基因和蛋白表达抑制率分别为89.5%、45.3%)。与空白对照组细胞比较,下调UBE3A的MDAMB-231细胞的增殖、侵袭能力均明显降低,且细胞周期出现明显的S期阻滞(均P<0.05);阴性对照组细胞各项观察指标无统计学差异(均P>0.05)。结论:下调UBE3A表达能诱导三阴性乳腺癌细胞的细胞周期阻滞,从而抑制其增殖与侵袭能力,提示UBE3A在三阴性乳腺癌细胞的恶性生物学行为中发挥了重要作用。 谢少利 王碧娟 刘家有 李金穗 赵小波 邓世山 侯令密关键词:三阴性乳腺癌 RNA干扰 细胞周期